惠 娜， 魏玉輝， 陳 明， 張建強(qiáng)， 劉 純， 武新安*

(1.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院藥劑科，甘肅蘭州730000;2.蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州730000;3.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，甘肅蘭州730000)

平胃散源于《太平惠民和劑局方》卷之三，由蒼術(shù)Atractylodes Iancea(Thunb.)DC.、厚樸 Magnolia officinalis Rehd.et Wils.、陳皮 Citrus reticulate Blanco和甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch四味藥材組成，具有燥濕運(yùn)脾，行氣和胃之功效，主要用于慢性胃炎、消化道功能紊亂、胃及十二指腸潰瘍等屬濕滯脾胃者的治療［1］。王學(xué)清等［2］研究了平胃散水煎液對(duì)大鼠胃排空的影響，結(jié)果表明:平胃散可促進(jìn)大鼠胃排空，其作用機(jī)理可能是通過(guò)興奮膽堿能系統(tǒng)而發(fā)揮作用的。平胃散作為傳統(tǒng)中藥芳香劑的典范，蒼術(shù)、厚樸、陳皮均含有相對(duì)較高的揮發(fā)油，因而推測(cè)揮發(fā)性成分對(duì)平胃散的胃排空作用可能有較大貢獻(xiàn)。雖然龔范等［3-4］對(duì)平胃散組方中單味藥材蒼術(shù)、厚樸的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析，但到目前為止，關(guān)于平胃散揮發(fā)油對(duì)胃排空有無(wú)影響及其化學(xué)組成尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)主要研究平胃散及其單味藥揮發(fā)油是否影響大鼠胃排空以及它們的化學(xué)組成。

單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)(Single photo emission computed tomography，SPECT)是一種核醫(yī)學(xué)影像診斷技術(shù)，通過(guò)給大鼠灌胃給予核素標(biāo)記藥物，定時(shí)檢測(cè)大鼠胃中核素標(biāo)記藥物的殘留量即可實(shí)現(xiàn)對(duì)受試藥物胃排空作用的評(píng)價(jià)［5-6］。本研究通過(guò)大鼠灌胃平胃散組方及其單味藥材的揮發(fā)油一定時(shí)間后，給予核素標(biāo)記藥物锝［99mTc］噴替酸鹽注射液(pentetate acid and stannous chloride for injection，99mTc-DTPA)后采用SPECT進(jìn)行掃描檢測(cè)，通過(guò)軟件計(jì)算獲得各組藥物的促進(jìn)胃排空作用。

1 材料與動(dòng)物

1.1 儀器與藥品 Finnigan Trace GC–MS系統(tǒng)(Finnigan，Boston，MA，USA);DB-5MS毛細(xì)管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm，CA，USA);SPECT(Infinia VC Hawkeye 4，GE，A-merica，);蒼術(shù)、陳皮、厚樸及甘草由蘭州大學(xué)第一醫(yī)院中藥房提供，由蘭州大學(xué)藥學(xué)院馬志剛教授進(jìn)行鑒定;嗎丁啉(西安楊森制藥，批號(hào)090916243);锝［99mTc］噴替酸鹽注射液(江蘇省原子醫(yī)學(xué)研究所江原制藥廠);無(wú)水硫酸鈉(天津凱通化學(xué)試劑廠)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠(220～250 g)購(gòu)自甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(合格證號(hào)SCXK(甘)2004-0006)，實(shí)驗(yàn)期間水、飼料自由飲取。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均依照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理規(guī)范進(jìn)行實(shí)施，同時(shí)征得蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的同意。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取 分別稱(chēng)取平胃散處方藥材(蒼術(shù)15 g，厚樸 9 g，陳皮9 g，甘草6 g)156 g、蒼術(shù)100 g，厚樸100 g，陳皮100 g，甘草100 g切成碎片后裝入1000 mL圓底燒瓶，加700 mL水采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行揮發(fā)油提取，所得揮發(fā)油分別采用無(wú)水硫酸鈉干燥處理后采用GC-MS進(jìn)行分析。

2.2 揮發(fā)油 GC-MS分析及化合物鑒別 采用Finnigan Trace GC– MS(Finnigan，Boston，MA，USA)系統(tǒng)進(jìn)行分析，DB-5MS毛細(xì)管柱用于化合物的分離(30 m×0.25 mm×0.25 μm，CA，USA)。樣品解吸附后柱溫于40℃保持2 min后以15℃/min升溫速度加熱至250℃，然后樣品于250℃保持9 min。載氣為氦氣，體積流量為1.2 mL/min，分流比1∶30。質(zhì)譜儀采用EI電離源，激發(fā)電流200 μA、電離能70 eV，傳輸線溫度250℃，接口溫度220℃，掃描范圍33～650(m/z)。

2.3 大鼠胃排空實(shí)驗(yàn) 雄性Wistar大鼠在實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng)3 d后隨機(jī)分為8組，每組5只。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予嗎丁啉2 mg/(kg·d);平胃散揮發(fā)油給予低中高［2、10、25 mg/(kg·d)］3個(gè)劑量;蒼術(shù)揮發(fā)油組給予2 mg/(kg·d);厚樸揮發(fā)油組給予2 mg/(kg·d);陳皮揮發(fā)油組給予2 mg/(kg·d);陰性對(duì)照組給予同等體積的牛奶。以上所有藥品首先分散于3%Tween-80后分散于牛奶中。連續(xù)灌胃給藥6 d(每日1次)，第6天禁食(24 h)不禁水，于第7天在含藥物的牛奶中加入0.05 mCi99mTc-DTPA灌胃后立即采用SPECT(Infinia VC Hawkeye 4，GE，America，儀器條件:采用低能高分辨率針孔型探頭，放大倍數(shù)Zoom:3.0，采集時(shí)間20 s/幀)在0、5、10、15、20、30、40、50 min 和 60 min 時(shí)刻對(duì)大鼠胃內(nèi)锝殘留量進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)線性擬合得到每只大鼠的全胃半數(shù)胃排空時(shí)間GE T1/2(gastric emptying)。

2.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS12.0軟件包進(jìn)行單向方差分析(ANOVA)和Tukey-Kramer多組對(duì)比分析，以P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01具有顯著性差異;P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)均以±s表示。

3 結(jié)果

3.1 揮發(fā)油化學(xué)組成分析 采用水蒸氣蒸餾法對(duì)平胃散及其組成藥材的揮發(fā)油進(jìn)行提取，采用GC-MS進(jìn)行分離鑒定，結(jié)果表明:平胃散揮發(fā)油中主要含有β-桉葉醇(β-Eudesmol，37.79%)、茅術(shù)醇(Hinesol，27.88%)、D-檸檬烯(D-limonene，15.02%)、沉香螺醇(Agarospirol，4.12%);蒼術(shù)揮發(fā)油中主要含有 β-桉葉醇(45.66%)、茅術(shù)醇(39.58%);厚樸揮發(fā)油中主要含有 β-桉葉醇(46.69%)、Eudesuma-4(-)en-11-ol(13.44%)、氧化石竹烯(Caryophyllene oxide，10.02%)、(-)-Humulene eposideⅡ(3.26%);陳皮揮發(fā)油中主要含有D-檸檬烯(77.67%)、β-桉葉醇(3.23%);甘草揮發(fā)油量極低，主要含有 β-桉葉醇(20.44%)、茅術(shù)醇(12.49%)、2-甲基戊醛(3.08%)。

3.2 揮發(fā)油促進(jìn)大鼠胃排空作用 按2.3項(xiàng)的方法操作，以牛奶為陰性對(duì)照、嗎丁啉為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)平胃散揮發(fā)油(高、中、低3個(gè)劑量組)，蒼術(shù)、厚樸及陳皮揮發(fā)油進(jìn)行大鼠胃排空作用實(shí)驗(yàn)研究。各受試藥物組、陽(yáng)性、陰性對(duì)照組大鼠采用SPECT技術(shù)獲得的GE T1/2平均值見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組相比，平胃散揮發(fā)油高中低劑量組、厚樸揮發(fā)油組、陳皮揮發(fā)油組大鼠半數(shù)胃排空時(shí)間明顯縮短(P＜0.01)，說(shuō)明平胃散揮發(fā)油、厚樸揮發(fā)油及陳皮揮發(fā)油均對(duì)大鼠胃排空具有促進(jìn)作用;平胃散揮發(fā)油高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明高劑量平胃散揮發(fā)油促進(jìn)大鼠胃排空作用與嗎丁啉相似;蒼術(shù)揮發(fā)油組與陰性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，表明蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)正常大鼠胃排空無(wú)明顯影響。

表1 藥物促進(jìn)大鼠胃排空作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，n=5)

表1 藥物促進(jìn)大鼠胃排空作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，n=5)

注:與陰性對(duì)照組比:＊＊P＜0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比:#P＜0.05;與揮發(fā)油高劑量組比:▲P＜0.05。

分組 劑量 GE T1/2/min 25 mg/(kg·d) 23.15 ±2.21＊＊平胃散揮發(fā)油組 15 mg/(kg·d) 28.10 ±3.48＊＊#▲2 mg/(kg·d) 37.57 ±4.16＊＊#▲蒼術(shù)揮發(fā)油組 2 mg/(kg·d) 54.89 ±5.22#厚樸揮發(fā)油組 2 mg/(kg·d) 35.18 ±4.31＊＊#陳皮揮發(fā)油組 2 mg/(kg·d) 32.01 ±1.87＊＊#陽(yáng)性對(duì)照組(嗎丁啉組) 2 mg/(kg·d) 22.13 ±2.39＊＊陰性對(duì)照組(牛奶組) 10 mL/(kg·d)58.06 ±6.14

4 討論

通過(guò)對(duì)揮發(fā)油化學(xué)組成進(jìn)行分析，可以發(fā)現(xiàn)平胃散揮發(fā)油中β-桉葉醇的量(37.79%)最高，且該成分在蒼術(shù)揮發(fā)油(45.66%)、厚樸揮發(fā)油(46.69%)及甘草揮發(fā)油(20.44%)中量都非常高，而在陳皮揮發(fā)油中僅含3.23%，由于甘草中揮發(fā)油含量極低，因此，平胃散揮發(fā)油中的β-桉葉醇主要來(lái)源于蒼術(shù)、厚樸。平胃散揮發(fā)油中另一重要組分茅術(shù)醇(27.88%)主要來(lái)源于蒼術(shù)(39.58%)，而厚樸中不含該成分，陳皮中量較低(1.22%)，甘草揮發(fā)油中雖然該組分量較高(12.49%)，但由于甘草中揮發(fā)油量極低，且其在處方中比例較少，因而其對(duì)茅術(shù)醇量貢獻(xiàn)亦非常小。平胃散揮發(fā)油中第3個(gè)量較高的組分為D-檸檬烯(15.02%)，該組分主要來(lái)源于陳皮(77.67%)。綜上所述，β-桉葉醇、茅術(shù)醇和D-檸檬烯占平胃散總揮發(fā)油的80.69%，代表了平胃散總揮發(fā)油的主要化學(xué)組成信息，說(shuō)明平胃散揮發(fā)油化學(xué)組成主要來(lái)源于蒼術(shù)、厚樸和陳皮。

由于甘草揮發(fā)油量很低，實(shí)驗(yàn)未對(duì)甘草揮發(fā)油進(jìn)行胃排空作用考察。由表1可見(jiàn):灌胃給予不同劑量平胃散揮發(fā)油后，與陰性對(duì)照組相比均顯著促進(jìn)大鼠胃排空(P＜0.01)，且呈劑量依賴(lài)性。蒼術(shù)雖為平胃散的君藥，但其揮發(fā)油對(duì)正常大鼠胃排空與陰性對(duì)照組無(wú)差異(P＞0.05)，這一結(jié)果與Zhang等［7］研究結(jié)果一致，但 Zhang等［7］的研究也發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)壓力誘導(dǎo)的胃功能低下大鼠的胃排空具有很好的促進(jìn)作用，由此提示，有必要進(jìn)一步探討君藥蒼術(shù)揮發(fā)油在病理情況下對(duì)胃排空的影響。β-桉葉醇、茅術(shù)醇和D-檸檬烯占平胃散總揮發(fā)油的80.69%，推測(cè)它們對(duì)胃排空有較大貢獻(xiàn)，但這3種主要成分對(duì)胃排空的強(qiáng)度如何以及它們之間是否存在協(xié)同或拮抗作用有待于進(jìn)一步探討。

SPECT是一種可以對(duì)發(fā)射單光子的核素標(biāo)記探針在人體內(nèi)分布進(jìn)行成像的技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用SPECT技術(shù)，準(zhǔn)確地計(jì)算出了半數(shù)胃排空時(shí)間，表明SPECT是一種非常有效的可輔助用于胃排空測(cè)定的技術(shù)。

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