李素艷 林瑤光 蔣建坤 劉 瑩 蔣敦科 李 萍

(1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年消化科，南寧市 530021;2廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，南寧市 530021)

胃癌和其他部位的腫瘤一樣，其發(fā)生發(fā)展也是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，了解胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程對(duì)早期診斷胃癌提供了重要的線索和依據(jù)，也為早期治療提供了必要前提。實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)依賴于新生血管的生成，腫瘤血管的生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的必要條件，血管生成為腫瘤的生長(zhǎng)提供了營(yíng)養(yǎng)，也為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供了通道。微血管密度(microvessel density，MVD)測(cè)定是臨床上判定腫瘤惡性程度和預(yù)后的重要的生物學(xué)指標(biāo)［1，2］。本研究采用免疫組化法對(duì)輕度淺表性胃炎組織、胃癌前病變組織及胃癌組織進(jìn)行MVD檢測(cè)，以了解不同病變組織中MVD的表達(dá)情況及其臨床意義。

1 材料和方法

1.1 材料 收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2007年10月至2008年10月胃鏡活檢標(biāo)本蠟塊75例，其中輕度淺表性胃炎作為正常對(duì)照組15例，不典型增生和腸上皮化生即胃癌前病變組25例，早期胃癌組17例，進(jìn)展期胃癌組18例。男 49例，女 26例;年齡 18～77歲，平均(52±3.35)歲。所有病例和標(biāo)本要求滿足以下條件:經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋;未經(jīng)放療和化療。

1.2 試劑 主要試劑為鼠抗人CD34單克隆抗體、濃縮型DAB試劑盒和多聚賴氨酸，均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)脫水包埋，4 μm厚連續(xù)切片，分別進(jìn)行HE染色和免疫組化染色。免疫組織化學(xué)染色法具體操作步驟如下:采用EnVision(二步法)，按EnVision超敏試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，經(jīng)微波行抗原修復(fù)，DAB顯色，最后用蘇木素復(fù)染、脫水、封片。每批染色均設(shè)陰性對(duì)照(以PBS代替一抗)和用已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 MVD判斷標(biāo)準(zhǔn)及計(jì)算方法 結(jié)果判斷由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師來(lái)判讀。MDV測(cè)定計(jì)數(shù)按Weidner法進(jìn)行計(jì)算。先在低倍鏡(10×)下選取微血管最豐富的熱區(qū)(hot spot)，避開(kāi)腫瘤壞死和出血區(qū)域。然后在高倍視野下計(jì)算該區(qū)域視野的微血管數(shù)目，取平均值作為MDV［3］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組織中MVD的表達(dá)差異性及其和EGFR的相關(guān)性采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 MVD表達(dá)情況 各組病例MVD表達(dá)隨著病變惡性

圖1 MVD在組織中的表達(dá)(SP×400)

3 討論

MVD是對(duì)新生血管生成做出定量描述的一個(gè)指標(biāo)。MDV在對(duì)照組、胃癌前病變組、早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組之間相比有明顯差異(P＜0.05)。隨著病變惡性程度的增加，MVD值逐漸增加，各組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明MVD值越高，病變惡性程度越高。

腫瘤是由各種不同的基因蛋白共同作用來(lái)影響細(xì)胞增殖和生化的。腫瘤血管是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的物質(zhì)基礎(chǔ)，惡程度的增加而增加，各組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。具體情況如表1所示。

表1 各組病例MVD表達(dá)情況

2.2 MVD和EGFR表達(dá)的相關(guān)性 各組病例MVD和EGFR的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，如表2所示。

表2 各組病例MVD和EGFR的相關(guān)性

圖2 EGFR在進(jìn)展期胃癌組織中的表達(dá)(SP×400)

2.3 MVD和EGFR表達(dá)特征 MVD(CD34)陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀，定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)和胞膜，凡是陽(yáng)性著色的孤立內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇均被認(rèn)為是一條獨(dú)立血管，只要結(jié)構(gòu)不連續(xù)，分支結(jié)構(gòu)也作為一個(gè)血管，如圖1所示。EGFR陽(yáng)性細(xì)胞膜或細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒狀，如圖2所示。性腫瘤具有誘發(fā)宿主血管生成的能力。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在腫瘤形成早期并沒(méi)有血管出現(xiàn)，這時(shí)腫瘤生長(zhǎng)緩慢呈線性增長(zhǎng)，并可長(zhǎng)期處于休眠狀態(tài)。當(dāng)形成腫瘤血管后，腫瘤進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期而迅速生長(zhǎng)，并可出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。多血管是腫瘤具有侵襲性的特征。近年來(lái)對(duì)腫瘤血管生成的研究表明，血管生成在實(shí)體腫瘤的惡變、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等方面起至關(guān)重要的作用。腫瘤血管生成已成為判斷惡性腫瘤轉(zhuǎn)移與否及預(yù)后的重要指標(biāo)。趙坤等［4］研究發(fā)現(xiàn)，MVD值越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率越高，臨床分期也發(fā)生遞增，說(shuō)明MVD與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)MVD值與浸潤(rùn)程度、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并呈顯著正相關(guān)趨勢(shì)。提示CD34抗原不僅能客觀地反映腫瘤中MVD，并能作為判斷胃癌轉(zhuǎn)移與否及預(yù)后的重要依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，MVD均數(shù)在對(duì)照組、胃癌前病變組、早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組中呈逐級(jí)上升趨勢(shì)，且與EGFR之間呈正相關(guān)，與潘衛(wèi)新等［5］研究顯示EGFR值與MDV呈正相關(guān)一致。與李素艷等［6］研究結(jié)果顯示胃對(duì)照組、胃癌前病變組、早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組織中，隨著病變惡性程度增加，EGFR的表達(dá)率逐漸增加，表明EGFR的表達(dá)率高低與病變的惡性程度有關(guān)相一致，而EGFR值與MDV呈正相關(guān)。

綜上所述，我們可以根據(jù)胃癌前病變組織中MVD和EGFR表達(dá)的高低及陽(yáng)性與否來(lái)判斷他們的預(yù)后情況，從而決定對(duì)他們采取不同的治療措施。兩者均可作為判斷胃癌前病變患者病情及預(yù)后判斷的參考指標(biāo)。

［1］魏麗軍，李建民，從 娟，等.宮頸癌微血管計(jì)數(shù)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)［J］.中國(guó)藥物與臨床，2004，4(5):344 －346.

［2］熊正文，徐昌富，李宏偉，等.非小細(xì)胞肺癌中血管內(nèi)皮標(biāo)記物顯示微血管密度的對(duì)比研究［J］.中華胸心血管外科雜志，2003，19(4):223－225.

［3］Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer［J］.Am J Pathol，1995，147(1):9 －19.

［4］趙 坤，杜金榮.結(jié)腸癌與直腸癌的MVD對(duì)比研究［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，31(15):2355 －2357.

［5］潘衛(wèi)新，卜 平，朱海航.胃癌及癌前病變中的TFF21、EGFR表達(dá)與血管再生的相關(guān)性研究［J］.臨床消化病雜志，2009，21(6):339－341.

［6］李素艷，蔣建坤，林瑤光，等.胃癌前病變表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)及其意義［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2010，32(7):766 －768.