何樂春 重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗(yàn)中心（重慶 401121）

0.引言

血漿或血清蛋白質(zhì)是血漿固體成分中含量最多、組成復(fù)雜、功能廣泛的一類化合物。檢測(cè)許多疾病狀態(tài)下的總蛋白水平變化具有重要意義。總蛋白升高往往是由于一種或多種免疫球蛋白增加所引起的，如：急性失水，代謝鈉丟失，多發(fā)性骨髓瘤等；總蛋白降低大多是由于白蛋白的降低所引起，如：水鈉潴留，長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良，嚴(yán)重結(jié)核，甲亢和惡性腫瘤等。因此，臨床上檢測(cè)血清總蛋白及其組分，不僅可作為評(píng)價(jià)營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及消化功能的指標(biāo)，而且對(duì)肝臟疾病、腎臟疾病、出血性疾病和免疫性疾病等的診斷、治療和愈后判斷有重要價(jià)值。

我們對(duì)于總蛋白試劑盒試劑合理性和標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確性的研究，不僅可以有效地節(jié)約原材料、降低生產(chǎn)成本、規(guī)范行業(yè)，對(duì)臨床檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性也大有幫助。

實(shí)驗(yàn)原理

雙縮脲法：在堿性條件下，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵與二價(jià)銅離子發(fā)生雙縮脲反應(yīng)生成紫紅色的絡(luò)合物，其中每個(gè)銅離子與五至六個(gè)肽鍵絡(luò)合，在540nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，且呈色強(qiáng)度在一定濃度范圍內(nèi)與肽鍵數(shù)量即蛋白質(zhì)含量成正比，經(jīng)與同樣處理的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求得蛋白質(zhì)的含量。該法為臨床測(cè)定血清總蛋白的首選方法。

1.材料和方法

編號(hào) 生產(chǎn)廠家名稱試劑盒1 中生北控生物科技股份有限公司試劑盒2 四川省邁克科技有限責(zé)任公司試劑盒3 上海榮盛生物技術(shù)有限公司試劑盒4 重慶百克醫(yī)療器械有限責(zé)任公司注：四種試劑盒所提供的標(biāo)準(zhǔn)液均為70.0g/L

表1. 總蛋白測(cè)定

混合均勻，在37℃下保溫10分鐘，以試劑空白管調(diào)零，在546nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度，得值。

1.1 儀器

半自動(dòng)生化分析儀

1.2 材料

選用四個(gè)廠家生產(chǎn)的總蛋白測(cè)定試劑盒，見下表。

1.3 方法

采用試劑盒1提供的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)液作為標(biāo)準(zhǔn)品，以試劑盒2、試劑盒3和試劑盒4生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)液作為樣品，分別嚴(yán)格按試劑盒1的使用說明書進(jìn)行操作，得到各樣品的測(cè)定值，以原試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)液濃度為真值，然后按以下公式計(jì)算各樣品的檢測(cè)誤差（以70.0g/L作為各樣品的真值）。

誤差=（︱測(cè)定值-70︱/70）×100%總蛋白測(cè)定方法：見表1。

2.結(jié)果

表2：

表3：

3.討論

目前，市場(chǎng)上有很多廠家生產(chǎn)的用于臨床上測(cè)定人血清總蛋白的總蛋白試劑盒，可謂品種繁多，但試驗(yàn)原理都是采用雙縮脲法，而且很多廠家在生產(chǎn)試劑盒的同時(shí)都相應(yīng)地生產(chǎn)了與其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品。盡管蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品是一個(gè)相對(duì)很穩(wěn)定的試劑，雙縮脲法的重復(fù)性也好，但各試劑盒對(duì)同一樣品的檢測(cè)仍存在誤差，誤差范圍很大，有的不足1%，有的已大于5%（但都在 ±10%以內(nèi)），這一范圍太寬，與臨床上正常人血清總蛋白在60～80g/L這一范圍存在的差異較大。從以上結(jié)果來看，試劑盒1和3生產(chǎn)的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品可以互換，而試劑盒1和2以及試劑盒1和4的標(biāo)準(zhǔn)品不能互換。但總的來看，各廠家生產(chǎn)的試劑盒試劑和標(biāo)準(zhǔn)品最好不要互換。

建議一：雙縮脲法是臨床上測(cè)定血清總蛋白質(zhì)首選最方便、最實(shí)用方法。雙縮脲試劑有不同配方，大多數(shù)加入灑石酸鉀鈉，與Gu2＋形成穩(wěn)定的絡(luò)合銅離子，以防止Gu（OH）2不穩(wěn)定形成沉淀。故建議酒石酸鉀鈉與硫酸銅之比不宜低于3：1。

建議二：各種血清蛋白與雙縮脲反應(yīng)顯色程度基本一致，不同蛋白質(zhì)特異性差異甚小。因此，可用混合血清、人血清白蛋白和牛血清白蛋白作標(biāo)準(zhǔn)。為規(guī)范目前市場(chǎng)上各廠家生產(chǎn)的試劑盒的質(zhì)量及配合臨床需要，建議標(biāo)準(zhǔn)品由國(guó)家統(tǒng)一生產(chǎn)發(fā)放。