王海琴 佘曉玲 霍繼榮 龍利民 (中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院老年病科，湖南 長(zhǎng)沙 400)

腫瘤是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病，而它的侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，是導(dǎo)致患者致死性的重要原因。胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的復(fù)雜過(guò)程，涉及多個(gè)基因和多種分子水平變化，而細(xì)胞間的黏附力丟失常導(dǎo)致細(xì)胞連接的破壞，且與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移相關(guān)。Claudin－1蛋白是新近發(fā)現(xiàn)的上皮細(xì)胞間緊密連接骨架蛋白，其有維持細(xì)胞極性和屏障的功能〔1〕。本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)96例胃癌中Claudin－1及上皮型黏附素(E－cad)的表達(dá)情況，探討二者在胃癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集胃癌根治手術(shù)切除后標(biāo)本96例，患者年齡為28～76歲，平均56．5歲，其中男性65例，女性31例，術(shù)前均未進(jìn)行任何放化療。同時(shí)選取病理證實(shí)切端無(wú)癌的正常胃黏膜組織30例作為對(duì)照。

1.2 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)兩種蛋白的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)用的兔抗人Claudin－1和鼠抗人E－cad單克隆抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)采用S－P法進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Claudin－1蛋白陽(yáng)性染色均位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，E－cad蛋白陽(yáng)性染色位于細(xì)胞膜，呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞，合并計(jì)算高倍鏡下(×400)隨機(jī)選擇的5個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞占全部計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞的百分率，平均每個(gè)視野細(xì)胞質(zhì)(膜)呈陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)≥10%為陽(yáng)性，無(wú)明顯陽(yáng)性反應(yīng)或陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)采用卡方檢驗(yàn)，并計(jì)算Claudin－1和E－cad的相關(guān)性，所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均用SAS軟件分析完成。

2 結(jié)果

2.1 Claudin－1和 E－cad在胃癌、正常胃黏膜組織的表達(dá) Claudin－1和E－cad在胃癌中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯低于正常胃黏膜組織(P ＜0．01)。見(jiàn)表1，圖 1。

2.2 Claudin－1、E－cad的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 胃癌中Claudin－1和E－cad蛋白的表達(dá)與分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0．05)，見(jiàn)表2。而與患者的年齡及性別無(wú)明顯相關(guān)(P＞0．05)。

表1 Claudin-1及E-cad在胃癌、正常胃黏膜的表達(dá)〔n(%)〕

表2 胃癌中Claudin-1及E-cad的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

圖1 Claudin-1及E-cad在胃黏膜中的表達(dá)(DAB，×200)

2.3 Claudin－1與E－cad在胃癌中表達(dá)的關(guān)系 經(jīng)相關(guān)分析，胃癌中 Claudin－1和 E－cad蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0．350 2，P ＜0．05)。

3 討論

Claudins是一類跨膜蛋白，是從雞肝中得到的一種緊密連接的片段，迄今在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)至少有24種不同蛋白，其序列的一致性為 12．5% ～69．7%，分子量大約為20～27 kD 之間〔2〕，每一種分子均有4個(gè)疏水跨膜區(qū)域，N末端和C末端位于細(xì)胞膜內(nèi)，在細(xì)胞膜外形成兩個(gè)長(zhǎng)度不等的環(huán)，膜內(nèi)的C末端與胞質(zhì)內(nèi)的閉合蛋白 ZO－1，ZO－2，ZO－3 相連，膜外的兩個(gè)環(huán)與鄰近細(xì)胞的同型環(huán)相接，如此構(gòu)成細(xì)胞間緊密連接，緊密連接具有柵欄功能和屏障功能〔3〕，柵欄功能把細(xì)胞分成頂側(cè)區(qū)和基側(cè)區(qū)，阻止兩個(gè)不同功能區(qū)之間的物質(zhì)相互彌散，維持細(xì)胞的極相排列，而屏障功能則對(duì)分子大小、離子類型、細(xì)胞滲透性有選擇性，并調(diào)節(jié)不同功能區(qū)之間小分子運(yùn)輸，維持組織的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。近年有研究顯示，多種上皮性惡性腫瘤claudins有異常表達(dá)，并且與這些腫瘤發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系〔4，5〕。鈣黏附素是一組Ca2+依賴跨膜蛋白，包括至少9個(gè)基因家族，其中以E－cad最為重要，是鈣依賴的黏附素家族的一個(gè)經(jīng)典成員。近年來(lái)，有關(guān)緊密連接蛋白及黏附分子功能的研究日趨增多，并證實(shí)了其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要作用〔6〕。

本結(jié)果顯示胃癌Claudin－1和E－cad的陽(yáng)性表達(dá)率比正常胃黏膜組織明顯降低，且都與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。既提示Claudin－1和E－cad在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能起相當(dāng)重要的作用，又由于分化程度、浸潤(rùn)深度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是與胃癌患者預(yù)后密切相關(guān)的因素，因此提示它們可能與患者的預(yù)后密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示二者在胃癌的發(fā)生發(fā)展中具有正向的協(xié)同效應(yīng)。在正常上皮細(xì)胞間不僅要維持上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性和穩(wěn)定性，還要通過(guò)與細(xì)胞骨架等胞漿內(nèi)成分的連接進(jìn)行信息傳遞〔7〕，而腫瘤進(jìn)展時(shí)緊密連接完整性的破壞，可能是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)因子及其他因子擴(kuò)散的原因之一。還有研究顯示Claudin－1與E－cad參與特定細(xì)胞連接與黏附信號(hào)的傳遞，影響細(xì)胞遷移〔8〕，間接參與細(xì)胞骨架和細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)〔9〕，進(jìn)而影響腫瘤的生物學(xué)行為。總之，Claudin－1和E－cad在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)，二者可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)Claudin－1和E－cad可能更有助于判斷胃癌的預(yù)后。

1 Fritzsche FR，Oelrich B，Johannsen M，et al．Claudin－1 protein expression is a prognostic marker of patient survival in renal cell carcinomas〔J〕．Clin Cancer Res，2008;14(21):7035－42．

2 Huo Q，Kinugasa T，Wang L，et al．Claudin－1 protein is a major factor involved in the tumorigenesis of colorectal cancer〔J〕．Anticancer Res，2009;29(3):851－7．

3 郭宏艷，呂 苗，楊國(guó)嶸，等．Claudin－1、SMA和P63在乳腺皮增生及乳腺癌組織中的表達(dá)及其診斷價(jià)值〔J〕．西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2009;30(2):123－5．

4 陳 琳，姜 泊，張亞歷，等．緊密連接蛋白claudin－1基因的克隆和大腸癌細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建〔J〕．南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007;27(3):349－51．

5 Dos Reis PP，Bharadwaj RR，Machado J，et al．Claudin 1 overexpression increase invasion and is associated with aggressive histological features in oral squamous cell carcinoma〔J〕．Cancer，2008;113(11):3169－80．

6 劉愛(ài)東，劉士生，許志萍，等．E－Cadherin在胃癌中的表達(dá)及意義〔J〕．廣東醫(yī)學(xué)，2007;28(11):1806－7．

7 胡孟鈞，徐航娣，魏建麗，等．子宮頸上皮內(nèi)瘤變進(jìn)展過(guò)程中Claudin－1的表達(dá)及意義〔J〕．臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2007;23(5):629－30．

8 楊莊青，黃云超，鄒天寧，等．E－cadherin、claudin－1聯(lián)合檢測(cè)與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究〔J〕．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2008;16(11):1904－6．

9 許曉勇，胡乃中．緊密連接蛋白claudins和胃癌〔J〕．國(guó)際消化病雜志，2009;29(1):8－10．