關(guān) 峰,王 宏

(長(zhǎng)春市中心血站,吉林 長(zhǎng)春 130033）

人類(lèi)巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV）是普遍存在于自然界的DNA病毒,初次感染可通過(guò)體液接觸、輸血和器官移植傳播。它是一個(gè)重要的條件致病因子,在免疫功能正常的健康人群中常引起輕微或無(wú)癥狀感染,而對(duì)于免疫功能低下或缺陷的患者,原發(fā)感染或病毒潛伏感染后,可引起嚴(yán)重的甚至是致死性的疾病。在器官移植、骨髓移植、免疫缺陷患者以及免疫抑制劑治療的患者中,HCMV感染是高發(fā)病率與致死率的重要原因〔[1-2]。胎兒感染可引起新生兒黃疸、膽道畸形等。近年來(lái)的研究表明,人類(lèi)巨細(xì)胞病毒與胃腸道疾病、動(dòng)脈粥樣硬化有一定的關(guān)系[3-4]。HCMV感染途徑除密切接觸、母嬰傳播和器官移植等外,輸血也是HCMV感染很重要的途徑。為了解長(zhǎng)春地區(qū)準(zhǔn)獻(xiàn)血人群人類(lèi)巨細(xì)胞病毒(HCMV）的感染現(xiàn)狀,為臨床安全輸血提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)對(duì)3 989名經(jīng)體格檢查、血液檢驗(yàn)合格的18-45周歲的健康公民(準(zhǔn)獻(xiàn)血者）的血液樣本進(jìn)行HCMV-DNA測(cè)定,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

2008年1月-2009年12月期間,在長(zhǎng)春市中心血站進(jìn)行體檢的準(zhǔn)獻(xiàn)血人員3989例,其中男2420例,女1569例;年齡為18-45周歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器 美國(guó)ABI StepOne熒光定量PCR儀。

1.2.2 試劑 DNA提取試劑為美國(guó)Invitrogen DNA Isolation試劑盒;PCR擴(kuò)增試劑為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的HMCV-DNA熒光定量檢測(cè)試劑盒。

1.2.3 DNA提取 留取受試者靜脈全血5 ml,使用DNA提取試劑盒按照說(shuō)明書(shū)流程操作,從全血中提取基因組DNA。

1.2.4 HMCV-DNA定量檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù),嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)操作。PCR擴(kuò)增:37℃5 min,94℃1 min,然后95 ℃5 s、60 ℃30 s,40個(gè)循環(huán),60℃采集熒光信號(hào)。結(jié)果判定,以樣本DNA含量≥1×102拷貝/μ l為陽(yáng)性結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 準(zhǔn)獻(xiàn)血者血HCMV-DNA檢出率在3989例準(zhǔn)獻(xiàn)血者血液樣本中檢測(cè)出HCMV-DNA陽(yáng)性135例,陽(yáng)性率為3.38%。

2.2 獻(xiàn)血者血HCMV-DNA陽(yáng)性者年齡分布 長(zhǎng)春地區(qū)135例HCMV-DNA陽(yáng)性者各年齡段分布見(jiàn)表1。經(jīng)卡方檢驗(yàn)各年齡段HCMV-DNA陽(yáng)性率存在明顯差異,χ2=33.37,υ=(4-1）*(2-1）=3,大于χ20.005,3=12.84,P＜0.005。

表1 長(zhǎng)春地區(qū)準(zhǔn)獻(xiàn)血者HCMV-DNA陽(yáng)性年齡分布

2.3 準(zhǔn)獻(xiàn)血者血HCMV-DNA陽(yáng)性者性別分布長(zhǎng)春地區(qū)135例HCMV-DNA陽(yáng)性者性別分布見(jiàn)表2。經(jīng)卡方檢驗(yàn)HCMV-DNA陽(yáng)性率無(wú)性別差異,χ2=0.488 8,υ=1,小于 χ20.05,1=3.84,所以P＞0.05。

表2 長(zhǎng)春地區(qū)準(zhǔn)獻(xiàn)血者HCMV-DNA陽(yáng)性性別分布

2.4 準(zhǔn)獻(xiàn)血員血HCMV-DNA陽(yáng)性者職業(yè)分布農(nóng)民HCMV-DNA陽(yáng)性率較高,在HCMV-DNA陽(yáng)性者中構(gòu)成最大,經(jīng)卡方檢驗(yàn)存在明顯差異,(χ2=27.15,P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表2 不同職業(yè)準(zhǔn)獻(xiàn)血員血HCMV-DNA陽(yáng)性率及HCMV-DNA陽(yáng)性職業(yè)構(gòu)成

3 討論

輸血是特定疾病治療的重要環(huán)節(jié),在特定情況下,對(duì)搶救患者生命起著不可替代的重要作用。自1900年奧地利維也納大學(xué)的Landsteiner發(fā)現(xiàn)了人類(lèi)紅細(xì)胞抗原,輸血已經(jīng)成為臨床治療的重要組成部分,但是100多年來(lái)也出現(xiàn)過(guò)因輸血傳染疾病的事情。因此血液制品的安全性非常重要。

巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus,CMV）在自然界普遍存在,人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV）在人群中感染非常普遍。在孕婦原發(fā)或復(fù)發(fā)HCMV感染可引起圍產(chǎn)期感染或新生兒宮內(nèi)感染,導(dǎo)致胎兒畸形、智力低下和發(fā)育遲緩等,嚴(yán)重者可引起全身感染綜合征。我國(guó)是HCMV感染的高發(fā)地區(qū),有報(bào)道孕婦血清抗HCMV-IgG陽(yáng)性率高達(dá)94.6%[5],重癥HCMV感染病死率高達(dá) 30%。HCMV初次感染可通過(guò)體液接觸、輸血和器官移植、母嬰垂直傳播。HCMV感染后在正常人一般無(wú)臨床表現(xiàn),絕大多數(shù)為隱性感染,但免疫系統(tǒng)缺陷患者,如:器官移植者、癌癥患者、新生兒尤其是早產(chǎn)兒、低出生體重兒等均是高危人群。HCMV一旦侵入人體,將以潛伏感染的狀態(tài)長(zhǎng)期或終身存在于體內(nèi),對(duì)于一些免疫功能不正常的特殊人群,通過(guò)輸血傳播的CMV(transfusion transmission of CMV,TTCMV）可激活潛伏狀態(tài)的HCMV形成復(fù)發(fā)性感染,導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床結(jié)局,甚至死亡。

HCMV感染的發(fā)生與地區(qū)、環(huán)境、居住條件、經(jīng)濟(jì)狀況、性別、年齡等有關(guān)[6]。我國(guó)人群感染率＞80%[7]。在我國(guó),HCMV不作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目,隨著癌癥和器官移植患者的增多,基于我國(guó)HCMV流行狀況,對(duì)輸血傳播HCMV引起感染應(yīng)給予高度重視,特別是針對(duì)高危人群。本文對(duì)3989例準(zhǔn)獻(xiàn)血員進(jìn)行HCMV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率為3.38%;各年齡段存在顯著差異,18-23歲年齡段明顯高于其它年齡段;無(wú)性別差異;農(nóng)民感染率較高。準(zhǔn)獻(xiàn)血員中存在HCMV感染,應(yīng)嚴(yán)格掌握輸血適應(yīng)癥,對(duì)于高危人群輸血時(shí),應(yīng)對(duì)血液進(jìn)行HCMV-DNA檢測(cè),避免發(fā)生TTCMV。

實(shí)驗(yàn)室主要檢測(cè)HCMV特異性IgM和IgG抗體,且可區(qū)分近期和既往感染。但靜脈用丙種球蛋白和非篩選的血液成分的應(yīng)用,使被檢測(cè)者被動(dòng)獲得IgG,干擾了檢測(cè)結(jié)果。因而HCMV的自身蛋白(抗原）和DNA是更特異、更敏感的早期診斷指標(biāo)。目前HCMV感染的標(biāo)準(zhǔn)仍是病毒培養(yǎng)。血液中的白細(xì)胞特別是單核細(xì)胞是HCMV的載體,白細(xì)胞去除越早越好,最大限度地去除血液或血液成分中的白細(xì)胞,可大大降低輸血引起的HCMV傳播。

[1]Gaytant MA,Steegers EA,Semmolrot BA,et al.Cogenital cytomegalovirus infection:review of the epidemiology and outcome[J].Obstet Gynecol surv,2002,57:245.

[2]Boeckh MW,Leisenring SR,Riddell RA,et al.Late cytomegalovirus disease and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant recipients:im portance of viral load and T cell im munity[J].Blood,2003,101:407.

[3]胡雪影,黎銳平,王明麗.人巨細(xì)胞病毒感染與胃腸道疾病的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].國(guó)際消化病雜志,2007,1(27）:47.

[4]張美英,高玉林,何俊瑛.人巨細(xì)胞病毒感染與動(dòng)脈粥樣硬化[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)腦血管疾病分冊(cè),2005,11(13）:870.

[5]金 奇,主編.醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2001:781.[6]沈曉明,王衛(wèi)平,主編.兒科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:127.

[7]陳俊青,劉霆.巨細(xì)胞感染檢測(cè)方法的現(xiàn)狀[J].中國(guó)輸血雜志,2005,18(5）:428.