張立國(guó)， 張 超， 王春民， 楊宇杰， 倪力軍*

(1.華東理工大學(xué) 化學(xué)與分子工程學(xué)院，上海200237;2.承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 承德067000;3.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德067000)

很多中藥復(fù)方中將多種藥材混合提取揮發(fā)油入藥，如頸復(fù)康制劑中將川芎、羌活、蒼術(shù)、乳香、沒藥按照一定比例混合后采用水蒸氣蒸餾工藝提取揮發(fā)油入藥［1］。川芎是頸復(fù)康制劑中的君藥，其揮發(fā)油是川芎的主要活性成分，其中藁苯內(nèi)酯含量最高，具有解痙擴(kuò)血管等作用［2-3］，對(duì)于頸復(fù)康制劑的主治功效有重要貢獻(xiàn)。研究表明，對(duì)于揮發(fā)油含量偏低(0.3% ～0.5%)的川芎藥材，水蒸氣蒸餾工藝存在揮發(fā)油得率低，提取時(shí)間長(zhǎng)等缺陷［4］。而川芎與其它藥材混合提取，其揮發(fā)油成分?jǐn)?shù)目及量均會(huì)有所減少［5］。本實(shí)驗(yàn)采用提取-共沸精餾耦合工藝［6］，將川芎?jiǎn)为?dú)提取，川芎、羌活兩味藥材混合提取以及川芎、羌活、乳香、沒藥、蒼術(shù)五味藥材混合提取，并對(duì)不同混合方式制備的揮發(fā)油中川芎藥材的特征物質(zhì)藁苯內(nèi)酯量進(jìn)行了分析，以考察藥材混合提取對(duì)川芎揮發(fā)油提取率的影響。

1 材料與儀器

1.1 材料 川芎、羌活、沒藥、乳香和蒼術(shù)五味藥材(承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供)。甲醇，色譜純，(德國(guó)Merck公司)。

1.2 儀器 Agilent 7890A/5975C氣-質(zhì)聯(lián)用儀;Agilent 7683B自動(dòng)進(jìn)樣器;軟件:MSD化學(xué)工作站，帶NIST 05 MS譜庫。

2 方法

2.1 揮發(fā)油提取方法 采用提取-共沸精餾耦合工藝，該裝置工藝原理及特點(diǎn)見文獻(xiàn)［4］，控制藥材總質(zhì)量為200 g，將藥材進(jìn)行適當(dāng)粉碎并浸泡12 h后加入圓底燒瓶中，加入5倍于藥材總質(zhì)量的水即1L，連續(xù)回流提取9 h。

2.2 揮發(fā)油樣品的配制 取25 μL的揮發(fā)油樣品，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度線，待測(cè)。

2.3 GC-MS測(cè)試條件 氣相色譜條件:HP-5 MS(30 m×0.25 mm ×0.25 μm)毛細(xì)管柱;分流進(jìn)樣，分流比為 20 ∶1;程序升溫60℃(3 min)，以16℃/min的速率升至300℃，保持6 min;進(jìn)樣口溫度:250℃;載氣為氦氣，體積流量1 mL/min;EI離子源，電子能量為70 eV，離子源溫度220℃，質(zhì)量掃描范圍33 ～550 amu;進(jìn)樣量 0.2 μL。

2.4 單位質(zhì)量川芎藥材的藁苯內(nèi)酯提取率計(jì)算 在一定的濃度范圍內(nèi)和相同GC-MS測(cè)試條件下，川芎揮發(fā)油的特征物質(zhì)藁苯內(nèi)酯的色譜峰面積與藁苯內(nèi)酯的質(zhì)量成正比。

V工藝為每種工藝對(duì)應(yīng)的揮發(fā)油體積，V進(jìn)樣為進(jìn)樣體積，S工藝為V工藝對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯的峰面積，S進(jìn)樣為V進(jìn)樣對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯的峰面積，

單位質(zhì)量川芎藥材對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯峰面積記為A工藝，M藥材為川芎藥材的質(zhì)量，單位取g，

單位質(zhì)量川芎藥材的藁苯內(nèi)酯相對(duì)提取率yi

其中A工藝5為五味藥材混合提取時(shí)單位質(zhì)量川芎藥材所對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯峰面積，A工藝i為川芎藥材單獨(dú)提取和兩味藥材混合提取時(shí)單位質(zhì)量川芎藥材所對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯峰面積。

3 結(jié)果與討論

3.1 揮發(fā)油提取結(jié)果 按照2.1項(xiàng)中所述方法分別提取川芎，川芎-羌活兩味藥材混合，川芎、羌活、乳香、沒藥、蒼術(shù)五味藥材混合，蒼術(shù)、羌活、乳香、沒藥四味藥材混合的揮發(fā)油，將收集到的揮發(fā)油分別記錄為 CHX1，CHX2，CHX5，Blank，所得揮發(fā)油的體積見表1。

表1 不同藥材組合所提取揮發(fā)油的體積

3.2 GC-MS 測(cè)試結(jié)果

3.2.1 揮發(fā)油樣品的總離子流圖 取配好的CHX1、CHX2、CHX5、Blank甲醇溶液，按照2.3項(xiàng)測(cè)試條件進(jìn)行氣質(zhì)分析，對(duì)應(yīng)的總離子流圖見圖1。

圖1 揮發(fā)油樣品總離子流圖

通過MSD化學(xué)工作站檢索NIST 05 MS譜庫，并結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)［7-8］藁苯內(nèi)酯質(zhì)譜圖，對(duì)圖譜進(jìn)行解析，在3種制備方式所得的川芎揮發(fā)油樣品中，均檢索到藁苯內(nèi)酯，藁苯內(nèi)酯質(zhì)譜圖見圖2，而在空白樣品的揮發(fā)油樣品中，未檢索到藁苯內(nèi)酯。

為了便于觀察，我們截取藁苯內(nèi)酯出峰時(shí)間段的總離子流圖，并將不同制備方法和空白樣對(duì)應(yīng)的揮發(fā)油總離子流圖放在一起，從圖3上可以看到，羌活、蒼術(shù)、乳香、沒藥四味藥材混合提取的揮發(fā)油在藁苯內(nèi)酯出峰位置沒有響應(yīng)，對(duì)其藁苯內(nèi)酯出峰時(shí)間附近的峰進(jìn)行了質(zhì)譜分析，也沒有檢索到藁苯內(nèi)酯，因而排除了其它四味藥材的干擾，為準(zhǔn)確計(jì)算藁苯內(nèi)酯出峰面積奠定了基礎(chǔ)。

圖2 藁苯內(nèi)酯質(zhì)譜圖

3.2.2 單位質(zhì)量川芎藥材的藁苯內(nèi)酯提取率 通過化學(xué)工作站，記錄下藁苯內(nèi)酯出峰時(shí)間，并對(duì)將藁苯內(nèi)酯的峰面積進(jìn)行積分，參照2.4項(xiàng)公式，計(jì)算單位質(zhì)量川芎藥材的藁苯內(nèi)酯提取率y，結(jié)果見表2。

圖3 藁苯內(nèi)酯出峰時(shí)間段揮發(fā)油樣品的總離子流圖

表2 GC-MS測(cè)試下不同藥材組合單位質(zhì)量川芎藥材的藁苯內(nèi)酯提取率

由表2中可知單位質(zhì)量川芎藥材的藁苯內(nèi)酯提取率大小排列順序?yàn)?，CHX1＞CHX2＞CHX5，川芎藥材單獨(dú)提取時(shí)藁苯內(nèi)酯提取率是五味藥材混合提取的3.2倍，是二味藥材混合提取的1.4倍，該結(jié)果表明單獨(dú)提取川芎藥材能充分提取出其有效活性成分藁苯內(nèi)酯，川芎與其它藥材混合不利于藁苯內(nèi)酯的提取，且隨著混合藥材種類的增加，藁苯內(nèi)酯提取率下降。

藁苯內(nèi)酯提取率計(jì)算公式(1)-(4)中假設(shè)藁苯內(nèi)酯的色譜峰面積與藁苯內(nèi)酯的質(zhì)量成正比，是在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)成立的。為此我們根據(jù)3種提取方式對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯峰面積，配制了同一川芎揮發(fā)油不同濃度的樣品，使其藁苯內(nèi)酯峰面積變化范圍將3種提取方式對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯峰面積包含在內(nèi)。按照2.3項(xiàng)測(cè)試條件進(jìn)行氣質(zhì)分析，將藁苯內(nèi)酯峰面積對(duì)樣品濃度作圖(見圖4)，可知藁苯內(nèi)酯峰面積與川芎揮發(fā)油濃度的線性相關(guān)系數(shù)為0.996，由此表明在3種提取方式對(duì)應(yīng)的藁苯內(nèi)酯含量范圍內(nèi)，藁苯內(nèi)酯的色譜峰面積與其質(zhì)量線性關(guān)系良好，本文采用的藁苯內(nèi)酯提取率公式誤差較小，可以良好的體現(xiàn)出混合提取對(duì)頸復(fù)康制劑中藁苯內(nèi)酯提取率的影響。

圖4 藁苯內(nèi)酯色譜峰面積與川芎揮發(fā)油質(zhì)量濃度的關(guān)系

4 結(jié)論

與川芎混合提取的藥材種類越多，川芎揮發(fā)油中的主要成分藁本內(nèi)酯的提取率越低。川芎揮發(fā)油單獨(dú)提取更有利于其活性成分的提取。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2005年版一部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:624.

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