王小翠，王永勝，張輝，徐曉玉（西南大學(xué)藥學(xué)院/重慶市藥效評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，重慶市400716）

灰氈毛忍冬Lonicera macranthoidesHand.-Mazz.屬于忍冬科植物，已收錄在2010年版《中國(guó)藥典》中，歸類為山銀花[1]。藥理學(xué)研究表明，山銀花具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱、保肝、免疫調(diào)節(jié)、降血脂等作用。其化學(xué)成分主要為綠原酸、黃酮類化合物、木犀草素及微量元素等，其中微量元素共15種[2]。中藥藥效與微量元素密切相關(guān)，但關(guān)于灰氈毛忍冬中微量元素的研究尚未見相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。筆者采用HNO3-HClO4消解法處理樣品，利用火焰原子吸收光譜法和原子發(fā)射光譜法，對(duì)4個(gè)不同生長(zhǎng)環(huán)境的灰氈毛忍冬中9種微量元素進(jìn)行含量分析，以為灰氈毛忍冬的規(guī)范化種植、GAP基地建設(shè)及飲片質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

TAS-990型火焰原子吸收分光光度計(jì)、TPS-7000型原子發(fā)射光譜儀（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；EL2046型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

銅（Cu）、鋅（Zn）、鐵（Fe）、錳（Mn）、鉛（Pb）、鉻（Cr）、鎳（Ni）、鎘（Cd）、硒（Se）的標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg·mL-1）均購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心（批號(hào)分別為GSB-04-1725-2004、GSB04-1761-2004、 GSB04-1726-2004、 GSB04-1736-2004、 GSB04-1742-2004、 GSB04-1723-2004、 GSB04-1740-2004、 GSB04-1721-2004，GSB04-1751-2004）；硝酸、高氯酸、鹽酸均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水；灰氈毛忍冬樣品采自重慶市秀山縣清溪場(chǎng)、鐘靈、川河蓋、隘口4個(gè)地區(qū)，分別命名為A、B、C、D產(chǎn)地，所有樣品經(jīng)西南大學(xué)藥學(xué)院中藥教研室?；埒P副教授鑒定均為忍冬科植物灰氈毛忍冬L.macranthoidesHand.-Mazz.。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品和器皿的預(yù)處理

將灰氈毛忍冬用超純水沖洗干凈，60℃干燥4 h，粉碎，過60目篩，105℃干燥至恒重，置于干燥器中貯藏，備用。玻璃器皿先用重鉻酸鉀洗液浸泡12 h，用超純水洗凈，再用鹽酸溶液（1∶1）浸泡12 h，洗凈，烘干，備用。

2.2 儀器工作條件

采用空氣-乙炔火焰法，用火焰原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd的含量，其工作條件為燃?xì)饬髁浚?.0 L·min-1；負(fù)高壓：300.0 V；預(yù)熱燈電流：2.0 mA；其余條件見表1。用原子發(fā)射光譜儀測(cè)定Se的含量，其工作條件為輸出功率：1 kW；載氣壓力：0.2 MPa；冷卻氣流量：700 mL·min-1；輔氣流量：10 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：196.090 nm。

表1 火焰原子吸收分光光度計(jì)工作條件Tab1 Operation condition of flame atomic absorption spectroscopy

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

將Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、Se 1 000 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液按要求進(jìn)行稀釋，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2”項(xiàng)下工作條件進(jìn)樣分析。以吸光度（A）或強(qiáng)度值（I）對(duì)濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得各元素的回歸方程和線性范圍，詳見表2。

表2 各元素的線性回歸方程和線性范圍（n＝5）Tab2 Linear range and linear regression equation of each element（n＝5）

2.4 供試品溶液及空白對(duì)照溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的灰氈毛忍冬樣品1 g，置于150 mL錐形瓶中，加入10 mL硝酸、5 mL高氯酸，混勻，加熱消解，保持微沸狀態(tài)，至溶液澄明后升高溫度，繼續(xù)加熱至冒濃煙，白煙散盡時(shí)消解液呈無色透明狀。當(dāng)消解液剩余約1 mL時(shí)停止加熱，放冷后用2%硝酸溶液溶解錐形瓶?jī)?nèi)的白色結(jié)晶物質(zhì)，定容至25 mL，即為待測(cè)供試品溶液。取不加灰氈毛忍冬樣品，同法制備空白對(duì)照溶液。

2.5 精密度試驗(yàn)

取Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、Se 標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下工作條件重復(fù)進(jìn)樣6次，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各元素含量。結(jié)果，各元素的RSD分別對(duì)應(yīng)為1.19%、1.89%、3.49%、6.12%、6.08%、6.58%、3.53%、2.48%、3.41%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.6 回收率試驗(yàn)[3]

精密稱取已知含量的灰氈毛忍冬樣品（產(chǎn)地A）9份，各0.5 g，分為3組，置于150 mL錐形瓶中，分別按照已知樣品微量元素含量的25%、50%、75%加入各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)梯度做3份，按“2.4”項(xiàng)下方法制備待測(cè)供試品溶液，并按“2.2”項(xiàng)下工作條件進(jìn)樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各元素含量和回收率，結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 3Results of recovery test（n＝9）

由表3可知，Cu的回收率在100%～102%之間，Zn、Fe的回收率均在99%～102%之間，Mn的回收率在97%～100%之間，Pb的回收率在100%～101%之間，Cr的回收率在98%～101%之間，Ni的回收率在96%～102%之間，Cd的回收率在98%～105%之間。表明采用火焰原子吸收光譜法測(cè)定這8種微量元素穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，能夠達(dá)到檢測(cè)要求。

Se的回收率在97%～102%之間，表明采用原子發(fā)射光譜法測(cè)定Se穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，能夠達(dá)到檢測(cè)要求。

2.7 樣品含量測(cè)定

取待測(cè)供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下工作條件進(jìn)樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各元素含量，結(jié)果見表4。

表4 不同產(chǎn)地灰氈毛忍冬中各元素的含量（n＝3）Tab4 Contents of every element in L.macranthoides from different habitats（n＝3）

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，灰氈毛忍冬中含有豐富的人體必需的微量元素Fe，而重金屬元素Pb、Cr、Ni、Cd的含量較少。比較這4個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境的灰氈毛忍冬中微量元素的含量可以看出，B地區(qū)灰氈毛忍冬中Zn、Mn的含量相比其他3個(gè)地區(qū)較高，有極顯著性差異（P＜0.01）?？梢姡珺地區(qū)所產(chǎn)灰氈毛忍冬藥材質(zhì)量更優(yōu)。

微量元素是維持人體物質(zhì)代謝的重要化學(xué)元素，與人類的健康密切相關(guān)。Cu、Fe與機(jī)體的造血功能有關(guān)，Zn、Mn能參與多種酶的合成，能夠通過酶系統(tǒng)發(fā)揮抗菌、抗病毒作用[4]，并對(duì)免疫系統(tǒng)起調(diào)節(jié)作用[5]，這可能與山銀花具有清熱解毒、免疫調(diào)節(jié)之功效有關(guān)。有資料顯示，人體血清中的Cu/Zn比值與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)，肝癌組Cu/Zn比值顯著高于對(duì)照組[6]。而本研究表明4個(gè)產(chǎn)地的灰氈毛忍冬均表現(xiàn)為Cu低Zn高的趨向，則Cu/Zn比值降低，有助于調(diào)節(jié)患者體內(nèi)Cu、Zn的平衡，這可能與山銀花具有保肝功效有關(guān)。Se是谷胱甘肽過氧化物酶的組成成分[7]，能間接清除體內(nèi)自由基、抗衰老，而且還是部分有毒重金屬元素如Cd、Pb的天然解毒劑。本試驗(yàn)結(jié)果表明，灰氈毛忍冬能夠補(bǔ)充人體必需的微量元素，長(zhǎng)期食用具有保健的功效。

本試驗(yàn)對(duì)4個(gè)不同生長(zhǎng)環(huán)境的灰氈毛忍冬進(jìn)行了9種微量元素的含量比較，從而為灰氈毛忍冬類藥材GAP基地建設(shè)及飲片質(zhì)量控制提供數(shù)據(jù)參考。由于2010年版《中國(guó)藥典》并未對(duì)山銀花中微量元素的含量進(jìn)行限定[1]，建立一套關(guān)于灰氈毛忍冬中微量元素的含量限定標(biāo)準(zhǔn)，將有助于提高藥材的質(zhì)量和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：28-29.

[2]騰紅麗.金銀花藥材的綜合研究分析[J].中藥材，2007，30（6）：744.

[3]霍仕霞，閆 明，劉曉東，等.白花丹中微量元素的測(cè)定[J].中國(guó)藥房，2010，21（11）：1 008.

[4]黃島平，莫建光，勞燕文.山藥中16種元素的分析比較[J].廣東微量元素科學(xué)，2002，9（2）：47.

[5]孔祥瑞.必需微量元素的營(yíng)養(yǎng)、生理及臨床意義[M].合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，1982：299.

[6]鄭美蓉，阮幼冰，武忠弼.微量元素銅和鋅在實(shí)驗(yàn)性肝癌中的變化及意義[J].微量元素與健康研究，2000，17（1）：6.

[7]王勇健.微量元素與疾病的關(guān)系[J].家庭醫(yī)學(xué)（新健康），2007，5（1）：7.