鄭林，王愛民，黃勇，遲明艷，蘭燕宇，王永林(貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴陽市550004)

紫金透骨噴霧劑是根據(jù)貴州省苗族驗(yàn)方開發(fā)的中藥新藥，是由紫金蓮、透骨香和冰片等6味中藥采用現(xiàn)代制劑提取技術(shù)富集有效成分精制而成的外用噴霧劑，具有活血散瘀、消腫止痛、舒筋通絡(luò)之功效，用于急性閉合性軟組織損傷的治療。中醫(yī)認(rèn)為本品所含的冰片辛香走竄，其清香為百藥之先，為大通之品，故可用于治療多種疼痛病證[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明[2，3]，冰片具有止痛、抗炎、抗菌的功效，冰片中龍腦是一種有效的透皮促進(jìn)劑，對多種皮膚外用藥都有促透作用。龍腦為冰片中主要有效成分，因此筆者選擇龍腦為考察指標(biāo)，采用氣相色譜(GC)法對紫金透骨噴霧劑進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)及穩(wěn)定性研究[4，5]，證明該法可用于該制劑的質(zhì)量控制，且制劑中龍腦穩(wěn)定性良好。

1 儀器與試藥

GC-14B型GC儀、氫火焰離子化檢測器(日本島津公司)；WML色譜工作站(廣西威瑪龍色譜科技公司)；高純氮?dú)狻錃?貴陽新維氣體有限公司，純度均為99.99%)；龍腦對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:881-200001)；正辛醇、乙醇為分析純；紫金透骨噴霧劑(貴陽醫(yī)學(xué)院貴州省中藥民族藥研究開發(fā)中心提供，批號:20080313、20080318、20080320)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:AT-WAX石英毛細(xì)管(0.53 mm×30 m×1.0μm)；載氣:氮?dú)?；柱前?25 kPa；柱溫:170℃；進(jìn)樣口溫度:200℃；檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID)；檢測器溫度:250℃；氫氣流量:40 mL·min-1；空氣流量:400 mL·min-1；分流比:10∶1；進(jìn)樣量:0.5 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液精密吸取正辛醇2 mL，置100 mL量瓶中，加乙醇至刻度，即得。

2.2.2 對照品溶液精密稱取龍腦對照品33.92 mg，置于25 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，即得。

2.2.3 供試品溶液精密吸取紫金透骨噴霧劑1 mL，置25 mL量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性對照溶液按紫金透骨噴霧劑制備工藝制得缺冰片的陰性樣品。精密吸取陰性樣品1 mL，置25 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各0.5 μL注入GC儀，在上述色譜條件下測定，得色譜圖(見圖1)。結(jié)果顯示，對照品與供試品中龍腦的保留時(shí)間基本一致，龍腦峰與內(nèi)標(biāo)峰及其他組分峰分離良好；陰性對照溶液在龍腦色譜峰位置處無相應(yīng)的峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL，置5 mL量瓶中，分別精密加內(nèi)標(biāo)溶液0.2 mL，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取上述系列對照品溶液0.5μL注入GC儀中，測定峰面積。以龍腦與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值(Y)為縱坐標(biāo)，對照品濃度(X)為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝2.981X－6.584×10-3(r＝0.9999，n＝5)。結(jié)果表明，龍腦的檢測濃度在0.1209～0.7253 mg·mL-1范圍內(nèi)與其同內(nèi)標(biāo)的峰面積比值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1 重復(fù)性試驗(yàn)精密吸取樣品(批號:20080313)9份，分別按0.5、1.0、1.5 mL取樣，每個(gè)樣3份，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測定龍腦的含量。結(jié)果，RSD＝2.21%(n＝9)，表明方法的重復(fù)性良好。

2.5.2 中間精密度試驗(yàn)以不同的實(shí)驗(yàn)人員在不同時(shí)間照“2.2.3”項(xiàng)下方法分別制備3份供試品溶液，按上述方法測定。第1次測定結(jié)果的RSD＝2.26%(n＝3)；第2次測定結(jié)果的RSD＝2.22%(n＝3)，表明方法的中間精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，照上述色譜條件分別于0、1、2、4、8 h進(jìn)樣，測定龍腦與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值。結(jié)果，RSD＝1.54%(n＝5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 耐用性試驗(yàn)

取樣品適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備3份供試品溶液，用同一支色譜柱，以不同色譜柱溫度(165、170、175℃)進(jìn)樣測定。結(jié)果，RSD(n＝3)分別為1.94%(165℃)、2.26%(170℃)、1.98%(175℃)；另取3份供試品溶液，除柱前壓變化外(20、25、30 kPa)，其余色譜條件不變進(jìn)樣測定。結(jié)果，RSD(n＝3)分別為2.63%(20 kPa)、2.29%(25 kPa)、1.67%(30 kPa)，表明方法的耐用性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已測定龍腦含量(11.39 mg·mL-1)的樣品，分別按所取樣品量中龍腦質(zhì)量分?jǐn)?shù)的50%、100%和150%精密加入龍腦對照品，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，按上述色譜條件測定含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，分別按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，每份重復(fù)進(jìn)樣3次，并計(jì)算平均含量。結(jié)果，3批樣品(批號:20080313、20080318、20080320)中龍腦的平均含量(n＝3)分別為11.24、10.94、10.93 mg·mL-1，平均值為11.04 mg·mL-1。

2.10 制劑中龍腦穩(wěn)定性考察

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)Tab 1Results of recovery tests(n＝9)

為考察制劑中龍腦的穩(wěn)定性，取模擬上市包裝中試樣品3批(20080313、20080318、20080320)進(jìn)行加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)考察。

2.10.1 加速試驗(yàn)取模擬上市包裝中試樣品適量，置(40±2)℃、RH(20±5)%條件下貯藏，于0、1、2、3、6個(gè)月取樣，照上述含量測定方法檢測。結(jié)果，3批樣品中龍腦的含量分別為11.24、10.95、10.67、10.97、10.85 mg·mL-(1批號:20080313)，10.94、10.66、10.40、10.83、10.22 mg·mL-(1批號:20080318)，10.93、10.35、10.16、10.35、10.11 mg·mL-(1批號:20080320)，表明經(jīng)加速試驗(yàn)6個(gè)月考察，制劑中龍腦含量無明顯變化，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.10.2 長期試驗(yàn)取模擬上市包裝中試樣品適量，置室溫條件下貯藏，于0、3、6、12、18個(gè)月取樣，照上述含量測定方法檢測。結(jié)果，3批樣品中龍腦的含量分別為11.24、10.67、10.24、10.28、9.66 mg·mL-(1批號:20080313)，10.94、10.97、10.36、10.56、9.90 mg·mL-(1批號:20080318)，10.93、11.05、10.64、10.15、9.93 mg·mL-(1批號:20080320)，表明經(jīng)室溫留樣長期試驗(yàn)18個(gè)月考察，制劑中龍腦含量無明顯變化，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

3 討論

2005年版《中國藥典》(一部)冰片中龍腦測定采用水楊酸甲酯作內(nèi)標(biāo)物，但由于紫金透骨噴霧劑處方中含有透骨香藥材，而透骨香中含有水楊酸甲酯，會對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。經(jīng)試驗(yàn)，選用正辛醇為內(nèi)標(biāo)物，樣品不干擾內(nèi)標(biāo)物。

本試驗(yàn)含量測定方法的驗(yàn)證主要參照2005年版《中國藥典》(一部)附錄“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則”進(jìn)行，較原來《中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的技術(shù)要求》中含量測定方法的驗(yàn)證更為合理和嚴(yán)謹(jǐn)。

在紫金透骨噴霧劑穩(wěn)定性考察中，除龍腦的含量測定外，還分別考察了性狀、鑒別、乙醇量、噴射試驗(yàn)和微生物限度，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，說明本品在18個(gè)月內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定，直接接觸藥品的容器對藥品質(zhì)量無影響。

[1]雷載權(quán)，張廷模主編.中華臨床中藥學(xué)[M].第1版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1998:1558.

[2]王本祥主編.現(xiàn)代中藥藥理學(xué)[M].第1版.天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社，1997:1141.

[3]朱健平，王宗銳，吳宋夏.龍腦促進(jìn)藥物經(jīng)皮滲透作用的研究[J].中國藥學(xué)雜志，1999，34(2):104.

[4]張開蓮，葉云，王俊，等.毛細(xì)管氣相色譜法測定雪抑樂中龍腦的含量[J].中國藥房，2007，18(30):2355.

[5]毛葉萌，張奇志，沈燁虹，等.阿普唑侖口腔崩解片的穩(wěn)定性研究[J].中國藥房，2008，19(28):2213.