范文成，葉曉紅，常美玲，粘立軍，張國良

(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035)

氫溴酸右美沙芬片為國家批準生產(chǎn)的仿制藥，主藥為氫溴酸右美沙芬，輔料為乳糖、淀粉、羧甲淀粉鈉。該品種為鎮(zhèn)咳類藥品，用于上呼吸道感染、支氣管炎等引起的咳嗽，療效顯著，各企業(yè)生產(chǎn)量大，檢驗方法多為紫外分光光度法。在檢驗工作中，筆者發(fā)現(xiàn)檢驗結(jié)果重復性差、波動大，有些批次含量轉(zhuǎn)移率低。為此，筆者對可能影響含量測定結(jié)果的因素進行了考察，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(美國Waters);紫外分光光度計(日本島津公司);AG285型電子天平(梅特勒－托利多儀器有限公司)。氫溴酸右美沙芬對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100201－200502，供含量測定用);乙腈為色譜純，其余為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 影響因素試驗

2.1.1 樣品制備

按處方工藝分別制備空白樣品和正常樣品，樣品分制粒和不制粒兩種，用蔗糖代替乳糖，其他不變，制備同樣的樣品。共計8個樣品，即乳糖空白(不制粒)、乳糖空白(制粒)、蔗糖空白(不制粒)、蔗糖空白(制粒)、乳糖樣品(不制粒)、乳糖樣品(制粒)、蔗糖樣品(不制粒)、蔗糖樣品(制粒)。

2.1.2 空白輔料對測定結(jié)果的影響

對不同輔料制備的空白樣品用紫外分光光度法[1]分別進行了測定。結(jié)果見表1。可見，輔料對測定結(jié)果影響顯著，最高可達16%，制粒后的吸收比不制粒高。

表1 不同輔料對測定結(jié)果的影響

2.1.3 不同檢驗溶劑(水)對測定結(jié)果的影響

對不同的純化水溶解的樣品用紫外分光光度法進行了含量測定。結(jié)果見表2。可見，高純水的含量最低，樂百氏純凈水的含量最高;不制粒的蔗糖樣品和乳糖樣品含量無區(qū)別，制粒后蔗糖比乳糖高約6%(樂百氏水);乳糖制粒后含量降低9%蔗糖制粒后含量降低3%(樂百氏水)。試驗過程中還發(fā)現(xiàn)，用高純水和自制純凈水測定的2個平行樣結(jié)果差異大，而用樂百氏純凈水測定的結(jié)果平行性好(RSD≤2%)，故確定用樂百氏純凈水進行含量測定。

表2 不同檢驗用水對含量測定結(jié)果的影響(%)

2.1.4 改進檢驗用水后效果

對改進檢驗用水后生產(chǎn)的8批氫溴酸右美沙芬片進行了含量測定。結(jié)果表明，所有批次含量轉(zhuǎn)移率均在95.0%以上，且測定結(jié)果平行、準確性好。

2.2 含量測定(高效液相色譜法)

2.2.1 色譜條件[2]

色譜柱:C18柱(150mm×4.6mm，5μm);流動相:以含 0.007mol/L磺基丁二酸鈉二辛酯和0.007 mol/L硝酸銨的乙腈－水(70∶30)溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至3.4);檢測波長:280 nm;進樣量:20 μL。理論板數(shù)按氫溴酸右美沙芬計算應不低于2 000，拖尾因子不得大于 2.5。

2.2.2 溶液制備

精密稱取氫溴酸右美沙芬對照品適量，用流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.15 mg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取氫溴酸右美沙芬片20片，研細，精密稱取適量(約相當于氫溴酸右美沙芬37.5 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相適量，超聲使溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗:按處方制備空白樣品，照供試品溶液的處理方法制備陰性對照品溶液。取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果見圖1，表明陰性對照品溶液在氫溴酸右美沙芬色譜峰位置處無相應峰出現(xiàn)，表明輔料對樣品含量測定無影響。

圖1 高效液相色譜圖

標準曲線繪制:取氫溴酸右美沙芬對照品適量，精密稱定，用流動相溶解并定量稀釋成每1 mL約含1 mg的溶液，搖勻，作為對照品貯備液。分別精密量取該溶液 5.0，2.0，1.0，0.5 mL，置 25 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。取對照品貯備液及上述稀釋后溶液各20 μL，注入液相色譜儀。以質(zhì)量濃度 X(g/L)對峰面積 Y作標準曲線，得線性回歸方程 Y=6 644 184 X －4 745.92，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，氫溴酸右美沙芬質(zhì)量濃度在0.02058～1.029 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，重復進樣6次，每次20 μL，記錄氫溴酸右美沙芬峰面積。結(jié)果的 RSD為0.53%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，在 0，2，4，6，8，12 h 時分別進樣 20 μL，記錄氫溴酸右美沙芬峰面積。結(jié)果的 RSD為1.42%(n=6)，表明供試品溶液在室溫放置12 h穩(wěn)定。

回收率試驗:取對照品溶液適量，按供試品制備方法制備供試品溶液，平行制備 6份，分別進樣 20 μL。結(jié)果平均回收率為99.75% ，RSD 為 1.10%(n=6)。

重復性試驗:精密稱取同一批樣品5份，按擬訂的方法分別進行處理，測定。結(jié)果平均含量為99.6%，RSD為1.20%(n=5)，表明方法的重復性很好。

2.2.4 樣品含量測定

取樣品10批，按擬訂的方法制備供試品溶液。取對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標法按峰面積計算樣品中氫溴酸右美沙芬的含量。結(jié)果含量平均值為100.5%，RSD為2.13%(n=10)，表明樣品批次間差異小。

3 討論

對2007年至2009年生產(chǎn)的4批氫溴酸右美沙芬片進行了重復性試驗(每個批號做8個樣品)，結(jié)果表明氫溴酸右美沙芬片同一批次含量的波動明顯，差異超過5%，重復性差。對以往生產(chǎn)的19批氫溴酸右美沙芬片含量轉(zhuǎn)移率進行了統(tǒng)計，結(jié)果19批成品中有9批含量轉(zhuǎn)移率低于95.0%。

用紫外分光光度法測定含量時，輔料空白均有吸收，按主藥100%投料制成片后，總體的含量轉(zhuǎn)移率并未超出100%，可能在生產(chǎn)過程中主藥與輔料發(fā)生作用，使整體的吸光度無太大變化，對不同廠家的輔料是否均有干擾有待進一步驗證。

使用不同的檢驗用水對測定結(jié)果有明顯影響，樂百氏純凈水穩(wěn)定性較好，結(jié)果較高。氫溴酸右美沙芬溶解度與水的pH或水的制備工藝可能有一定關(guān)系，在現(xiàn)有檢驗方法下，用樂百氏純凈水進行檢驗，結(jié)果重現(xiàn)性好。

曾考察了用流動相和水分別溶解樣品，結(jié)果表明流動相超聲溶解樣品，比水提取完全，故選用流動相作為溶劑。

本試驗中，還建立了高效液相色譜法測定氫溴酸右美沙芬片的含量，方法可靠，結(jié)果客觀、準確，不受輔料干擾，可用于該品種的質(zhì)量控制。

[1]YBH19152006，國家藥品標準[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:558.