鄭遜

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種常見(jiàn)的以關(guān)節(jié)炎癥和滑膜細(xì)胞增殖為特征的全身性自身免疫性疾病，臨床上以多關(guān)節(jié)損傷為主要表現(xiàn)，具有較高致殘性。本病至今發(fā)病機(jī)制尚未被闡明，眾多資料表明該病與免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能紊亂有關(guān)，多種細(xì)胞因子的參與是引起RA發(fā)生的重要因素。而且近年研究證實(shí)一些炎性細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-a)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、IL-18、IL-6 等在 RA 滑膜病變中起核心作用。本研究旨在探討IL-20在RA患者血清中的表達(dá)水平，并分析其影響因素。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2009年1月至2010年1月在我科就診的55例 RA患者，年齡35～72歲，平均(51.37±12.32)歲。其中女42例，年齡36～71歲，平均(54.47±11.26)歲;男13例，年齡35～72歲，平均(48.62±13.28)歲。所有患者均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年修訂的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，均未經(jīng)正規(guī)治療，采血前無(wú)近期服用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑治療史，且未合并感染、腫瘤及其他結(jié)締組織疾病。同時(shí)選取29例正常人群作為對(duì)照組，排除高血壓、糖尿病等疾病，年齡33～70歲，平均(50.56±12.08)歲。其中女20例，年齡33～68歲，平均(49.32±13.16)歲，男9例，年齡36～70歲，平均(51.57±12.17)歲。經(jīng)檢測(cè)，兩組在性別、年齡上相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 主要試劑 人IL-20定量EIA試劑盒，試劑由上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

1.3.1 標(biāo)本采集 留取兩組血清，3000r/min離心10 min，取上清，置于-20℃保存?zhèn)錂z，同批檢測(cè)。洗滌液用重蒸水1∶20稀釋。使用前配制底物工作液，將鄰苯二胺片放入底物稀釋液中溶解，每片加液5 ml。標(biāo)準(zhǔn)品液配制則為使用前每管中加入蒸餾水200 μl溶解后即可。

1.3.2 試驗(yàn)流程 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，加樣，反應(yīng)板置于37℃水浴120 min，洗板。加入第一抗體工作液，溫育，再洗板。加酶標(biāo)抗體工作液，再次洗板，加入底物工作液100 μL，置37℃暗處反應(yīng)5～10 min。加入終止液混勻，在492 nm處測(cè)吸光值。

1.3.3 觀察指標(biāo) 患者在采集血清標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，組間比較用方差分析，以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組間血清IL-20濃度比較 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中IL-20水平為(31.74±30.86)×10-3g/L，對(duì)照組血清中IL-20水平為(14.67±7.15)×10-3g/L。RA患者血清中IL-20水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者IL-20與RF、CRP、ESR相關(guān)性分析

將L-20濃度與RF、CRP、ESR進(jìn)行秩相關(guān)檢驗(yàn)，結(jié)果提示RA患者的IL-20血清濃度與 RF、CRP、ESR無(wú)相關(guān)性。見(jiàn)表1。

表1 IL-20與RF、CRP、ESR相關(guān)性分析

3 討論

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是免疫介導(dǎo)的炎癥性疾病，發(fā)病率為0.3% ～4%，平均為1%。主要臨床表現(xiàn)為對(duì)稱(chēng)性、進(jìn)行性及侵蝕性的關(guān)節(jié)炎癥，主要病理表現(xiàn)是滑膜細(xì)胞增生，多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管翳形成，繼而侵犯關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，造成軟骨、骨和關(guān)節(jié)囊損壞，如不能早期發(fā)現(xiàn)并及時(shí)治療，最終將導(dǎo)致關(guān)節(jié)強(qiáng)直、畸形和功能喪失。至今RA病因及發(fā)病機(jī)制不清，一般認(rèn)為與遺傳、環(huán)境等因素有關(guān)。在其致病過(guò)程中，伴隨多種免疫活性細(xì)胞的活化及細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的共同參與。細(xì)胞因子是RA損傷的重要介質(zhì)，貫穿于RA發(fā)展的始終，與其發(fā)病機(jī)制改變、治療及預(yù)后有著密切的關(guān)系。

IL-20是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的IL-10相關(guān)細(xì)胞因子家族的新成員，主要由活化的單核細(xì)胞產(chǎn)生，與IL-10有28%的同源性，與其他IL-10家族成員如IL-19、IL-22、IL-24在氨基酸序列上具有一定的同源性，但生物學(xué)功能卻不盡相同。研究發(fā)現(xiàn)：①I(mǎi)L-20可以促進(jìn)TNF-α、單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)等致炎因子的分泌和表達(dá)。②促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞的增生和分化。

Hsu等研究了16例RA患者、32例骨關(guān)節(jié)炎患者及8例痛風(fēng)患者，發(fā)現(xiàn)RA患者關(guān)節(jié)液中IL-20水平明顯高于骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)的患者，但3組病例IL-20血清水平并無(wú)差異;同時(shí)證實(shí)RA患者關(guān)節(jié)滑膜中有IL-20R表達(dá)，其滑膜成纖維細(xì)胞(RASFs)表達(dá) IL-20受體復(fù)合物，IL-20能激活 RASFs的ERK-1/2(細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶)［1］。本試驗(yàn)結(jié)果表明：RA患者血清中IL-20水平顯著高于對(duì)照組，但與其RF、CRP、ESR無(wú)相關(guān)性。對(duì)比上一研究中對(duì)照為骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)的結(jié)果有所不同。上一研究IL-20血清水平組間差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義不顯著，可能與病例數(shù)相對(duì)少有關(guān)，也有可能骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)IL-20水平比正常人高，而與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎無(wú)差異，在這方面尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究提示IL-20可能與RA相關(guān)，但尚無(wú)證據(jù)說(shuō)明其與RA的活動(dòng)性及關(guān)節(jié)破壞程度相關(guān)。RA血清IL-20水平較正常對(duì)照高可能的原因有［2］：①I(mǎi)L-20作為RA發(fā)病的始動(dòng)因素之一，與滑膜等組織的IL-20R結(jié)合，促進(jìn)TNF-α等炎癥介質(zhì)產(chǎn)生，參與RA發(fā)病。②RA患者與炎癥正相關(guān)的基因處于上調(diào)水平，外周血中的單核細(xì)胞等分泌IL-20增多。③RA滑膜等局部組織分泌IL-20增加，致關(guān)節(jié)液及血清中水平升高。④RA患者炎癥介質(zhì)增多，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡，刺激IL-20產(chǎn)生增加。以上可能均有待進(jìn)一步研究。

雖然類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎存在一些IL的升高或下降，但不能簡(jiǎn)單地認(rèn)為降低的IL即具保護(hù)作用，升高的IL則具致病作用。多種細(xì)胞因子間的相互作用可能更為重要。目前有關(guān)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與IL-20的研究與其他IL相比相對(duì)較少，但是從IL-20生物學(xué)功能以及類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病特點(diǎn)上都提示二者存在緊密聯(lián)系。雖然目前研究結(jié)果尚不能直接證實(shí)是何種聯(lián)系以及相關(guān)性，但進(jìn)一步的研究與試驗(yàn)仍在繼續(xù)，希望能從更深入角度探討二者關(guān)系，加深對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病因及發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床診治提供新的思路。

［1］Hsu Y H，LI H H，HSIEH M Y，et al.Function of Interleukin-20 as a proinflammatory molecule in rheumatoid and experimental arthritis.Arthritis Rheum，2006，54(9)：2722-2733.

［2］蒲曉英，楊南萍，李敏.類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清白介素-20水平及影響因素研究.華西醫(yī)學(xué)，2009，24(8)：2054-2056.