郭偉英，吳 迪（遼寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，錦州市 121001）

人參總皂苷為人參的主要有效組分之一，是人參根的主要生理活性物質(zhì)。人參總皂苷有抗皮膚衰老、改善記憶、抑制細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤生長和降糖降脂等藥理活性[1，2]。

枸杞屬植物枸杞Lycium barbarumL.為多棘刺落葉小灌木，抗旱能力很強(qiáng)，其漿果枸杞子在《神農(nóng)本草經(jīng)》中引為上品。枸杞多糖對機(jī)體具有非特異性免疫調(diào)解功能[3]，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，抑制腫瘤生長和細(xì)胞突變，延緩衰老，提高適應(yīng)能力，并具有抗疲勞和加速消除疲勞作用[4]。

脂質(zhì)體作為靶向給藥的載體已被廣泛研究。人參總皂苷和枸杞多糖制成脂質(zhì)體有利于其藥理活性及生物利用度的提高。在脂質(zhì)體的制備中，影響包封率的因素有原料的種類和用量、制備方法以及藥物性質(zhì)等，其中藥物性質(zhì)中溶解特性最為重要，因為它決定藥物是否適合制成脂質(zhì)體。本研究在其他因素固定的條件下，制備2種不同性質(zhì)的藥物以期找出藥物的溶解性質(zhì)對脂質(zhì)體包封率的影響，這方面在國內(nèi)研究得較少。本研究可為人參總皂苷和枸杞多糖是否適合制成具有高包封率的脂質(zhì)體提供試驗數(shù)據(jù)，并為在試驗前判斷其他藥物是否適合制備成脂質(zhì)體提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；JY96-I1型超聲波細(xì)胞粉碎儀（寧波新芝科學(xué)儀器研究所）；XS205DV型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UV-2450型紫外分光光度儀（日本島津公司）；G-50葡聚糖凝膠柱（上海保曼生物科技有限公司）。

人參皂苷Rbl對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110704-200820）；人參總皂苷原料藥（遼寧鑫泰藥業(yè)有限公司，人參總皂苷含量≥80%，批號：20081120）；枸杞多糖原料藥（西安易楊生物技術(shù)有限公司，批號：20080610）；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（上海楚柏試驗室有限公司，含量≥98%）；大豆磷脂（上海金伴藥業(yè)有限公司，批號：20080904）；膽固醇（天津東方試劑廠）；G-50葡聚糖凝膠（上?；瘜W(xué)試劑廠）；乙醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥物基本理化性質(zhì)的考察

2.1.1 溶解度的考察 按2010年版《中國藥典》（二部）凡例項下規(guī)定操作，取藥物適量，于（25±2）℃一定量溶劑中，每隔5 min強(qiáng)力振搖30 s，觀察30 min內(nèi)的溶解情況，在看不到溶質(zhì)顆粒時，即認(rèn)為已完全溶解。考察藥物在常用溶劑水、甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙醚中的溶解情況，詳見表1。

表1 藥物在常用溶劑中的溶解情況Tab1 Dissolution of drugs in common solvents

2.1.2 油水分配系數(shù)（P）的測定 將溶有定量藥物的飽和溶液和經(jīng)水飽和過的正辛醇溶液各10 mL，裝入三角瓶中，在一定強(qiáng)度下渦旋振蕩24 h，靜置15 min后兩相分層，分離出水相，將水相以3 000 r·min-1離心10 min，用高效液相色譜（HPLC）法分別測定人參總皂苷和枸杞多糖濃度（CW）。將水相中原來藥物濃度定為C0，則分配后油相中藥物濃度為C0－CW，P＝（C0－CW）/CW。結(jié)果，LogP人參總皂苷＝0.45（正辛醇－水，n＝3）、LogP枸杞多糖＝0.98（正辛醇－水，n＝3），表明人參總皂苷的P為0.45，枸杞多糖的P為0.98。

2.2 處方優(yōu)化

選取對水溶性藥物包封率影響較大的4個因素，即大豆磷脂與膽固醇重量比（A）、超聲時間（B）、溫度（C）、藥液濃度（D）為考察對象。每個因素各取3個水平，用L9（34）正交表安排試驗，每組重復(fù)3次。因素水平見表2。

表2 因素水平Tab2 Factors and levels

2.3 制備工藝

采用逆相蒸發(fā)法制備。按表1中的比例將大豆卵磷脂和膽固醇溶于氯仿后，轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中；在不同溫度下進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使瓶內(nèi)壁形成一層脂質(zhì)薄膜，加入6 mL乙醚薄膜溶解，再加入2 mL水相，超聲乳化，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)并負(fù)壓抽吸至乙醚揮發(fā)盡，即得到脂質(zhì)體懸液。人參總皂苷脂質(zhì)體和枸杞多糖脂質(zhì)體均按此法制備。

2.4 包封率的測定

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 （1）人參總皂苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密稱取已干燥至恒重的人參皂苷Rb1對照品6.4 mg，置于50 mL容量瓶中，將蒸餾水加至刻度，制成人參皂苷Rb1貯備液。分別從此貯備液中吸出6、7、8、9、10 mL，分別定容至10 mL。用紫外分光光度計于232 nm波長處，以蒸餾水為空白，測定各吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，人參皂苷Rb1檢測濃度（c）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A＝1.084 2c－0.050 1（r＝0.986 6，n＝5）。結(jié)果表明，人參總皂苷Rb1檢測濃度在0.076 8～0.128 0 mg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。（2）枸杞多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線：采用苯酚-濃硫酸顯色法。精密稱取已干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品50 mg，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度。吸出0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，各取1 mL置于10 mL試管中，加5%苯酚1 mL，迅速加入5 mL濃硫酸，冷水浴冷卻至室溫；水同法為空白，在450～500 nm波長范圍內(nèi)測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，枸杞多糖檢測濃度（c）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A＝0.871 9c－0.012 1（r＝0.998 8，n＝5）。結(jié)果表明，枸杞多糖檢測濃度在0.01～0.12 mg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 不同藥物的脂質(zhì)體紫外吸收結(jié)果 （1）取適量人參皂苷Rb1對照品、人參總皂苷脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體，將人參皂苷脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體用無水乙醇破乳后，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。由波譜圖可知，人參皂苷Rb1對照品、人參總皂苷脂質(zhì)體在232 nm波長處均有吸收，故選擇232 nm為檢測波長。（2）取適量枸杞多糖標(biāo)準(zhǔn)品、枸杞多糖脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體，將枸杞多糖脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體用無水乙醇破乳后，在300～700 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。由波譜圖可知，枸杞多糖標(biāo)準(zhǔn)品、枸杞多糖脂質(zhì)體均在485 nm波長處有吸收，故選擇485 nm為檢測波長。

2.4.3 包封率的測定 取同批脂質(zhì)體共2份，每份1 mL，一份置25 mL量瓶中，用乙醇破乳；另一份上G-50葡聚糖凝膠柱，流速為1 mg·min-1，收集洗脫液，將分離得到的脂質(zhì)體置于25 mL量瓶中，用乙醇破乳，2份樣品用乙醇定容。然后分別測定2份樣品的吸光度，計算出藥物總量（W總）和包進(jìn)脂質(zhì)體內(nèi)的藥物量（W包），按下式計算包封率：包封率（%）＝W總/W包×100%。

2.5 正交試驗結(jié)果

按表2中各因素水平進(jìn)行試驗，以包封率為評價指標(biāo)，優(yōu)選工藝。人參總皂苷脂質(zhì)體的正交試驗結(jié)果見表3；人參總皂苷脂質(zhì)體的方差分析結(jié)果見表4；枸杞多糖脂質(zhì)體的正交試驗結(jié)果見表5；枸杞多糖脂質(zhì)體的方差分析結(jié)果見表6。

表3 人參總皂苷脂質(zhì)體的正交試驗結(jié)果Tab3 Results of orthogonal experiment of ginsenoside

表4 人參總皂苷脂質(zhì)體的方差分析結(jié)果Tab4 Analysis of variance of ginsenoside liposome

表5 枸杞多糖脂質(zhì)體的正交試驗結(jié)果Tab5 Results of orthogonal experiment of LBPliposome

表6 枸杞多糖脂質(zhì)體的方差分析結(jié)果Tab6 Analysis of variance of LBPliposome

由表3、表4可知，大豆磷脂與膽固醇重量比對人參總皂苷脂質(zhì)體包封率的影響顯著，其次是藥液濃度、超聲溫度，反應(yīng)時間影響較?。蛔顑?yōu)工藝為A3B2C2D1，即大豆磷脂與膽固醇重量比是1∶3，超聲時間8 min，反應(yīng)溫度35℃，藥液濃度6 g·L-1。

由表5、表6可知，大豆磷脂與膽固醇重量比對枸杞多糖脂質(zhì)體包封率的影響顯著，藥液濃度、超聲時間、反應(yīng)溫度影響較?。蛔顑?yōu)工藝為A1B3C1D1，即大豆磷脂與膽固醇重量比是1∶1，超聲時間10 min，反應(yīng)溫度25 ℃，藥液濃度6 g·L-1。

2.6 統(tǒng)計學(xué)分析

按優(yōu)化的工藝分別制備3批人參總皂苷脂質(zhì)體和枸杞多糖脂質(zhì)體，按“2.4”項下方法測定包封率，結(jié)果見表7。

表7 包封率測定結(jié)果Tab7 Results of entrapment efficiency

3 討論

本研究是對制備脂質(zhì)體條件的探討，而人參總皂苷含量測定只是作為規(guī)律探索的一個中間指標(biāo)，并不作為定量測定項，故只用了人參皂苷Rb1為對照測定含量。

本研究采用了相同的輔料和方法（經(jīng)典的逆向蒸發(fā)法）制備2種藥物的脂質(zhì)體。結(jié)果，人參總皂苷脂質(zhì)體包封率為59.06%，枸杞多糖脂質(zhì)體包封率為47.61%，因此可知2種藥物脂質(zhì)體的包封率存在明顯差異。由于2種藥物的制備方法、試驗試劑用品和實(shí)驗室條件及人員等其他條件完全相同，因此這種差異是由藥物本身性質(zhì)引起的。首先人參總皂苷在水中略溶，在甲醇和乙醇中溶解，且在甲醇中的溶解度大于在乙醇中溶解度，人參總皂苷在水相和油相中均具有一定溶解度。枸杞多糖在甲醇和乙醇中微溶，溶解度比人參總皂苷低。溶解度對微粒載藥量、包封率的影響顯著，藥物溶解度越高，其脂質(zhì)體包封率就越高[5]。

文獻(xiàn)報道[6]，脂質(zhì)體的包封率與該藥物的P有密切關(guān)系。若脂溶性特別好或水溶性特別好，一般使用藥物在正辛醇-水相中的LogP來表示這種性質(zhì)，只有LogP＞4.5的脂溶性藥物或者LogP＜0.3的水溶性藥物才能包封成具有較高包封率且穩(wěn)定的脂質(zhì)體；而對于LogP具有中間值（0.3＜LogP＜4.5）的藥物，即使包封脂質(zhì)體后，藥物也會迅速滲漏[7]。其原因是親脂性或親水性強(qiáng)的藥物分布在脂質(zhì)體的油相或水相，容易得到高的包封率；而兩親性的藥物，由于在脂質(zhì)體的油相和水相都有一定的溶解度，故容易穿膜而發(fā)生泄漏。人參總皂苷和枸杞多糖都屬于兩親性藥物，包封率都不高，然而人參總皂苷LogP更接近于臨界值0.3，處于邊界處，因此人參總皂苷脂質(zhì)體的包封率比枸杞多糖脂質(zhì)體的包封率略高。因而，藥物的溶解性質(zhì)對脂質(zhì)體的包封率具有重要影響，而藥物的其他性質(zhì)對包封率的影響也值得進(jìn)一步的研究。

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