涂可斌，余聲文

(1.咸寧市咸安區(qū)婦幼保健院，湖北 咸寧 437000;2.湖北省中醫(yī)院)

硫磺性熱味酸，有毒。外用可治療疥癬、濕疹等皮膚病，常作為油膏或外洗劑、搽劑。三甲氧芐氨嘧啶(TMP)是一種廣譜抗菌增效劑，臨床上常與磺胺類(lèi)藥聯(lián)用以增強(qiáng)磺胺類(lèi)藥的抗菌作用。為了探討TMP對(duì)硫磺抗菌活性的影響，我們采用瓊脂稀釋法對(duì)比研究了硫磺、TMP及硫磺與TMP聯(lián)用對(duì)6種不同細(xì)菌的體外抗菌作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品

硫磺取自湖北省中醫(yī)院中藥庫(kù)。TMP購(gòu)自湖北民康制藥廠，批號(hào)19980621。

1.1.2 供試液配制

稱(chēng)取硫磺0.5g極細(xì)粉，加入無(wú)菌肉湯10ml，微熱使溶，即得硫磺供試藥液;稱(chēng)取50mgTMP于試管中，加入無(wú)菌肉湯10ml，搖勻即得TMP供試藥液;在另一份硫磺供試藥液中，再加入TMP50mg，微熱使溶，即得硫磺與TMP復(fù)方供試藥液。

1.1.3 菌種

①大腸桿菌;②傷寒桿菌;③綠膿桿菌;④水弧菌;⑤金黃色葡萄球菌;⑥志賀氏痢疾桿菌(以上菌種購(gòu)自武漢大學(xué)微生物典藏中心)。

1.2 方法

采用試管內(nèi)藥液稀釋法(二倍稀釋法)試驗(yàn)［1］，取無(wú)菌20ml敞口試管3排，每排15管編號(hào)排列，每排的第1管分別為上述3種供試藥液管。除每排的第1、14管外，其余各管中均加入無(wú)菌肉湯5ml，然后從第1管供試藥液中量取5ml加至第2管中，混勻，同法依次稀釋至第8管，混勻后吸出5ml于第14管中。每排的第14管作無(wú)菌陰性對(duì)照管，第15管作無(wú)藥陽(yáng)性對(duì)照管。然后于各管中加5ml熱無(wú)菌肉蛋白胨瓊脂，搖勻，趁熱依次傾入到同一型號(hào)的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，放置使瓊脂冷凝。除第14號(hào)培養(yǎng)皿外，1～15號(hào)培養(yǎng)皿分別劃分為6個(gè)近等的區(qū)域，并分別編號(hào)，然后在每個(gè)區(qū)域中分別用生化毛細(xì)管加入6種經(jīng)16h培養(yǎng)的各含菌培養(yǎng)液(約5.5 億個(gè)細(xì)菌/ml)10μl，37℃培養(yǎng) 20h左右，以細(xì)菌生長(zhǎng)的狀況作為判斷指針，觀察抗菌作用結(jié)果。

1.3 抗菌作用判斷標(biāo)準(zhǔn)

無(wú)抗菌作用指接種區(qū)可見(jiàn)大片細(xì)菌生長(zhǎng);抑菌作用指接種區(qū)可見(jiàn)極少量細(xì)菌點(diǎn)狀生長(zhǎng);具抗菌作用指接種區(qū)光滑無(wú)可見(jiàn)菌落。

2 結(jié)果

為便于直觀比較分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以抗菌作用最大稀釋試管號(hào)表示。1～13管藥物稀釋倍數(shù)依次為原濃度的 1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048、1/4096、1/8192。0:表示第1管(1/2倍原濃度)即無(wú)抗菌作用;±:表示從第1至該管均呈抑菌作用。各供試液抗菌作用結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各供試液抗菌作用結(jié)果(試管號(hào))

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在本文實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)大腸桿菌，硫磺與TMP在1∶2稀釋度時(shí)均無(wú)抗菌作用，但硫磺聯(lián)用TMP后抗菌活性較單用硫磺或TMP時(shí)大大增強(qiáng)，客觀上兩者聯(lián)用增加了硫磺和TMP的抗大腸桿菌作用;對(duì)傷寒桿菌，硫磺與TMP在1∶2稀釋度時(shí)均不顯示抗菌作用，兩者聯(lián)用，抗菌活性較單用硫磺或TMP均大大增強(qiáng);對(duì)綠膿桿菌，硫磺在1∶2稀釋度時(shí)不顯示抗菌作用，TMP卻有較強(qiáng)的抗菌作用，兩者聯(lián)用后作用與TMP單用時(shí)一致，但相對(duì)于硫磺而言仍是增強(qiáng);對(duì)水弧菌，硫磺有較弱的抗菌作用，TMP有一定的抑菌作用，兩者聯(lián)用后，抗菌活性較單用硫磺增大32倍;對(duì)金葡菌，硫磺有弱的抗菌活性，TMP為較強(qiáng)的抑菌作用，兩者聯(lián)用后，抗菌活性較單用硫磺增大64倍;對(duì)痢疾桿菌，硫磺有較弱的抗菌作用，TMP在1∶2稀釋度時(shí)不顯示抗菌作用，兩者聯(lián)用，抗菌活性較單用硫磺增大32倍。以上結(jié)果表明，硫磺聯(lián)用TMP后，對(duì)實(shí)驗(yàn)的6種細(xì)菌抗菌活性均大大增強(qiáng)，說(shuō)明硫磺與TMP聯(lián)用具協(xié)同作用。

臨床上常將硫磺制成油膏或外洗劑、搽劑，從本實(shí)驗(yàn)硫磺聯(lián)用TMP對(duì)金葡菌、綠膿桿菌等抗菌活性的增加，可以推斷將TMP加入硫磺，其療效將更佳，此觀點(diǎn)有待臨床進(jìn)一步驗(yàn)證。