暢 敏，王慶偉，劉新友，張婷婷，李龍飛

第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院藥劑科，陜西 西安 710038

根皮素（phloretin，Ph）是存在于蘋果、梨等水果及多種蔬菜汁液中的類黃酮化合物，含有多個酚羥基，具有極強(qiáng)的抗氧化活性[1]。根皮素具有多種生物活性，對細(xì)胞無序增生有抑制作用，是食品中的抗誘變因子，可用于皮膚癌及其他腫瘤的治療，是一種潛在的腫瘤治療藥物[2]；對骨質(zhì)疏松、心血管硬化、高血脂癥、肥胖以及老年癡呆癥等疾病具有預(yù)防和治療作用[3]。目前其研究引起了廣泛關(guān)注，本文通過建立測定根皮素含量的方法，并測定在不同溶劑中的溶解度，為根皮素的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200液相色譜儀 （Agilent 1200泵、Agilent1200紫外檢測器、Agilent 1200色譜工作站）；BP211D電子分析天平（德國Sartorius公司）；SHZ-B水浴恒溫振蕩器（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；TGL-16C型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

根皮素對照品（第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)教研室制備，經(jīng)質(zhì)譜、紅外檢定，HPLC測定含量為99.3%）；根皮素原料 （第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)教研室制備，含量為98.0%）；甲醇、乙腈均為色譜純；乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙二醇、石油醚為分析純；水為二次蒸餾水。

2 方法及結(jié)果

2.1 溶液的制備

精密稱取10.00 mg根皮素對照品，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制備成1.00 mg/ml的根皮素母液，低溫避光保存?zhèn)溆谩Ｈ∧敢? ml置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得0.20 mg/ml的根皮素儲備液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Iinertsil ODS-3 柱 （4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.20%磷酸（40∶60，V/V）；流速為 1 ml/min；檢測波長為286 nm；進(jìn)樣量為20 μl；溫度為室溫。在此色譜條件下，取適當(dāng)濃度的根皮素對照品溶液進(jìn)樣測定，理論塔板數(shù)按根皮素峰計不低于1×104，對稱因子為1.01，根皮素峰的保留時間為6.3 min，其雜質(zhì)對主峰測定無干擾。見圖1。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取根皮素對照品儲備液于10 ml的容量瓶中，加甲醇稀釋定容至刻度，搖勻即得濃度分別為0.505、2.525、5.050、10.100、20.200、40.400、60.600 μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件檢測，記錄峰面積，以峰面積（Y）對濃度（X）作圖進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y=88.85X+0.2221（r=0.9998）， 可見根皮素在 0.505～60.600 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度考察

精密量取根皮素對照品儲備液適量，加甲醇溶解并定量稀釋成10.10 μg/ml的溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，RSD為0.09%，結(jié)果表明，在該色譜條件下儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性考察

精密量取根皮素對照品儲備液適量，加甲醇溶解并定量稀釋成10.10 μg/ml的溶液6份，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件檢測，計算峰面積的RSD為0.78%，表明本法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性考察

精密量取根皮素對照品儲備液適量，加甲醇溶解并定量稀釋成 10.10 μg/ml的溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件于 0、1、2、4、6、12 h分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，根皮素峰面積RSD為0.31%，表明根皮素溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 不同溶劑中根皮素的溶解度（25℃）

2.7 溶解度測定[4-5]

將過量的根皮素置具塞試管中，分別加入適量的水、乙醇、丙二醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷，超聲至不再溶解，放入振蕩器（100 r/min）中，（25±1）℃振搖 24 h，待溶解平衡后，取出根皮素的飽和溶液，置于離心機(jī)，10000 r/min離心10 min，精密吸取上清液，用甲醇定量稀釋后進(jìn)樣測定，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算根皮素在不同溶劑中溶解度。平行試驗(yàn)3次。見表1。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

通過紫外全波長掃描發(fā)現(xiàn)根皮素的最大吸收波長為225 nm和286 nm，在286 nm波長下儀器噪音響應(yīng)小，基線平穩(wěn)，故選擇286 nm作為根皮素的紫外檢測波長。

3.2 流動相的選擇

實(shí)驗(yàn)中比較了甲醇-水、乙腈-水兩個洗脫系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-水系統(tǒng)對得到的色譜峰峰形及分離度較好。流動相中加入磷酸對分離效果及前沿現(xiàn)象有很大改善，最終以乙腈-0.20%磷酸水溶液為流動相，得到的色譜峰峰形對稱，分離效果最佳。

3.3 溶解度實(shí)驗(yàn)

溶解度試驗(yàn)結(jié)果表明，根皮素在醇中的溶解度較高，在水和石油醚中溶解度極低，可見根皮素為水和酯都難溶的化合物。根據(jù)相似相容原理，根皮素結(jié)構(gòu)中含有多個酚羥基，所以根皮素易溶于醇類。

通過建立根皮素的高效液相測定方法，并對其在不同溶劑中的溶解度的測定，為進(jìn)一步分析測定根皮素、劑型研制及藥動學(xué)研究提供依據(jù)。

[1]LU Xiaoyu,ZENG Yaoying,YE Yanxia,et al.Anti-inflammatory and immunosuppressive effect of phloretin [J].Acta Pharmaceutica Sinica,2009,44(5):480-485.

[2]羅輝,汪亞君,陳杰,等.根皮素抑制肝癌細(xì)胞惡性表型的研究[J].中藥材,2008,31(7):1019-1021.

[3]徐凱,呂海濤.蘋果皮中根皮素的提取工藝研究[J].食品研究與開發(fā),2009,30(12):109-111.

[4]王慶偉,梅其炳,劉雪英,等.染料木黃酮的物化常數(shù)測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2003,23(12):729-730.

[5]王弘,陳濟(jì)民,張清民.黃芩苷的物化常數(shù)測定[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2000,17(2):105-106.