劉景東， 王志玲， 勾凌燕， 王 憬， 劉惠敏， 王秀卿

(第四軍醫(yī)大學(xué)白求恩軍醫(yī)學(xué)院，河北石家莊050081)

槐角Sophorae Fructus，冬季采摘自槐Sophorae L.的成熟果實(shí)，《神家本草經(jīng)》列為上品，是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材，也是《中華人民共和國(guó)藥典》歷版收載品種［1］。槐角主產(chǎn)于我國(guó)北部，華南及西南地區(qū)亦產(chǎn)，以河南豫西山區(qū)品質(zhì)最佳?；睒?shù)生長(zhǎng)緩慢，木材經(jīng)濟(jì)價(jià)值低，農(nóng)民從不把槐樹(shù)作為藥用經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，廣大農(nóng)村地區(qū)槐資源接近枯竭。目前有限的槐資源主要集中在城鄉(xiāng)道路兩旁。2010年元月后槐角價(jià)格節(jié)節(jié)攀升，從年初至8月價(jià)格上漲70%以上且供不應(yīng)求［2］。龍爪槐Sophora japonica var.pendula Loud.是槐在自然界中受到雷擊、動(dòng)物的啃食、病蟲(chóng)傷害等外部因素刺激突然變異而形成的新品種［3］，北京已有幾百年的種植歷史。文獻(xiàn)［4］對(duì)龍爪槐角與槐角對(duì)照藥材中主要的黃酮苷元槲皮素、山柰酚與染料木素進(jìn)行的比較研究，初步探索了龍爪槐角替代槐角使用的可行性。本實(shí)驗(yàn)參照王志玲等的方法［5］，考察了未水解的龍爪槐角主要黃酮苷和異黃酮苷成分，繪制了龍爪槐角與槐角對(duì)照藥材在260nm HPLC色譜圖，測(cè)定了龍爪槐角中的蘆丁與槐角苷，進(jìn)一步為龍爪槐角替代槐角使用提供理論依據(jù)，也為開(kāi)發(fā)新的槐資源提供參考。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀(美國(guó) Waters，1525高壓雙泵系統(tǒng)，2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，Breeze色譜數(shù)據(jù)工作站);AG135電子分析天平(d=0.01 mg/0.1 mg，瑞士);索氏提取器(天津玻璃儀器廠)。

龍爪槐角采自石家莊市不同地點(diǎn)(每處選10棵槐樹(shù)，每樹(shù)向陽(yáng)面采摘一枝，去除枝葉后，混勻，常水洗凈，80℃烘干備用。采摘日期:2008-12-15)。經(jīng)本院藥學(xué)教研室張書峰博士鑒定為龍爪槐的果實(shí)。蘆丁、槐角苷對(duì)照品及槐角對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100080-200606、11695-200501、121214-0101);甲醇和乙腈為色譜純級(jí)，高純水由Millipore純水器制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 -1%冰醋酸-乙腈(57 ∶38 ∶5，v/v);體積流量1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm;柱溫為室溫。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取減壓干燥至恒質(zhì)量的蘆丁和槐角苷對(duì)照品各10 mg，分別置于50 mL量瓶中，甲醇溶解后定容即為標(biāo)準(zhǔn)貯備液。取上述溶液，配成蘆丁和槐角苷質(zhì)量濃度均為2 μg/mL的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 分別精密稱取0.5 g干燥恒質(zhì)量的龍爪槐角及槐角對(duì)照藥材細(xì)粉，濾紙包成小包，置150 mL索氏提取器中，加甲醇90 mL，100℃水浴連續(xù)提取10 h，冷卻后用甲醇定容至100 mL，0.45 μm濾膜過(guò)濾，作為樣品溶液。

2.4 蘆丁和槐角苷保留時(shí)間的確定 取蘆丁和槐角苷對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)條件，進(jìn)樣10 μL，進(jìn)行色譜分析，計(jì)算蘆丁與槐角苷的保留時(shí)間分別為12.540、14.881(n=3)。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 回歸方程的計(jì)算及線性關(guān)系考察 分別精密吸取貯備液適量，用甲醇配制成蘆丁和槐角苷質(zhì)量濃度分為0.08、0.1、0.125、0.25、0.50、1.0、1.5、2.0 μg/mL 的混合溶液，按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣10 μL，每個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)3次，記錄色譜圖。以峰面積(A)與質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，蘆丁質(zhì)量濃度在0.08 ～1.0 μg/mL 線性關(guān)系良好，A=144 ×102C+195，r=0.9996，槐角苷在 0.125 ～ 2.0 μg/mL 線性關(guān)系良好，A=500 ×102C+105，r=0.9999。

2.5.2 儀器精密度考察 取蘆丁、槐角苷分別為0.5、1.0 μg/mL的混合溶液，按2.1項(xiàng)中色譜條件，在一天內(nèi)不同時(shí)間分別測(cè)定5次，計(jì)算日內(nèi)誤差;連續(xù)5 d每天測(cè)定1次，計(jì)算日間誤差，蘆丁的日內(nèi)和日間誤差RSD分別為0.74%和1.23%，槐角苷的日內(nèi)和日間誤差 RSD分別為0.75%和1.65%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定蘆丁與槐角苷的龍爪槐角樣品粉末(龍爪槐角-1)6份，每份0.5 g，精密稱定，分別精密加入不同質(zhì)量的蘆丁與槐角苷對(duì)照品，按2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定峰面積代入回歸方程計(jì)算加樣平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.6 龍爪槐角、槐角對(duì)照藥材HPLC色譜圖的繪制及蘆丁、槐角苷的測(cè)定 精密量取樣品溶液適量，用甲醇稀釋，使其濃度在線性范圍內(nèi)，按2.1項(xiàng)中所述條件，進(jìn)樣量為10 μL作HPLC分析，每個(gè)樣品重復(fù)3次，HPLC色譜圖結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。將蘆丁和槐角苷峰面積的平均值代入回歸方程分別計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 龍爪槐角樣品色譜圖

圖2 槐角標(biāo)準(zhǔn)藥材樣品色譜圖

3 討論

3.1 研究證實(shí)，槐角中的主要活性成分為黃酮與異黃酮類化合物［6］。黃酮類化合物的藥理學(xué)作用涵蓋抗氧化、抗輻射、抗腫瘤、抗炎、抗疲勞和免疫調(diào)節(jié)等諸多方面［7-10］。槐角中的黃酮類化合物多達(dá)27種［11］，種類及含量多于銀杏葉［12］，異黃酮的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于大豆［13］。劉景東等以往的研究結(jié)果顯示龍爪槐角中主要的黃酮苷元，槲皮素、染料木素和山柰酚分別為其干質(zhì)量的 0.3%、3.04% 和 2.74%［4］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示龍爪槐角中主要的黃酮苷，蘆丁與槐角苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.45%和4.44%。兩者含有量均高于銀杏葉和大豆?；苯侵胸S富的黃酮類化合物種類以及多方面的藥理學(xué)活性極大促進(jìn)了槐資源的研究、開(kāi)發(fā)和利用，使其具有廣闊的應(yīng)用前景。

表2 龍爪槐角與槐角對(duì)照藥材樣品中蘆丁與槐角苷的測(cè)定結(jié)果

3.2 以往的研究結(jié)果［4］和本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果均顯示龍爪槐角與槐角對(duì)照藥材總黃酮提取物水解前后的HPLC色譜圖峰型基本一致，主要有效成分的量接近，提示兩者具有極為相似的黃酮類化合物譜型，有一定的可替代性。此外，龍爪槐多種植于機(jī)關(guān)大院、大專院校、公園綠地，生態(tài)環(huán)境好，污染少，植物資源品質(zhì)優(yōu)于種植于道路兩旁的國(guó)槐，且龍爪槐樹(shù)冠低，極易采摘，資源極為豐富，具有開(kāi)發(fā)利用的價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)為龍爪槐角替代槐角應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。龍爪槐角如能與槐角通用，將會(huì)極大豐富現(xiàn)有槐資源，提高槐角的質(zhì)量，從根本上解決槐角資源緊張的問(wèn)題。龍爪槐角能否完全替代槐角還需進(jìn)一步藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

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