趙樹鵬 齊鳳杰 (遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院普通外科，遼寧 錦州 121001)

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個多因素參與的多步驟發(fā)展過程。研究表明，Ezrin和CD44－V6蛋白在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。但有些研究結(jié)果尚未達成共識。Moilanen等〔1〕報道Ezrin蛋白在卵巢漿液性囊腺癌中表達越低，其預后越差，而Akisawa等〔2〕報道在胰腺癌中Ezrin蛋白高表達則預示患者預后不良。Hiscox等〔3〕在體外結(jié)腸癌細胞株研究顯示Ezrin蛋白的缺失與腫瘤細胞的運動能力和侵襲性增加有關(guān)。上述研究結(jié)果均說明Ezrin蛋白在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中存在著更復雜的作用機制，可能參與腫瘤轉(zhuǎn)移的多個環(huán)節(jié)。本研究通過檢測Ezrin和CD44－V6蛋白在結(jié)腸癌中的表達情況及其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討其在結(jié)腸癌侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2006年1月至2009年1月遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院行結(jié)腸癌手術(shù)切除病例共100例，其中包括癌旁腸組織20例;結(jié)腸腺癌80例，高分化17例，中－低分化63例;未侵及全層15例，侵及全層65例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。所有病例術(shù)前均未采取放療、化療及免疫治療。

1.2 試劑 鼠抗人Ezrin單克隆抗體，鼠抗人CD44－V6單克隆抗體，濃縮型DAB顯色液以及S－P染色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 將蠟塊標本制成4 μm連續(xù)切片，經(jīng)脫蠟、脫苯、水化后進行HE和免疫組化染色。以已知陽性組織為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗為陰性對照。采用雙評分法進行判定，隨機選擇5個高倍鏡視野(400×)，按陽性細胞百分率(A值)評分:＜25%為1分，25～50%為2分，＞50%為3分;按染色強度(B值)評分:無顯色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;染色陽性細胞數(shù)與染色強度的乘積得分作為判定標準:0～4分者為陰性;5分以上為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料應用χ2檢驗、Fisher精確概率法;等級相關(guān)檢驗用 Spearman相關(guān)檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin和CD44－V6蛋白在結(jié)腸癌及癌旁腸組織中的表達 Ezrin和 CD44－V6蛋白分別定位于胞質(zhì)和胞膜。Ezrin及CD44－V6蛋白在癌旁腸組織中陽性表達率分別為35．0%、25．0%，腸腺癌組織中的陽性表達率分別為83．75%、82．5%，兩種蛋白的陽性表達率分別高于癌旁組織差異顯著(P＜0．01)。

2.2 Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸腺癌中的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸高分化腺癌組的陽性表達顯著低于低－中分化腺癌組，在有漿膜層浸潤組顯著高于無漿膜層浸潤組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，各組間的表達差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)。在Dukes分期中，兩種蛋白在Dukes C、D期的表達顯著高于Dukes A、B期，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)。Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸腺癌中的表達與性別、年齡、腫物最大直徑無明顯相關(guān)性(P＞0．05)。見表 1，圖 1。

2.3 Ezrin及CD44－V6蛋白在結(jié)腸腺癌中表達的相關(guān)性分析 Ezrin及CD44－V6蛋白在80例結(jié)腸腺癌中同時陽性表達的例數(shù)為60例，占總數(shù)的75．00%(60/80)，而兩者同時陰性表達的例數(shù)為7例，占總數(shù)的8．75%(7/80)，應用Spearman相關(guān)檢驗檢測結(jié)腸腺癌中Ezrin及CD44－V6蛋白表達的相關(guān)性，兩者表達呈正相關(guān)(r's=0．421，P=0．000)。進一步觀察發(fā)現(xiàn)，在60例Ezrin及CD44－V6蛋白同時陽性表達的患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達65．0%;7例兩者同時陰性表達的患者，只有1例腸系膜淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率僅為14．29%，兩者表達上的差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)。

表1 Ezrin及CD44-V6蛋白在結(jié)腸腺癌中的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

圖1 Ezrin及CD44-V6蛋白在結(jié)腸癌中的表達(SP法，×200)

3 討論

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學特征，惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的基礎是腫瘤細胞之間的黏附力下降，因此腫瘤細胞表面黏附分子的去黏附作用在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起著非常重要的作用。Ezrin屬于埃絲蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)蛋白家族，Ezrin蛋白通過調(diào)整黏附因子和信號轉(zhuǎn)導等途徑，參與細胞與細胞、細胞與基質(zhì)之間的相互作用，從而進一步影響腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學行為〔4〕。CD44分子是一種分布廣泛的細胞表面黏附分子，是細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)(ECM)相互識別和作用的分子基礎，并且具備一系列的生理功能。某些CD44分子的異常表達可顯著提高惡性腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力，與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔5〕。有研究發(fā)現(xiàn)，Ezrin與CD44及其變異體形成復合物，在腫瘤細胞中共同表達〔6〕。本研究結(jié)果提示結(jié)腸腺癌的發(fā)生及浸潤轉(zhuǎn)移潛能的獲得可能與Ezrin與CD44蛋白的表達上調(diào)有關(guān)。Ezrin與CD44兩種蛋白在結(jié)腸腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著協(xié)同作用。CD44－V6蛋白通過與其細胞內(nèi)羧基端與Ezrin蛋白連接，影響細胞骨架的構(gòu)象，從而改變腫瘤細胞的運動能力。本研究亦為上述的觀點進一步提供了實驗佐證。但腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，Ezrin蛋白在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中扮演不同的重要角色〔7〕。Khanna 等〔8〕和 Yu〔9〕等通過實驗表明，Ezrin 在具有高轉(zhuǎn)移特性的鼠橫紋肌肉瘤及骨肉瘤細胞株中高度表達，抑制橫紋肌肉瘤細胞及骨肉瘤細胞中Ezrin的表達能顯著抑制腫瘤的肺轉(zhuǎn)移，提示Ezrin蛋白是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，并且Ezrin蛋白的表達與腫瘤的預后密切相關(guān)。但另有一些研究發(fā)現(xiàn)，卵巢漿液性囊腺癌中Ezrin的低表達提示預后差，因此，Ezrin蛋白在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中存在著更復雜的作用機制。

1 Moilanen J，Lassus H，Leminen A，et al．Ezrin immunoreactivity in relation to survival in serous ovarian carcinoma patients〔J〕．Gynecol Oncol，2003;90(2):273－81．

2 Akisawa N，Nishimori I，Iwamura T，et al．High levels of ezrin expressed by human pancreatic adenocarcinoma cell lines with high metastatic potential〔J〕．Biochem Biophys Res Commun，1999;258(2):395－400．

3 Hiscox S，Jiang WG．Ezein regulates cell－cell and cell－matrix adhesion，a possible role with E－cadherin/beta－catenin〔J〕．J Cell Sci，1999;112(18):3081－90．

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7 McClatchey AI．Merlin and ERM proteins:unappreciated roles in cancer development〔J〕?Nat Rev Cancer，2003;3(11):877－83．

8 Khanna C，Wan X，Bose S，et al．The membrane－cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis〔J〕．Nat Med，2004;10(2):182－6．

9 Yu Y，Khan J，Khanna C，et al．Expression profiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeoprotein Six－1 as key metastatic regulators〔J〕．Nat Med，2004;10(2):175－81．