尤海波

（黑龍江省農(nóng)科院園藝分院，哈爾濱 150069）

文心蘭屬蘭科文心蘭屬（Oncidium），花形奇特似舞女，又名跳舞蘭、金粉蝶蘭、瘤瓣蘭，屬?gòu)?fù)莖類(lèi)洋蘭，附生或地生［1］，原產(chǎn)墨西哥、西印度群島、巴西等地［1－7］?？勺鳛榕杌ê颓谢ǎm及大花蕙蘭一樣，作為主要的栽培品種，市場(chǎng)需求量越來(lái)越大［2－5］。文心蘭傳統(tǒng)的繁殖方式為分株繁殖，繁殖系數(shù)較低，容易受到病毒感染，造成品質(zhì)退化，應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行快繁利于保持種苗特性，有效控制病害，因此，探索文心蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方式具有重要意義。

細(xì)胞分裂素類(lèi)激素在試管苗增殖中起關(guān)鍵作用。本試驗(yàn)以誘導(dǎo)出的文心蘭原本球莖為外植體，采用3種常用的細(xì)胞分裂素考察文心蘭原球莖分化效果，選出適于文心蘭原球莖分化培養(yǎng)基，同時(shí)也為進(jìn)一步研究3種細(xì)胞分裂素的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黑龍江省農(nóng)科院科技園區(qū)栽培的寬唇文心蘭品種（Oncidium ）誘導(dǎo)的原球莖；6－BA（6－芐基腺嘌呤）、KT（激動(dòng)素）、Ad（腺嘌呤硫酸鹽）、NAA（α－萘乙酸）等購(gòu)于中國(guó)上?；菖d生化試劑公司。

1.2 培養(yǎng)基

以 MS為基本培養(yǎng)基，糖30g／L、瓊脂粉6g／L、pH 5.6，各種激素配比見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

3種細(xì)胞分裂素分別采用單因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)。

1.4 接種方法

將文心蘭原球莖置于超凈工作臺(tái)上，用手術(shù)刀分成大小均勻的小塊，接種于上述不同培養(yǎng)基，每處理10瓶，每瓶5塊原球莖。觀察記錄接種后新芽產(chǎn)生的時(shí)間、生長(zhǎng)狀況及35d的分化情況。

1.5 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)室溫度（25±1）℃、光強(qiáng)2000～1500lx、光照時(shí)間12h／d。

表1 各處理培養(yǎng)基中激素的組合及濃度 mg·L－1

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度6－BA對(duì)文心蘭原球莖分化試管苗的影響

表2 不同濃度6－BA對(duì)文心蘭新芽產(chǎn)生的時(shí)間及分化率的影響

不同濃度6－BA對(duì)文心蘭原球莖分化的影響情況見(jiàn)表2。由表2可以看出，當(dāng)NAA濃度一定時(shí)，在6－BA低濃度時(shí)沒(méi)有原球莖（Protocorm Like Body，PLB）形成。6－BA濃度在0.5～3.0mg／L范圍內(nèi)，隨著濃度的逐漸增加，新芽形成時(shí)間逐漸縮短，且試管苗的分化率逐漸提高；當(dāng)6－BA濃度為2.0mg／L，NAA濃度0.1mg／L時(shí)，試管苗的分化率較高，分化系數(shù)達(dá)7.27，同時(shí)在苗與培養(yǎng)基接觸面附近有少量原球莖形成；當(dāng)6－BA 濃度為2.0mg／L，NAA 濃度0.2mg／L時(shí)，試管苗的分化率最高，分化系數(shù)達(dá)7.27，在苗與培養(yǎng)基接觸面附近沒(méi)有原球莖形成；但當(dāng)6－BA濃度超過(guò)3.0mg／L時(shí)，分化系數(shù)下降，而原球莖形成量卻增加。這說(shuō)明濃度適中的6－BA對(duì)BA對(duì)增殖率影響達(dá)到了極顯著差異的水平。6－BA濃度在2.0mg／L，NAA濃度在0.2水平下的培養(yǎng)基較適合試管苗的增殖。

2.2 不同濃度KT對(duì)文心蘭試管苗增殖的影響

由表3可以看出，KT濃度在0.5～2.0mg／L的處理中沒(méi)有新芽產(chǎn)生，而當(dāng)KT濃度為3.0～4.0mg／L時(shí)有叢生芽形成，但形成叢生芽的時(shí)間在不同處理之間差異不大，同時(shí)，在NAA為0.2mg／L的情況下，KT無(wú)論在高濃度或低濃度時(shí)均有原球莖產(chǎn)生。由此可見(jiàn)，KT對(duì)文心蘭的原球莖有增殖作用，對(duì)原球莖分化成苗作用相對(duì)較弱。

表3 不同濃度KT對(duì)文心蘭原球莖分化的時(shí)間及分化率的影響

3 結(jié)論

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，用2種不同的細(xì)胞分裂素6－BA、KT和不同濃度生長(zhǎng)素NAA組配對(duì)文心蘭原球莖分化影響的研究結(jié)果表明，2種激素對(duì)文心蘭試管苗的影響差異較大。用一定濃度（2.0mg／L）的6－BA對(duì)文心蘭原球莖進(jìn)行分化不僅增殖率高，而且苗的狀況好，沒(méi)有原球莖的增殖，比較適合文心蘭原球莖分化的培養(yǎng)基為 MS＋6－BA 2.0mg／L＋NAA 0.2。

［1］Santana G E，Chaparro K.Clonal Progpgation of Oncidium Through the Culture of Floral buds［J］.Acculture，1997，482：315－320.

［2］Kerbelly G B.1984.Plant regeneration of Oncidium varicosum by means of root tip culture.Plant Cell Reports.3（1）21－29.

［3］陳興貽.文心蘭組織培養(yǎng)［J］.植物生理學(xué)通訊，1989（2）：49.

［4］陳菁英，藍(lán)賀勝，陳雄鷹.蘭花組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004：107－115.

［5］崔廣榮，劉云兵，何玉華，等.不同細(xì)胞分裂素對(duì)文心蘭試管苗增殖的影響［J］.特產(chǎn)研究，2005（2）：37－40.

［6］朱根發(fā)，王懷宇，陳明莉，等.文心蘭脫毒快速繁殖技術(shù)研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997（4）：27－28.