映峰*

(1南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院，廣州 510282;2清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院)

冠心病(CHD)和2型糖尿病(T2DM)關(guān)系密切，T2DM患者出現(xiàn)冠脈粥樣硬化的時(shí)間早、程度重、預(yù)后差［1］。因 T2DM 的自主神經(jīng)病變可使不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)的早期臨床表現(xiàn)不典型，故及時(shí)診斷T2DM并UAP有助于盡快干預(yù)冠脈粥樣硬化進(jìn)展，減少患者心血管疾病的致殘率和病死率。在T2DM和冠脈粥樣硬化脂質(zhì)斑塊形成過(guò)程中，既有脂質(zhì)斑塊代謝紊亂，也有炎癥因子參與，表明炎癥反應(yīng)可能是連接T2DM和冠脈粥樣硬化發(fā)展的一個(gè)紐帶［2］;因單項(xiàng)檢測(cè)炎癥因子診斷CHD的價(jià)值有限，故多項(xiàng)指標(biāo)的懸浮芯片集成檢測(cè)有望提高其早期診斷。為探討高敏 C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、脂蛋白 a［Lp(a)］、脂聯(lián)素(ADPN)懸浮芯片集成檢測(cè)診斷T2DM并UAP的臨床價(jià)值，我們進(jìn)行了相關(guān)研究。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2007年4月～2008年4月在珠江醫(yī)院住院的UAP患者102例，男70例、女32例，年齡(61.6±10.8)歲。患者近1個(gè)月出現(xiàn)心絞痛表現(xiàn)，或原有穩(wěn)定型心絞痛表現(xiàn)而近期發(fā)生變化;冠脈造影顯示左主干、左前降支、左回旋支和右冠脈中至少有一支病變血管狹窄直徑≥75%。排除急性心肌梗死、吸煙、高脂血癥、高血壓病史、肝腎功能不全、急性感染、惡性腫瘤、肺栓塞、下肢動(dòng)靜脈栓塞、全身免疫性疾病及凝血功能障礙者。根據(jù)患者有無(wú)T2DM病史分為兩組，觀察組52例有T2DM病史，對(duì)照組50例無(wú)T2DM病史;兩組性別、年齡有可比性，其冠脈病變血管檢測(cè)參數(shù)見表1。

表1 兩組冠脈病變血管檢測(cè)參數(shù)比較(±s)

表1 兩組冠脈病變血管檢測(cè)參數(shù)比較(±s)

檢測(cè)參數(shù) 觀察組(n=52)對(duì)照組(n=50)P冠脈病變狹窄程度(%)90.5 ±8.20 86.3 ±10.10 ＜0.05冠脈病變長(zhǎng)度(mm) 26.8 ±6.20 10.6 ± 5.60 ＜0.05彌漫病變(例) 36 18 ＜0.05多支冠脈病變(例)30 10 ＜0.05

1.2 檢測(cè)方法 抽取兩組入院次晨靜脈血5 ml，3 500 r/min離心10 min后分離血清，－80℃冰箱凍存。將分別包被hs-CRP、Lp(a)、ADPN抗體的偶聯(lián)微珠按50 μl/孔加入96孔板中，真空抽干;加入100 μl/孔的 1 × Washing Buffer，真空抽干;分別加入用 1×Washing Buffer 1∶2 000稀釋的樣品100 μl/孔、標(biāo)準(zhǔn)品Ⅰ～Ⅵ，貼上封板膜。將反應(yīng)板放在平板搖床上，先后1 100 r/min振蕩1 min、600 r/min避光室溫孵育15 min;真空抽濾，加入100 μl/孔的1 ×Washing Buffer，洗滌3 次;加入100 μl/孔的生物素標(biāo)記抗體，將反應(yīng)板放在平板搖床上，先后1 100 r/min振蕩1 min、600 r/min避光室溫孵育15 min;真空抽濾，加入 100 μl/孔的 1 × Washing Buffer，洗滌3次;加入用1×Assay buffer 1∶12.5稀釋的鏈親和素—藻紅蛋白50 μl/孔，將反應(yīng)板放在平板搖床上，先后1 100 r/min振蕩1 min、400 r/min避光室溫孵育15 min;真空抽濾，加入100 μl/孔的1×Washing Buffer，洗滌 3 次;加入 125 μl/孔的 1 × Assay buffer重懸微珠，將反應(yīng)板放在平板搖床上，1 100 r/min振蕩1 min。最后，將反應(yīng)板置于Lumi-nex100多功能流式點(diǎn)陣分析儀上讀數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，兩組比較用t檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組檢測(cè)指標(biāo)比較見表2。

表2 兩組檢測(cè)指標(biāo)比較(mg/L，±s)

表2 兩組檢測(cè)指標(biāo)比較(mg/L，±s)

注:與對(duì)照組比較，*P ＜0.01

組別 n hs-CRP Lp(a)ADPN觀察組 52 11.6 ±5.3* 406 ±156* 5.5 ±3.2*對(duì)照組50 8.3 ±3.4 337 ±130 7.2 ±2.6

3 討論

T2DM并CHD患者發(fā)生UAP時(shí)，其冠脈造影多見血管病變較嚴(yán)重且彌漫，患者預(yù)后較差;如能及時(shí)對(duì)T2DM并UAP患者做出診斷并早期進(jìn)行干預(yù)，T2DM并CHD的心血管事件將得到有效抑制。傳統(tǒng)診斷T2DM并CHD的方法特異性不高，而冠脈造影是有創(chuàng)檢查。因此，尋找簡(jiǎn)便快捷診斷T2DM并CHD的方法極為必要。

研究表明，DM患者的CHD患病率高于非DM人群，各種慢性并發(fā)癥(特別是心血管事件)已成為T2DM患者的主要死亡原因;因炎癥反應(yīng)在T2DM冠脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用，故大量研究發(fā)現(xiàn)hs-CRP、Lp(a)、ADPN是CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［3，4］，且其對(duì)心血管事件發(fā)生具有良好的預(yù)測(cè)價(jià)值。目前，hs-CRP及Lp(a)作為CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素、ADPN作為CHD的強(qiáng)保護(hù)因子，在臨床廣泛應(yīng)用;但因檢測(cè)方法僅能觀察單個(gè)炎癥因子，其敏感性和特異性均受影響。此外，CHD致病因素復(fù)雜，迄今尚無(wú)一種炎癥因子可單獨(dú)預(yù)測(cè)CHD事件發(fā)生。

懸浮芯片集成檢測(cè)技術(shù)是將流式細(xì)胞技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)有機(jī)地整合在一起，實(shí)現(xiàn)多因子集成檢測(cè)，具有應(yīng)用范圍廣、快速高效等優(yōu)點(diǎn)。既往研究證實(shí)［5］，采用懸浮芯片集成檢測(cè)診斷CHD的敏感性及準(zhǔn)確性均明顯高于酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)，可提高CHD的早期預(yù)測(cè)。本研究顯示，與對(duì)照組比較，觀察組的冠脈病變狹窄程度嚴(yán)重，冠脈病變長(zhǎng)，彌漫病變及多支冠脈病變多;血清hs-CRP、Lp(a)明顯升高，ADPN明顯降低，與文獻(xiàn)報(bào)道的糖調(diào)節(jié)受損導(dǎo)致冠脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素作用增強(qiáng)、炎癥反應(yīng)參與冠脈粥樣硬化形成及其并發(fā)癥的過(guò)程一致［6］。提示懸浮芯片集成檢測(cè)技術(shù)將hs-CRP、Lp(a)、ADPN的檢測(cè)方法統(tǒng)一在一個(gè)平臺(tái)上，能在較短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確地獲得多指標(biāo)的信息。

總之，本研究表明懸浮芯片集成檢測(cè)技術(shù)監(jiān)測(cè)炎癥因子變化，可及早診斷T2DM并UAP患者，進(jìn)行有效干預(yù)，以減少其心血管事件發(fā)生。

［1］Burke AP，Kolodgie FD，Zieske A，et al.Morphologic findings of coronary atherosclerotic plaques in diabetics:a postmortem study［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24(7):1266-1271.

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［5］李健洪，劉映峰，繆緋，等.超敏C反應(yīng)蛋白、脂蛋白(a)和脂聯(lián)素集成檢測(cè)診斷冠心病的價(jià)值［J］.心臟雜志，2008，20(2):210-212.

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