林 靜,朱秀梅,李 楠,張金庫

(1.承德醫(yī)學院,河北承德 067000;2.吉林大學南湖校區(qū)醫(yī)院,吉林長春 130012;3.保定市第一中心醫(yī)院,河北保定 071000）

根據(jù)基因表達分析,給幾種癌定義出了新的亞型,其中乳腺癌從基因角度鑒定出五個亞型:管腔A型(luminal subtype A）,管腔B型(luminal subtype B）,HER-2過表達型(HER-2 over-expression subtype）,正常乳腺樣型(normal breast-like subtype）和基底細胞樣型(basal-like subtype）。其中,基底細胞樣乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC）約占全部乳腺癌的8%-20%,且臨床預后較差[1]?；准毎麡尤橄侔┍磉_高分子量細胞角蛋白(如CK5/6）和/或EGFR等,而不表達ER、PR、HER-2[2]。目前,針對BLBC 這個特定亞型的抗癌治療尚未建立起來,因此,探尋其有效的分子治療靶點成為BLBC的研究熱點。本實驗通過免疫組化方法檢測 CD109、CD117、Vimentin在BLBC中的表達情況,以增加對該類乳腺癌亞型的認識。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集保定市第一中心醫(yī)院病理科2006年1月～2011年3月手術(shù)治療及會診的乳腺浸潤性導管癌患者的存檔蠟塊325例。標本均常規(guī)取材,中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,4μ m厚連續(xù)切片。根據(jù)被大多數(shù)學者所認同的BLBC判斷標準(ER、PR、HER-2呈三聯(lián)陰性,同時表達一種或一種以上的基底細胞型角蛋白和/或P63和/或EGFR）篩選出BLBC病例51例,同時從余下的274例非BLBC病例中隨機選出50例作為對照組。全部標本均經(jīng)病理證實,所有病例術(shù)前均未進行放療、化療及內(nèi)分泌治療。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 免疫組織化學采用EnVision二步法,抗體選用 CD109、CD117、Vimentin、ER、PR、HER-2、CK5/6、P63、EGFR。以上抗體與試劑除 CD109 購自武漢華瑞康生物科技有限公司,其余均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。陰性對照:以PBS替代第一抗體的乳腺浸潤性導管癌組織免疫組化染色結(jié)果為陰性對照。陽性對照:以預試驗中己證明陽性的乳腺癌組織切片免疫組化染色結(jié)果為陽性對照。

1.2.2 免疫組化染色結(jié)果的判定和分析 采用雙盲法觀察陽性反應,閱片由兩位高年資病理科醫(yī)師獨立觀察每張切片后分別做出判斷。ER、PR、p63陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞核,CD109、CD117、HER-2陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞膜,CK5/6陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞漿,EGFR陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞膜和細胞漿。判斷標準:根據(jù)陽性細胞占同類病變細胞數(shù)的比例和著色程度分為4級:(-）為腫瘤組織無細胞膜/漿/核染色或≤10%細胞膜/漿/核染色;(+）為＞10%腫瘤組織細胞膜/漿/核部分染色;(++）為＞10%腫瘤組織細胞膜/漿/核弱～中度完全染色;(+++）為＞10%腫瘤組織細胞膜/漿/核高度完全染色。其中HER-2蛋白(-）或(+）定性為陰性;(++）定性為可疑陽性;(+++）定性為陽性(參照《中華病理學雜志》2003年10月第32卷第5期《乳腺癌HER-2/neu的免疫組織化學檢測》中的HER-2陽性判斷標準）。CD109、CD117、ER、PR、p63、CK5/6、EGFR(-）定性為陰性,(+）～(+++）定性為陽性。

圖1 免疫組織化學染色 CD109陽性(×200）

1.3 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)結(jié)果采用統(tǒng)計軟件SPSS16.0進行統(tǒng)計分析,組間率比較采用 χ2檢驗進行分析,以 α=0.05作為檢驗水準,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

免疫組化染色CD109蛋白主要表達于BLBC腫瘤組織的細胞膜上,非BLBC腫瘤組織不著色。BLBC組和非 BLBC組中CD109、CD117、Vimentin陽性表達率詳見表1。結(jié)果采用 χ2檢驗進行組間陽性率的比較,其中CD109的組間率比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。CD117、Vimentin的比較差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。CD109陽性組與CD109陰性組在組織形態(tài)學上的比較,不具有統(tǒng)計學意義。上述結(jié)果提示,CD109在BLBC中的表達具有特異性,可以作為一個判斷BLBC的免疫標記;CD117、Vimentin在BLBC中的表達不具有特異性,尚不適宜做BLBC的判斷標記。

表1 CD109,CD117,Vimentin在 BLBC與非BLBC中的表達情況

3 討論

CD109蛋白是新近克隆到的一種細胞表面抗原,屬于含硫酯的α 2巨球蛋白/C3、C4、C5家族成員之一[4]。研究顯示,CD109表達于胎兒和成人CD34陽性的造血干和祖細胞,內(nèi)皮細胞,活化的T淋巴細胞和活化的血小板;另外,CD109可表達于肺、食管及子宮的鱗狀細胞癌[6-8]。最新的研究發(fā)現(xiàn),CD109還可表達于乳腺、涎腺、淚腺的肌上皮細胞及前列腺基底細胞和肌上皮組分的良性腫瘤[9]。目前,盡管CD109的生理功能尚不十分清楚,但在人類角化細胞中CD109能夠通過與TGF-β(transforming growth factor β）受體結(jié)合而抑制 TGF-β信號[10]。這些研究結(jié)果表明,可將CD109作為一種新的乳腺上皮細胞標記[11],另外,由于CD109是一種細胞表面蛋白,它很可能成為乳腺癌治療的一個潛在分子靶點。本研究中,CD109在BLBC中的陽性表達率為60.78(31/51）,而在非 BLBC中均呈陰性,提示CD109可以作為一個判斷 BLBC的免疫標記。另外,在CK5/6和或P63和或EGFR陰性的病例中有CD109陽性表達,提示檢測CD109可以協(xié)同CK5/6、P63、EGFR提高BLBC的檢出率。

CDl17是由c-kit原癌基因編碼的一種跨膜酪氨酸激酶受體,最初被用于胃腸道間質(zhì)瘤的檢測,現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它在多種細胞中均有表達,正常乳腺組織的上皮細胞可以表達,BLBC的腫瘤細胞也可以表達,相對于其它乳腺癌它在BLBC中的表達更常見,在mRNA檢測時,CD117是乳腺癌基底細胞樣表型最好的指標之一,但在免疫組化時其表達率較低[11]。本研究的BLBC組中CD117的免疫組化陽性表達率為11.76%(6/51）,沒有發(fā)現(xiàn)其表達與BLBC之間存在密切關(guān)系,這可能與我們所選的檢測方法及樣本量不足夠大有關(guān)。

Vimentin是最普遍的中間絲蛋白,在所有干細胞中表達,但分化過程中它可轉(zhuǎn)化成其他中間絲[12]。它參與細胞骨架的構(gòu)成,與細胞的膜系統(tǒng)廣泛連接。有研究表明可溶性Vimentin多肽還具有與細胞的核酸和組蛋白結(jié)合的能力,具有調(diào)控細胞生長、分裂的作用[13]。有文獻報道,Vimentin的陽性表達具有提示乳腺癌預后的意義與淋巴結(jié)的狀態(tài)相關(guān):Vimentin提示預后不良的情況僅存在于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的乳癌,不包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者[14]。有報道表明BLBC易發(fā)生內(nèi)臟特別是腦和肺轉(zhuǎn)移與Vimentin的高表達有關(guān)。我們的實驗發(fā)現(xiàn),Vimentin在BLBC中表達增高,但和其在非BLBC中的表達無顯著差異,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性,因此,本研究顯示Vimentin尚不能作為鑒別BLBC的特異性標記物。

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