程 民

(安徽省淮北市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 淮北 235000)

十五味龍膽花丸是由白花龍膽、檀香、廣棗、肉豆蔻、沉香等15味藥組方，具有清熱理肺、止咳化痰的功效，臨床用于支氣管炎和肺氣腫、咳嗽氣喘、聲嘶音啞[1]。原標(biāo)準(zhǔn)中只有丸劑的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。為全面控制質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[2－5]，建立了測(cè)定方中主藥廣棗中原兒茶酸含量的高效液相色譜(HPLC)法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 Serise高效液相色譜儀，VWD紫外可變檢測(cè)器，Agilent 1100自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent液相色譜工作站;日本島津UV－2401PC型紫外可見分光光度計(jì);Mettler AE－240型電子分析天平(0.01 mg)。原兒茶酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110809－200604);十五味龍膽花丸(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)分別為20080203，20080209，20080318);甲醇為色譜純，水純化水，冰乙酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Technologies Eclipse XDB C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.1% 冰乙酸(10 ∶90);檢測(cè)波長:260 nm;柱溫:25 ℃;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取原兒茶酸對(duì)照品19.51 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為195.1 μg/mL的對(duì)照品貯備液。取本品約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇30 mL，稱定質(zhì)量，浸漬過夜，超聲處理30 min，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。另按處方比例和供試品溶液制備方法制成不含廣棗的陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下3種溶液，在選定條件下，測(cè)得原兒茶酸對(duì)照品的保留時(shí)間約16.1min;供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同的色譜峰，且原兒茶酸與雜質(zhì)分離度大于1.5;理論板數(shù)按原兒茶酸峰計(jì)算應(yīng)不小于3 000;陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取質(zhì)量濃度為 195.1 μg/mL 的對(duì)照品 貯 備 液 1.0，2.0，3.0，5.0，8.0，10.0 mL，分別置 100 mL 量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20 μL注入液相色譜儀，按上述條件測(cè)定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=78.131 7 X －1.965 1，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，原兒茶酸質(zhì)量濃度在1.95～19.51 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣8次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為1.3%(n=8)。表明方法精密度好，符合含量測(cè)定要求。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品(批號(hào)為20080203)溶液，分別于0，1，2，4，6，8，10，12 h 時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD 為 1.36(n=8)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)(批號(hào)為20080203)樣品6份，每份約2 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為0.095 4 mg/g，RSD=0.13%(n=6)，表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量樣品(批號(hào)為20080203)6份，每份約1 g，精密稱定，精密加入原兒茶酸對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度分別為3.00，3.75，4.50 μg/mL)，置具塞錐形瓶中，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 原兒茶酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，每批約2 g，精密稱定，依法測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為20080203，20080209，20080318的樣品中原兒茶酸平均含量分別為0.095 4，0.096 4，0.097 6 mg/g。

3 討論

在供試品溶液制備時(shí)，比較了回流1 h與浸泡24 h后再超聲處理30 min，結(jié)果浸泡后再超聲，含量較回流法高，且方法簡(jiǎn)便、含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好、回收率高。

本法試驗(yàn)了不同的流動(dòng)相，通過比較不同體系流動(dòng)相的色譜行為，如甲醇 － 水(35∶65)、乙腈 － 水 －0.05%磷酸(15∶85∶1)、乙腈 －0.05 mol/L 磷酸二氫鉀(40∶60)、甲醇 －0.1%冰乙酸(10∶90)，并調(diào)整各流動(dòng)相比例及流速，最后選擇峰形好、分離度符合要求的甲醇－0.1%冰乙酸(10∶90)為流動(dòng)相。

[1]WS－58(Z－125)－2002，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·藏藥(第一冊(cè) )[S].

[2]趙志軍，劉鐵剛.血尿膠囊薄層鑒別及原兒茶酸含量測(cè)定方法的研究[J].中成藥，2006，28(4):604 － 606.

[3]陳 勇，方翠芬，向智敏，等.RP－HPLC測(cè)定勒馬回膠囊中原兒茶酸的含量[J].中成藥，2007，29(12):1 867 －1 869.

[4]陳樹和，孫麗娟，劉紅兵，等.不同產(chǎn)地牛至藥材中原兒茶酸的含量分析[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(3):179 －181.

[5]鄧 華，賴海容.婦血康顆粒中原兒茶酸含量測(cè)定方法改進(jìn)[J].中國藥業(yè)，2008，17(20):36.