袁文澤 ，賈 赟 ，蔡曉萍 ，肇慧君 ，孫艷峰 ，簡中友 ，胡傳偉 ，吳 斌

（1. 遼寧出入境檢驗檢疫局， 遼寧大連 116001；2. 大連機場出入境檢驗檢疫局，遼寧大連 116001）

為了明確野生候鳥是否是引起家禽爆發(fā)禽流感的直接原因，我們希望能夠在中國遼寧境內邊境地區(qū)遷徙侯鳥的禽流感病毒流行病學方面獲得更多的信息。為此，本研究對2009—2010年遼寧境內邊境地區(qū)遷徙的野生侯鳥進行了流感病毒的流行病學分析。

1 實驗材料

1.1 檢測樣本收集

從2009年1月到2010年12月，我們根據(jù)野生候鳥的遷徙時間和路線，在春秋兩季分別在遼寧省的大連、丹東、東港、營口、葫蘆島、錦州、盤錦等七個城市的野生候鳥聚居地（包括池塘、湖泊、海邊以及經(jīng)濟生產禽類附近的水禽管理區(qū)城），共采集了野生候鳥和水禽的血清樣品和拭子樣品，其中白鷺血清共80份，拭子樣品840份。

1.2 標準抗原和其他診斷試劑

各亞型禽流感病毒標準抗原H5、H7、H9亞型均購自中國農科院哈爾濱獸醫(yī)研究所國家禽流感診斷實驗室。禽流感病毒通用型熒光RT-PCR試劑盒和H5、H7、H9亞型禽流感病毒熒光RT-PCR試劑盒為深圳匹基生物科技公司產品。

2 實驗方法

2.1 血凝抑制試驗（HI）

HI實驗按照國家標準：高致病性禽流感診斷技術（GB/T 18936-2003）規(guī)定的操作方法進行。

2.2 病原檢測（采用禽流感病毒熒光RT-PCR方法）

按照GB/T18936-2003規(guī)定的熒光RT-PCR方法操作規(guī)程對離心后的拭子樣品進行檢驗。

3 實驗結果

3.1 遷徙候鳥類和水禽禽流感病毒的血清學調查

運用HI方法總共檢測了80份血清樣本的禽流感抗體水平，根據(jù)OIE建議的禽流感抗體陽性標準（HI抗體≥41og2），所檢測的血清樣本對H5、H7、H9等亞型都呈陰性（表1）。

表1 不同品種鳥類血凝抑制實驗結果（HI抗體≥41og2判為陽性）

3.2 遷徙候鳥類和水禽禽流感病毒的病原檢測

從2009到2010年，我們從840只野生候鳥和水禽中采集了840份咽拭子和肛拭子。采集拭子的鳥類品種和數(shù)量分別是：紅嘴鷗95、白鷺110、夜鷺75、綠頭鴨 68、鴻雁 82、灰雁 80、綠翅鴨 80、燕鷗 95、斑頭雁75。采集的各種野生候鳥和禽類拭子樣品通過2500 r/min離心10 min，按照GB/T18936-2003規(guī)定的熒光RT-PCR方法操作規(guī)程對離心后的拭子樣品進行檢驗，檢測結果均為陰性。

4 討論

自2003年以來，H5N1亞型高致病禽流感相繼在一些東南亞國家如柬埔寨、中國、印度尼西亞、日本、韓國、朝鮮、泰國、越南中暴發(fā)，導致嚴重的經(jīng)濟損失，并威脅人類的健康。據(jù)中國農業(yè)部發(fā)布的信息了解到從2004年1月到2005年8月，中國大陸（主要集中在東南部）共有17個省暴發(fā)了78次HPAI。中國科學家們就遷徙的鳥類是否是引起家禽禽流感大暴發(fā)的直接原因引起激烈爭論。盡管禽流感對于動物和人都具有重要的生態(tài)學意義，一些研究結果暗示野生鳥類為禽流感病毒的自然儲存宿主[1]。尤其是意大利，美國等國家在此方面研究較為深入，他們證實禽流感病毒的各亞型都已從野生水鳥中分離到，但是中國對于野生水鳥與禽流感病毒傳播之間的關系研究甚少，為了調查自2009年1月到2010年12月遼寧境內遷徙路線上的野生侯鳥在AIV傳播中的作用，我們進行了針對AIV的流行病學調查分析。我們總共調查了10種遷徙水鳥，它們分別聚居和遷徙在遼寧境內的候鳥遷徙路線上（大連，丹東，東港，葫蘆島，錦州，盤錦，營口）7個邊境地區(qū)的候鳥密集活動區(qū)內。所采集的血清樣本對H5、H7、H9亞型禽流感抗原都呈陰性，說明在被檢的野生候鳥樣品中，A型流感病毒（H5、H7、H9亞型）在野生候鳥體內可能以低水平傳播，以至用常規(guī)的血清學方法檢測不到抗體。也可能是由于某些禽流感病毒比較低的免疫原性，或者較低的敏感性以至不能檢測低水平的抗體滴度。

在病原檢測方面通過對2009—2010年遼寧境內10種遷徙野生候鳥和水禽采集肛拭子和咽拭子，進行禽流感病原檢測，未能檢測到H5、H7亞型高致病禽流感病毒。鑒于以上研究結果，雖沒有檢測高致病性禽流感病毒，但我們仍需要繼續(xù)深入研究中國境內遷徙水鳥與流感病毒的相互關系以證實家禽流感暴發(fā)和遷徙野生水鳥作為流感病毒自然儲存宿主之間的關系。

目前全球范圍的HPAI H5Nl的暴發(fā)與流行可能包含了“野鳥—家禽—野鳥—家禽”的反復性傳播鏈接，而且每次移轉宿主、每一個反復都可能使病毒的毒性增強。LPAI可以在家禽和野鳥中循環(huán)變異直到HPAI疫情發(fā)生。HPAI病毒對家禽及最初緣起的野鳥都是致命的。所以要密切監(jiān)測野鳥攜帶的禽流感毒株是否為高致病性的病毒，一旦發(fā)現(xiàn)要立即采取措施保護野生鳥類，同時也要嚴格控制毒株傳入家禽中。

5 結論

從研究和監(jiān)測數(shù)據(jù)表明，在2009—2010年期間，在遼寧邊境地區(qū)遷徙停留的野生候鳥和水禽未發(fā)現(xiàn)攜帶高致病性禽流感病毒。沒有直接證據(jù)證明遼寧境內和相鄰省區(qū)家禽發(fā)生的禽流感和高致病禽流感與遼寧邊境地區(qū)遷徙野生候鳥有直接關系，由于監(jiān)測時間和監(jiān)測樣品有限，未建立遼寧邊境地區(qū)野生候鳥和高致病性禽流感流行的直接關系，需進一步開展更大范圍的針對邊境地區(qū)野生候鳥攜帶高致病性禽流感的溯源性調查研究。

[1]Sharp C B，Kawaoka Y，Jones D J，et al.Coinfection of wild ducks by inflenza A distribution patterns and biological signif i cance. J Virol，1997，71 ：6128-6135.

[2]張?zhí)?，李峰，田國華，等.家禽和野鳥中高致病性禽流感的風險分析[J].中國動物檢疫，2009，26（2）：66-67.

[3]趙全邦，馬睿麟，蔡金山，等.青海湖地區(qū)野（候）鳥禽流感流行病學監(jiān)測[J].中國動物檢疫，2008，25（11）：39-40.