郭劍偉,蘇麗娜,劉光明
(大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南 大理 671000)
薯蕷皂素即薯蕷皂苷元(diosgenin),為白色針狀結(jié)晶或輕質(zhì)粉末,化學(xué)名為 Δ5-異螺旋甾烯 -3β 醇,分子式 C27H42O3,熔點(diǎn)195~205℃,難溶于水,可溶于甲醇、石油醚等有機(jī)溶劑。其在植物中幾乎沒(méi)有游離態(tài)形式存在,而是糖苷基與糖基結(jié)合在一起形成薯蕷皂苷(dioscin),存在于薯蕷屬等植物的根莖中。傳統(tǒng)生產(chǎn)的“酸水解-汽油提取”工藝最突出的缺點(diǎn)是環(huán)境污染和資源浪費(fèi),為此,國(guó)內(nèi)近年來(lái)出現(xiàn)了大量清潔生產(chǎn)和資源綜合利用新工藝的研究報(bào)道,有些研究成果已取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益。在此分類(lèi)介紹了薯蕷皂素提取工藝的研究進(jìn)展,一是以Marker和Wall為代表的先提取后水解工藝,二是以Rothrok提出的先水解后提取工藝[1],三是水解與萃取同步工藝。
先提取后水解工藝是指先提取薯蕷總皂苷,然后水解生成薯蕷皂苷元,再進(jìn)行提取的工藝。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)圖1。這一類(lèi)工藝通常先采用乙醇提取薯蕷總皂苷,提取液經(jīng)濃縮,然后用硫酸或鹽酸水解生成薯蕷皂苷元,水解物經(jīng)洗滌、干燥后,用石油醚、汽油等有機(jī)溶劑回流或索氏常規(guī)提取薯蕷皂苷元,也可采用超臨界CO2流體萃取(supercritical CO2fluid extraction,SFE-CO2)等方法提取,再經(jīng)重結(jié)晶即得純品。
圖1 薯蕷皂苷和薯蕷苷元的結(jié)構(gòu)
毛楠等[2]用乙醇回流提取、濃縮得黃姜總皂苷,用1.5 mol/L硫酸水解4 h,水解物中和、干燥后用120號(hào)汽油提取。通過(guò)正交試驗(yàn)得到提取總皂苷的最佳工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)90%,料液比1∶7,回流提取3 h,重復(fù)提取3次。在此條件下,每100 g黃姜經(jīng)醇提、凍干可得到總皂苷20~30 g,皂素產(chǎn)率為1.51%,雖比傳統(tǒng)工藝降低3.82%,但耗酸量減少了71%。李謙等[3]用70%甲醇回流提取出黃姜中的薯蕷總皂苷,再用2 mol/L鹽酸水解3 h,石油醚索氏提取12 h,皂素的收率為2.69%,收率提高的同時(shí)大大減少了環(huán)境污染。超臨界CO2流體萃取是近年來(lái)應(yīng)用于中藥成分提取的新技術(shù)。李水清等[4]先用80%乙醇回流提取盾葉薯蕷總皂苷,然后用3%的鹽酸加熱水解4 h,將水解物用石灰乳中和、干燥后,采用正交試驗(yàn)研究超臨界CO2流體萃取水解物中薯蕷皂素的提取條件,結(jié)果最佳提取工藝為3倍量無(wú)水乙醇作夾帶劑、萃取壓力30 MPa、溫度50℃、時(shí)間2 h。與汽油回流提取相比,該法收率提高了12.2%,且有效減少了酸的用量,不存在有機(jī)溶劑殘留問(wèn)題,具有對(duì)環(huán)境污染小、生產(chǎn)周期短的優(yōu)點(diǎn)。
超聲波在液體中傳播時(shí)產(chǎn)生的空化效應(yīng)、熱效應(yīng)和機(jī)械粉碎作用,能使植物細(xì)胞壁破裂,使細(xì)胞內(nèi)容物更容易釋放而增大傳質(zhì)速率,促使液-固之間的分子相互滲透,從而加快中藥成分的浸潤(rùn)、滲出和溶解。因此,超聲波提取法具有高效、反應(yīng)條件溫和、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),有利于工業(yè)化推廣。牛春玲等[5]將黃姜粉碎過(guò)60目篩,先用乙醇超聲提取其中的總皂苷,再用鹽酸水解、石油醚提取薯蕷皂素。應(yīng)用響應(yīng)面分析法優(yōu)化超聲提取的工藝,最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)72% ,料液比1∶10,超聲時(shí)間45 min,超聲功率420 W,比發(fā)酵-酸水解法的收率提高了26.46%。韓楓等[6]在超聲提取薯蕷總皂苷之前,對(duì)原料進(jìn)行了磨漿處理,結(jié)果證明新鮮薯蕷經(jīng)磨漿處理可將植物組織打碎,使皂苷組分更容易釋放出來(lái),有利于皂素的提取,與直接酸水解法相比,收率(3.15%)提高了18%,且提取物純度高、鹽酸用量降低90%、石油醚用量降低60%,具有良好的工業(yè)應(yīng)用前景。劉樹(shù)興等[7]在超聲提取的基礎(chǔ)上,于提取液中加入不同表面活性劑,協(xié)同提取盾葉薯蕷總皂苷,結(jié)果以十二烷基硫酸鈉(SDS)為表面活性劑的效果最好。
微波能破壞藥材結(jié)構(gòu),降低淀粉和纖維素的包裹或屏蔽作用,進(jìn)而減少傳質(zhì)阻力,有利于皂苷的提取。劉琳等[8]用微波輔助乙醇/硫酸銨雙水相體系,從盾葉薯蕷中提取皂苷成分,結(jié)果表明,各種皂苷成分可有效地富集于醇相。提取總皂苷的最佳條件為藥材∶乙醇質(zhì)量比為1∶21,雙水相比例為乙醇:硫酸銨=25% ∶19%,該條件下總皂苷的提取率為95.1%。并進(jìn)一步以70%乙醇為提取劑,比較了索氏提取、回流、冷浸漬與微波輔助雙水相提取4種方法的提取效果,結(jié)果微波輔助雙水相提取總皂苷的提取率高于回流提取和冷浸漬提取,略低于索氏提取,但總皂苷提取液所含的糖和雜蛋白較少,有利于重結(jié)晶純化。
張黎明等[9]研究了超聲波裂解穿山龍薯蕷總皂苷苷鍵的工藝,先用乙醇提取總皂苷,再經(jīng)超聲裂解生成皂苷元。以薯蕷總皂苷的降解率和皂苷元的收率為指標(biāo),考察了超聲波影響薯蕷總皂苷苷鍵裂解的因素,通過(guò)單因素試驗(yàn)得出75%乙醇為超聲溶劑、功率為800 W、超聲120 min時(shí)效果最好,皂苷元收率為1.898%,比預(yù)發(fā)酵-酸水解法降低了2%,但具有時(shí)間短、能耗低、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)。
近臨界水是指溫度在250~350℃之間的壓縮液態(tài)水,對(duì)大多數(shù)有機(jī)物有非常好的溶解能力,而且可以通過(guò)調(diào)節(jié)溫度和壓力,使其密度、介電常數(shù)、離子積、黏度等物理性質(zhì)發(fā)生改變,從而調(diào)節(jié)其溶解性質(zhì)。在近臨界水中,水的離子積比常溫大103倍,且隨著壓力的升高繼續(xù)呈指數(shù)倍增加,水自身離解釋放出相當(dāng)量的H+和OH-,具有良好的酸堿催化作用,因而可用于水解反應(yīng)。同時(shí),近臨界水還具有黏度小、傳質(zhì)阻力小、擴(kuò)散系數(shù)大、對(duì)環(huán)境無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)。朱憲等[10]用乙醇提取出黃姜皂苷,加去離子水乳化成皂苷乳化液,然后導(dǎo)入超臨界水反應(yīng)裝置中進(jìn)行近臨界水水解,水解物干燥后用石油醚回流提取得薯蕷皂苷元。通過(guò)單因素試驗(yàn)得到近臨界水水解的最佳工藝條件為溫度260℃,壓力25.0 MPa,時(shí)間10 min。在此條件下薯蕷皂苷元的收率為1.46%,與直接酸水解提取(2.01%)和皂苷乳化液酸水解提取(1.78%)相比較低,但近臨界水水解法克服了傳統(tǒng)酸水解法水消耗量大、環(huán)境污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)。
直接酸水解-提取工藝:該工藝是先將薯蕷根莖適當(dāng)粉碎,直接用硫酸或鹽酸加熱回流水解,水解物用飽和碳酸鈉或氫氧化鈣等水溶液中和,水洗滌,80℃烘干后,提取薯蕷皂苷元。此法費(fèi)時(shí)、提取率較低、有機(jī)酸用量較大,且植物中的淀粉和纖維素在酸水解過(guò)程中被破壞而不能利用,廢水排放量大,母液回收利用率低,環(huán)境污染嚴(yán)重。張?jiān)G涞萚11]取干燥盾葉薯蕷粉末用2 mol/L的硫酸回流水解4 h,濾過(guò),濾渣用10%NaOH洗滌至中性,干燥,索氏提取8 h,濃縮提取液并將產(chǎn)物結(jié)晶,最后干燥得薯蕷皂苷元,收率為1.28%,提取率為44.81%。陳俊英等[12]分別以黃姜鮮料、干粉、水解物為原料,采用超臨界CO2流體萃取薯蕷皂素,探討了夾帶劑對(duì)薯蕷皂素收率的影響。結(jié)果表明,對(duì)于黃姜鮮料和干粉,無(wú)夾帶劑時(shí)幾乎萃取不出皂素,有夾帶劑時(shí)也僅能很少量萃取,而水解物最高,且有夾帶劑時(shí)萃取率高于無(wú)夾帶劑;所選用的5種夾帶劑對(duì)皂素的萃取率由高到低的順序?yàn)榧状迹緹o(wú)水乙醇>乙酸乙酯>丙酮>石油醚,且乙醇的萃取率隨著濃度的增加而增大。
微波輔助直接酸水解-微波萃取工藝:舒明勇[13]在直接酸水解的基礎(chǔ)上,對(duì)硫酸水解和石油醚提取階段采用微波輔助處理,結(jié)果在粉碎粒度60目、料液比1:20、10%硫酸微波水解10 min、100℃石油醚微波提取10 min的條件下,盾葉薯蕷皂苷元的得率為1.84%。表明微波提取不會(huì)改變薯蕷皂苷元的基本結(jié)構(gòu),且具有簡(jiǎn)便、快速、得率高等特點(diǎn)。
該工藝是在直接酸水解之前增加了原料預(yù)發(fā)酵處理。宋子言等[14]對(duì)黃姜預(yù)發(fā)酵酸水解工藝和水解液的循環(huán)利用進(jìn)行了研究,結(jié)果表明在料液比1∶2、40℃預(yù)發(fā)酵24 h、1 mol/L硫酸水解4 h、汽油索氏提取5 h的條件下,收率最高(2.4%),水解液可以循環(huán)利用6次。采用此工藝,每生產(chǎn)1000 kg薯蕷皂素,可節(jié)約水246 m3和濃硫酸11.6 m3,少排放污水305 m3。王穎等[15]將黃姜在室溫下分別保存15 d和30 d,再用70%乙醇提取,大孔樹(shù)脂脫糖、脫色并分離純化,最終薯蕷皂素的得率分別為0.99%和2.04%,說(shuō)明隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng),收率增加。張惟廣等[16]對(duì)預(yù)發(fā)酵處理過(guò)程采用空氣恒溫振蕩器動(dòng)態(tài)發(fā)酵,發(fā)現(xiàn)振蕩頻率對(duì)薯蕷皂素收率也有一定的影響,動(dòng)態(tài)發(fā)酵的效果優(yōu)于靜態(tài)發(fā)酵。
純粹生物酶解-提取工藝:純粹生物酶解包括直接酶解和微生物發(fā)酵間接酶解兩種類(lèi)型。其機(jī)理是通過(guò)底物(薯蕷皂苷)誘導(dǎo)機(jī)制,用特異性的酶酶解薯蕷皂苷的糖苷鍵,從而使薯蕷皂苷轉(zhuǎn)化生成薯蕷皂苷元。微生物發(fā)酵是向原料中加入可代謝產(chǎn)生相應(yīng)酶的微生物,在適宜條件下培養(yǎng),使其分泌出可促進(jìn)糖苷鍵斷裂的酶。王亞南等[17]比較了細(xì)菌發(fā)酵法、真菌發(fā)酵法和酶解法3種轉(zhuǎn)化黃姜薯蕷皂苷成為皂素的方法,結(jié)果采用 Rhodopseudomonas sp.No.1 和 Arthrobacter sp.No.3 細(xì)菌發(fā)酵的轉(zhuǎn)化率僅為 20% ,采用 Aspergillus sp.42和 Aspergillus sp.848真菌發(fā)酵的轉(zhuǎn)化率達(dá)30%;采用直接酶解法(即真菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)所代謝出的酶)進(jìn)行酶反應(yīng)定向轉(zhuǎn)化的效果最佳,轉(zhuǎn)化效率高達(dá)95%,與細(xì)菌及真菌發(fā)酵法相比,直接酶解法操作簡(jiǎn)單、效果更好,但成本較高,不適宜工業(yè)化生產(chǎn)。喻東等[18]從66株菌中篩選得到1株高效轉(zhuǎn)化薯蕷皂苷的菌株,并且通過(guò)正交試驗(yàn)確定了發(fā)酵酶解的最佳條件為發(fā)酵3 d、酶解12 h、酶解溫度50℃,薯蕷皂苷轉(zhuǎn)化率達(dá)85%,薯蕷皂苷元收率為0.65%,與直接酸水解法相當(dāng)。說(shuō)明該方法基本能夠達(dá)到傳統(tǒng)酸水解的水平,是一種無(wú)污染的清潔生產(chǎn)工藝。
酶解預(yù)處理-酸水解-提取工藝:植物中的薯蕷皂苷元與糖基連接形成薯蕷皂苷,與大量的淀粉混存于細(xì)胞中,外部被纖維組成的細(xì)胞壁包裹著,同時(shí)還有果膠等雜質(zhì)存在。應(yīng)用纖維素酶可以促進(jìn)β-D-葡萄糖苷鍵的水解而破壞植物細(xì)胞壁,果膠酶可以使果膠分解,有利于成分的析出;淀粉酶可分解淀粉,降低料液的黏度;糖化酶可使薯蕷皂苷連接的糖鏈部分?jǐn)嗔选_@樣通過(guò)生物酶的處理,可以減小藥材包裹薯蕷皂苷的屏蔽作用,生成次級(jí)皂苷,空間位阻減少,從而能最大限度地將薯蕷皂苷水解成皂素,提高收率。張?jiān)G涞萚11]采用生物酶階梯分步處理方法,依次在盾葉薯蕷粉末水浸液中加入纖維素酶和果膠酶復(fù)合酶制劑、淀粉酶、糖化酶進(jìn)行階梯生物酶解,再用硫酸水解,汽油提取皂素,收率為2.79%,比直接酸水解法(1.28%)、自然發(fā)酵法(1.86%)和復(fù)合酶解法(2.15%)的收率都高,且該方法所得產(chǎn)品的熔點(diǎn)高、熔距短。劉國(guó)際等[19]研究了4種不同酶預(yù)處理黃姜后再酸水解提取薯蕷皂素的工藝,結(jié)果從產(chǎn)品收率來(lái)看,復(fù)合酶(即纖維素酶和淀粉酶按1∶1組成)>纖維素酶>淀粉酶>糖化酶。張?chǎng)┑萚20]將黃姜粉碎,以黑曲霉為菌種,加0.5%尿素作為氮源,發(fā)酵90 h,然后用2 mol/L HCl水解,氯仿提取皂素,收率可達(dá)1.26%,比直接酸水解法產(chǎn)率提高了35.5%。
分離法的原理是根據(jù)淀粉和纖維素難溶于水,而薯蕷皂素存在于可溶性皂苷中的性質(zhì),用研磨過(guò)篩等方法分離出纖維素,再將淀粉從分離液中沉降下來(lái),從而與皂苷分離。這樣一來(lái),既可降低淀粉和纖維素對(duì)皂苷的屏蔽作用,便于水解,減少耗酸量和廢水排放,同時(shí)分離得到的纖維素可進(jìn)一步生產(chǎn)纖維素衍生物,淀粉可經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)酒精等副產(chǎn)品,綜合利用了資源。趙宗梁等[21]以穿龍薯蕷為材料,首先將纖維素、淀粉和皂苷復(fù)合物分離,然后對(duì)皂苷復(fù)合物酸水解獲取皂素,結(jié)果皂素收率比傳統(tǒng)工藝提高了5.54% ,同時(shí)酸用量減少了80%、廢水量減少了75%,大幅降低了污染。毛楠等[22]采有分離-發(fā)酵法提取黃姜皂素,先加水懸浮去除部分纖維,再加淀粉酶酶解,糖化酶發(fā)酵后蒸餾酒精,剩余物料加硫酸水解,提取皂素,收率為2.09%,比傳統(tǒng)工藝提高了33.12%,同時(shí)每100 g原料可產(chǎn)無(wú)水乙醇18.95 mL,廢水化學(xué)需氧量(COD)降低了34.75%。舒國(guó)偉等[23]比較了預(yù)發(fā)酵法、分離法、酶解法、預(yù)發(fā)酵-黑曲酶發(fā)酵法、酶解-黑曲酶發(fā)酵法、雙分離法和雙分離-預(yù)發(fā)酵法7種黃姜皂素生產(chǎn)工藝在淀粉和纖維素得率、用酸量和皂素得率等方面的差異,結(jié)果就資源綜合利用和環(huán)保的角度而言,雙分離法為最優(yōu)工藝,即將粉碎的黃姜過(guò)120目篩分離纖維素,濾液靜置沉淀4 h分離淀粉,再將分離淀粉后的懸濁液離心(3000 r/min,10 min),取沉淀物酸水解4 h(1 mol/L鹽酸,121℃),水解物經(jīng)減壓抽濾沖洗至中性后用石油醚索氏提取6 h,皂素的得率為1.299%,同時(shí)可得到32.75%的淀粉和46.36%的纖維素。該工藝資源綜合利用率最高,且酸用量?jī)H為預(yù)發(fā)酵法的8.3%,廢液生化需氧量(BOD)、化學(xué)需氧量(COD)值明顯降低,顏色變淺,減少了環(huán)境污染,基本實(shí)現(xiàn)了清潔生產(chǎn)的目的。
熱壓分解是利用高溫高壓的水蒸氣進(jìn)行短時(shí)處理,在破壞淀粉和纖維素超分子結(jié)構(gòu)的同時(shí)使與薯蕷皂素連接的糖苷鍵斷裂,游離出薯蕷皂素。陳俊英等[24]利用飽和蒸氣為介質(zhì),熱壓分解盾葉薯蕷根莖,熱分解后的物料干燥后用石油醚提取皂素。通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化得到最優(yōu)條件為操作壓力1.4 MPa,保壓30 min,投料量為負(fù)載的85%,收率為1.745%。與酸水解法相比,熱壓分解工藝無(wú)需酸、堿處理和中和洗滌,因此基本無(wú)廢水產(chǎn)生,且生產(chǎn)能耗低,可大大降低生產(chǎn)成本。王俊等[25]采用超臨界CO2流體萃取穿山龍熱壓分解物中薯蕷皂素,探討了萃取壓力、溫度、時(shí)間、攜帶劑類(lèi)型以及含量等因素對(duì)收率的影響,通過(guò)單因素試驗(yàn)確定最佳工藝條件為萃取壓力35.0 MPa,溫度45℃,時(shí)間3 h,95%的乙醇為攜帶劑,攜帶劑含量為3%,CO2流速2 L/min。在此條件下,皂素收率為3.11%,比石油醚回流提取12 h的收率高1.99倍。
該方法最早是由Sauvaire等報(bào)道,用硫酸-異丙醇水解原位萃取葫蘆巴種子、多花薯蕷塊莖,薯蕷皂苷元產(chǎn)率顯著高于傳統(tǒng)鹽酸水解法。Denis等也利用該方法水解原位萃取三角葉薯蕷細(xì)胞培養(yǎng)物,薯蕷皂苷元產(chǎn)率明顯提高,并能顯著降低水解副產(chǎn)物的形成。袁麗紅等[26]對(duì)盾葉薯蕷中薯蕷皂苷元的水解原位萃取進(jìn)行了研究,結(jié)果表明,在料液比 1∶17、硫酸濃度1.25 mol/L、異丙醇濃度70%、提取7.5 h的條件下,與鹽酸直接水解法相比,收率提高了68%。郭盛磊等[27]將水解原位萃取法和超聲相結(jié)合,建立了超聲輔助水解原位萃取穿山龍中薯蕷皂素的方法,結(jié)果表明,樣品在料液比為1∶15條件下,用濃硫酸-異丙醇-水(8∶22∶70)溶液90℃超聲輔助回流2 h,皂素的收率為1.79%,與水解原位萃取法相當(dāng),但時(shí)間縮短了50%。
利用皂苷極性大、易溶于極性溶劑,而皂苷元易溶于非極性溶劑的性質(zhì),可使水解獲得的薯蕷皂苷元自動(dòng)由水相轉(zhuǎn)移至與水不相溶的有機(jī)相中。如Rozanski等用鹽酸/二甲苯混合體系提取薯蕷皂苷元。楊歡等[28]用石油醚替代二甲苯,采用單因素試驗(yàn)考察了雙相酸水解法從穿山龍中提取薯蕷皂苷元的工藝,得到的最佳條件為原料 ∶濃鹽酸 ∶甲醇 ∶水 ∶石油醚 =10∶21∶60∶19∶100,加熱回流提取6 h,收率為1.629%,比硫酸直接水解法高23.04%,且提取條件溫和、工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短。
隨著近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)薯蕷皂素后續(xù)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)和新藥效用途的發(fā)現(xiàn),薯蕷皂素除用于傳統(tǒng)合成避孕藥和其他甾體激素藥物的原料外,還具有鎮(zhèn)咳祛痰、改善心血管功能、保肝、調(diào)脂、抗衰老、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、殺釘螺、抗炎、抗腫瘤等多種藥理作用,因此逐漸向保健品、化妝品等外延領(lǐng)域滲透[29]。未來(lái)全球?qū)κ硎氃硭氐氖袌?chǎng)需求仍然很大,目前我國(guó)是薯蕷皂素的主要生產(chǎn)國(guó),年產(chǎn)量約3.0×106kg,占世界總量的60%[30]。在上述眾多的提取工藝中,直接酸水解-有機(jī)溶劑提取由于設(shè)備簡(jiǎn)單、成本較低,容易實(shí)現(xiàn)規(guī)?;a(chǎn),且產(chǎn)率穩(wěn)定,仍然是目前大多數(shù)廠(chǎng)家采用的生產(chǎn)方法,雖然有各種各樣的工藝改進(jìn),但都難以完全擺脫酸水解帶來(lái)的環(huán)境污染問(wèn)題。生物酶解法條件溫和,專(zhuān)一性強(qiáng),操作簡(jiǎn)單;分離法能得到淀粉和纖維素等副產(chǎn)品,同時(shí)可有效降低酸水解負(fù)載;超臨界CO2流體萃取具有提取率高、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),且避免了有機(jī)溶劑易燃易爆的缺點(diǎn),在實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)方面具有很大的潛力;微波和超聲技術(shù)的輔助應(yīng)用與傳統(tǒng)加熱連續(xù)回流提取相比,具有能耗低、安全、快速的優(yōu)點(diǎn)。綜上所述,應(yīng)用新技藝和新工藝的清潔生產(chǎn)和資源綜合利用,將是未來(lái)薯蕷皂素提取研究的發(fā)展方向。
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