黃新武，張紅，李國(guó)春，李華，章卓，秦大蓮(.瀘州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥理教研室，瀘州市646000；.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)院藥劑科，瀘州市646000)

血管性癡呆(Vascular dementia，VD)是由一系列腦血管因素導(dǎo)致腦組織損害引起的癡呆綜合征，其不僅嚴(yán)重?fù)p害患者的健康，影響患者的生命質(zhì)量，也給其家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。VD占各類癡呆的首位，隨著人類社會(huì)的老齡化，VD已是國(guó)內(nèi)、外醫(yī)學(xué)界研究的重要課題。由于對(duì)其發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，亦缺少治療VD的特效藥物，因此，積極探尋防治VD的有效途徑具有重要醫(yī)學(xué)價(jià)值和社會(huì)意義。研究[1]表明，腦內(nèi)具有獨(dú)立的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)，其在VD發(fā)病中起重要作用?？ㄍ衅绽?Kaptopril)是最常用的一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)，可直接抑制ACE的活性，減少血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的生成；氯沙坦(Losartan)屬AngⅡ受體1(AT1受體)阻滯藥，通過(guò)阻滯AT1受體對(duì)抗AngⅡ的作用。本研究建立了VD大鼠模型，此前已通過(guò)Morris水迷宮法觀察到卡托普利和氯沙坦對(duì)模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力有良好的改善作用[2]，現(xiàn)就二者對(duì)模型大鼠腦組織中腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1β及乙酰膽堿酯酶(AchE)水平的影響進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討其改善VD的作用機(jī)制。

1 儀器與材料

1.1 儀器

400R低溫離心機(jī)(德國(guó)Heraeus公司)；722分光光度計(jì)(上海精密儀器有限公司儀器總廠)。

1.2 試藥

卡托普利(片劑，汕頭金石制藥總廠，批號(hào):080505，規(guī)格:每片25 mg)；氯沙坦(氯沙坦鉀膠囊，北京萬(wàn)生藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào):20080903，規(guī)格:每片50 mg)；IL-1β、TNF-α放射免疫分析試劑盒(北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司，批號(hào)均為090621)；AchE測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào):090511)。

1.3 動(dòng)物

健康SD大鼠60只，♂，月齡:＞24個(gè)月，體重(320±20)g，由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供，為一級(jí)合格動(dòng)物，動(dòng)物合格證號(hào):川醫(yī)動(dòng)字第2401115號(hào)。

2 方法

2.1 建模與分組

隨機(jī)取40只大鼠，采用不同時(shí)點(diǎn)分別結(jié)扎左、右頸總動(dòng)脈建立VD模型[3]。術(shù)后4周通過(guò)Morris水迷宮對(duì)建模大鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)定，篩選出學(xué)習(xí)記憶能力明顯障礙的大鼠為建模成功大鼠。將建模成功大鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組10只。根據(jù)藥品說(shuō)明書常用量按體重計(jì)算給藥劑量:卡托普利組，灌胃卡托普利2.5 mg·kg－1，每天1次，持續(xù)4周；氯沙坦組，灌胃氯沙坦2.0 mg·kg－1，每天1次，持續(xù)4周；模型組，灌胃等量生理鹽水。另設(shè)假手術(shù)組10只，雙側(cè)頸總動(dòng)脈不結(jié)扎，其余操作同建模方法；正常對(duì)照組10只，不作任何處理，2組均灌胃等量生理鹽水。

2.2 指標(biāo)的檢測(cè)

給藥4周后，檢測(cè)各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。隨后處死大鼠，斷頭取腦，分離大腦皮質(zhì)和海馬組織，各取0.5 g，置于5 mL生理鹽水中，加入冰塊碾磨，分別制備10%組織勻漿，3000 r·min－1低溫離心10 min，取上清液置于－20℃冰箱保存待測(cè)。由瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科采用放射免疫法測(cè)定各組大鼠腦組織勻漿中TNF-α和IL-1β含量。采用化學(xué)比色法測(cè)定各組大鼠海馬組織中AchE活性，具體操作按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)以±s表示，應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05表示差異具有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 學(xué)習(xí)記憶能力比較[2]

與模型組比較，卡托普利組與氯沙坦組大鼠逃避潛伏期明顯縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增加(P均＜0.05)，表明2組學(xué)習(xí)記憶能力有明顯改善。

3.2 腦組織中TNF-α、IL-1β、AchE水平比較

與模型組比較，卡托普利組和氯沙坦組大鼠大腦皮質(zhì)和海馬組織中TNF-α、IL-1β含量明顯降低，海馬組織中AchE活性明顯降低(P均＜0.05)，詳見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠大腦皮質(zhì)和海馬組織中TNF-α、IL-1β、AchE水平比較(±s，n＝10)Tab 1Comparison of TNF-α，IL-1β and AchE levels in cortex and hippocampus of vascular dementia rats among those group(s±s，n＝10)

表1 各組大鼠大腦皮質(zhì)和海馬組織中TNF-α、IL-1β、AchE水平比較(±s，n＝10)Tab 1Comparison of TNF-α，IL-1β and AchE levels in cortex and hippocampus of vascular dementia rats among those group(s±s，n＝10)

與模型組比較:＊P＜0.05vs.model group:＊P＜0.05

組別卡托普利組氯沙坦組模型組假手術(shù)組正常對(duì)照組AchE/U·mg－1prot海馬組織0.444±0.117＊0.451±0.095＊0.692±0.2710.251±0.091＊0.248±0.035＊?jiǎng)┝?mg·kg－1 2.52.0 TNF-α/ng·mL－1大腦皮質(zhì)2.210±0.324＊2.250±0.336＊3.477±0.4932.048±0.449＊1.983±0.317＊海馬組織2.823±0.511＊3.083±0.469＊5.010±0.7972.502±0.625＊2.391±0.571＊IL-1β/ng·mL－1大腦皮質(zhì)0.340±0.043＊0.276±0.048＊0.448±0.0380.202±0.055＊0.213±0.034＊海馬組織0.278±0.046＊0.248±0.013＊0.447±0.0370.262±0.038＊0.241±0.029＊

4 討論

VD發(fā)生常與大腦皮層病變，尤其是左側(cè)大腦皮層及丘腦、海馬組織的缺血缺氧密切相關(guān)。腦缺血后，以TNF-α及IL-1β為代表的細(xì)胞因子參與許多神經(jīng)病理過(guò)程，TNF-α及IL-1β等細(xì)胞因子表達(dá)增加，從而介導(dǎo)神經(jīng)毒性作用，導(dǎo)致神經(jīng)元損傷[4]，引起與記憶有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿(Ach)、兒茶酚胺、5-羥色胺等的減少，促使VD的發(fā)生。TNF-α是一種早期炎癥因子，其作為炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的啟動(dòng)者，從而引發(fā)繼發(fā)性損傷，在VD模型術(shù)后1個(gè)月，TNF-α的表達(dá)還是明顯增加[5]，其來(lái)源可能是多途徑的。有研究[6，7]顯示，卡托普利能抑制或減少TNF-α的分泌，避免或減輕其對(duì)缺血缺氧組織器官的進(jìn)一步傷害，發(fā)揮保護(hù)作用。本研究也顯示，模型組大鼠腦組織中TNF-α和IL-1β含量明顯增加，而卡托普利組和氯沙坦組與模型組比較TNF-α和IL-1β含量明顯降低，說(shuō)明卡托普利和氯沙坦均能減少VD模型大鼠腦組織中TNF-α和IL-1β含量，對(duì)神經(jīng)起保護(hù)作用。

VD患者腦內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生改變，其中膽堿能系統(tǒng)明顯受損，而學(xué)習(xí)記憶與中樞膽堿能系統(tǒng)關(guān)系極為密切。中樞膽堿能通路是構(gòu)成學(xué)習(xí)記憶的主要通路，乙酰膽堿(Ach)是其中的重要神經(jīng)遞質(zhì)，其濃度升高有利于學(xué)習(xí)記憶能力的恢復(fù)，降低則促進(jìn)癡呆的發(fā)生。Ach由膽堿乙?；?ChAT)合成，AchE分解，通過(guò)Ach受體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。腦缺血時(shí)膽堿能神經(jīng)元退變，AchE釋放過(guò)多，分解Ach增強(qiáng)，導(dǎo)致Ach濃度降低從而促進(jìn)癡呆的發(fā)生[8]。本研究顯示，卡托普利組和氯沙坦組大鼠海馬組織中AchE活性與模型組比較明顯降低，表明卡托普利和氯沙坦可能通過(guò)降低AchE活性減少Ach的降解，從而促進(jìn)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的恢復(fù)。

[1]Ciobica A，Bild W，Hritcu L，et al.Brain renin-angiotensin system in cognitive function:pre-clinical findings and implications for prevention and treatment of dementia[J].Acta Neurol Belg，2009，109(3):171.

[2]黃新武，李華，秦大蓮，等.卡托普利和氯沙坦對(duì)血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響[J].中華老年心腦血管病雜志，2010，12(6):497.

[3]黃新武，李華，秦大蓮，等.不同時(shí)點(diǎn)分別結(jié)扎左、右頸總動(dòng)脈建立大鼠血管性癡呆模型[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2010，30(14):2006.

[4]Anctil M，Poulain I，Pelletier C.Nitric oxide roodulates peristaltic muscle activity associated with fluid circulation in the sea pansy Renilla koellikeri[J].J Exp Biol，2005，208(10):2005.

[5]景玉宏，宋焱峰，王子仁.血管癡呆大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞增生與TNF-α的表達(dá)[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2004，3(6):418.

[6]張道友，吳仁勝，陳忠輝，等.卡托普利與洛伐他汀聯(lián)用對(duì)阿霉素腎病大鼠血清TNF-α的影響[J].放射免疫學(xué)雜志，2007，20(6):488.

[7]陳玉東.卡托普利對(duì)兔心肌缺血再灌注血清TNF-α的影響[J].山東醫(yī)藥，2009，49(45):33.

[8]藺心敬，胡長(zhǎng)林，李呂力，等.血管性癡呆發(fā)生機(jī)制的研究[J].腦與神經(jīng)疾病雜志，2003，11(4):235.