唐金華

（防城港市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣西 防城港 538021）

在臨床醫(yī)學(xué)實驗室中，檢驗操作經(jīng)歷了手工操作、半自動化分析和自動化分析的過程。目前自動化分析儀以高新技術(shù)為基礎(chǔ)，以提高準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度、高效率為特點，在現(xiàn)在臨床醫(yī)學(xué)實驗室中廣泛應(yīng)用[1]。供檢驗分析的抗凝血標(biāo)本，用傳統(tǒng)方法制備的抗凝劑遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足實驗室的要求，需采用EDTA鹽，因其對紅、白細(xì)胞形態(tài)影響很小，根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)公委員會(International committee standard of hematology，ICSH)1993年文件建議，血細(xì)胞計數(shù)用EDTA二鉀做抗凝劑，用量為 EDTA-K2·2H2O 1.5～2.2 mg，(4.45±0.85)μmol/ml血液。EDTA-Na與EDTA-K2對血細(xì)胞計數(shù)影響均較小，但二鈉溶解度明顯低于二鉀，有時影響抗凝效果，其他抗凝劑不適用于血細(xì)胞計數(shù)。為了快速方便的應(yīng)于臨床實驗室，因此近10年來，國內(nèi)外均有生產(chǎn)各抗凝管應(yīng)用于臨床實驗室。由于各種抗凝管都遵循了國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，選擇最適合做血細(xì)胞計數(shù)分析的EDTA二鉀做抗凝劑，只是用量和性狀不同，有的是干劑，有的是水劑，但是用的比例是一樣的。本文對三種抗凝管對血細(xì)胞及血細(xì)胞形態(tài)的影響進(jìn)行比較，結(jié)果顯示三種抗凝管對血細(xì)胞計數(shù)分析無影響，但通過制片進(jìn)行瑞氏染色，用光學(xué)顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)購買的烘干抗凝管對血細(xì)胞形態(tài)影響較大，血小板易凝集。探討的過程如下：

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇本院2011年1～4月門診健康體驗人群40份血液標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 日本東芝KX-21N血細(xì)胞分析儀，希森美康生物有限公司(無錫)提供的配套的溶血素、釋稀液、濃縮清洗液。日本生產(chǎn)OLYMPUS光學(xué)顯微鏡，由珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的瑞氏-吉姆薩染液。

1.3 自制抗凝劑EDTA二鉀的制備 用分析天平準(zhǔn)確稱量EDTA-K2·2H2O 10 g，倒入燒杯中，然后用蒸鎦水溶解，倒入帶1000 ml刻度的容量瓶中，先加少量蒸鎦水分多次溶解燒杯中的EDTA-K2，直到溶解完，然后加蒸鎦水到容量瓶中準(zhǔn)確定位到1000 ml，充分振蕩混勻，然后過濾，過濾后分裝到帶0.5 ml刻度的管中，每管加EDTA溶液10 μl，加蓋放室溫避光陰涼處備用[2]。

1.4 血片的制備 三種抗凝管的血液標(biāo)本進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)后，立即進(jìn)行制片，按照日常工作標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行制作，制作有頭有尾，厚薄適宜的血片。自制抗凝管、購買烘干抗凝管、購買液體真空抗凝管各推一張血片，待自然風(fēng)干后，進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色，用光學(xué)顯微鏡觀察其血細(xì)胞的形態(tài)。

1.5 血細(xì)胞計數(shù)的5項指標(biāo)檢測 采用門診健康體檢人群隨機(jī)選取的血標(biāo)本，按其要求的血量置于三種抗凝管中，充分混勻，觀察有無凝塊或微小凝集，上機(jī)進(jìn)行5個項目的檢測，檢測方法按標(biāo)準(zhǔn)操作程序規(guī)范操作分析。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 定量5項檢測指標(biāo)的資料配對采用t檢驗。

2 結(jié)果

自制抗凝管、購買烘干抗凝管、購買液體真空采血抗凝管，按其要求比例進(jìn)行采血，充分混勻后觀察均無凝集或微小凝塊現(xiàn)象。三種抗凝管做好血細(xì)胞計數(shù)分析及制片后，放置一段時間觀察血漿均無溶血現(xiàn)象發(fā)生。

自制抗凝管、購買烘干抗凝管、購買液體真空采血抗凝管對40份標(biāo)本進(jìn)行抗凝，抗凝血標(biāo)本5項血液指標(biāo)檢測結(jié)果見表1。由表1可見，自制抗凝管與購買烘干抗凝管及自制抗凝管與購買液體真空采血管經(jīng)過配對t檢驗比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，由此說明自制抗凝管對檢驗結(jié)果無影響，說明自制抗凝管的制備過程及用量是正確的。

對三種抗凝管抗凝血推制血片用瑞氏染液進(jìn)行染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察其細(xì)胞形態(tài)變化，三種抗凝管的抗凝血的血片均有一定比例的血細(xì)胞形態(tài)變化。在鏡下可見粒細(xì)胞的細(xì)胞核分葉不見或細(xì)胞腫脹，甚至可見少量白細(xì)胞裂解、血小板凝集等現(xiàn)象。但用購買烘干抗凝管抗凝的血標(biāo)本，其血細(xì)胞形態(tài)變化的比例高一點，可能是烘干抗凝的蒸鎦水被蒸發(fā)采用相同比例的血液，因其抗凝濃度較高，這是根據(jù)國際血液標(biāo)準(zhǔn)化委員會認(rèn)為抗凝劑濃度越大對血細(xì)胞形態(tài)影響越大，所以致血細(xì)胞形態(tài)變化較大一點。

表1 三種抗凝管抗凝血5項血液指標(biāo)檢測結(jié)果(n＝40)

3 討 論

在現(xiàn)在臨床醫(yī)學(xué)實驗室中，自動化儀器的廣泛應(yīng)用大大提高了工作效率，為了滿足快速、方便、減少負(fù)擔(dān)的需要，購買現(xiàn)成的抗凝管抗凝血標(biāo)本進(jìn)行血細(xì)胞分析，也成為臨床實驗室發(fā)展的必然結(jié)果。本文實驗結(jié)果表明：購買的兩種抗凝管與自制抗凝管進(jìn)行抗凝血液標(biāo)本檢測的5個項目的配對t檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。購買烘干抗凝管抗凝的血標(biāo)本對血細(xì)胞形態(tài)影響較大，且烘干的抗凝管有部分出現(xiàn)裂開的現(xiàn)象，在采血的過程中發(fā)現(xiàn)有漏血的，購買烘干抗凝管的管壁較厚不宜采血。自制抗凝管對檢測結(jié)果經(jīng)過比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且自制抗凝管成本低廉，價格不及其他兩種購買抗凝管的十分之一，原料來源廣泛，制作簡單，雖然需要人力來制作，但發(fā)現(xiàn)有問題也易改進(jìn)；購買液體真空采血抗凝管抗凝的血標(biāo)本，結(jié)果準(zhǔn)確，血細(xì)胞形態(tài)變化較小，快速、方便，但較昂貴且需血量多(1.8 ml血液)，不適合新生兒和嬰兒采血。

綜上所述，筆者自制的抗凝管對血細(xì)胞形態(tài)及PLT的影響較小，對檢驗結(jié)果無影響，原料來源廣泛，制備也較簡單，成本低廉，可適合各種人群(包括新生兒、嬰幼兒、未成年人、成年人)采血進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)分析，具有較高的使用或推廣價值。

[1]蔣廷武.加強(qiáng)檢驗與臨床溝通以促進(jìn)標(biāo)本采集質(zhì)量的提高[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,2006,5(7):128-129.

[2]葉應(yīng)嫵,王毓三,申小瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:780-781.