棗莊學(xué)院生命科學(xué)系 劉 梅

棗莊宏宇飼料有限公司 史 挺

山東臨沂綠色和美飼料有限公司 劉秋菊

殼聚糖是甲殼素脫乙?；蟮漠a(chǎn)物，化學(xué)名稱為1，4-2-氨基-2脫氧-β-D-葡聚糖。殼聚糖具有良好的生物相容性，易被組織吸收，降解產(chǎn)物無(wú)毒害。研究表明，殼聚糖作為飼料添加劑，具有降低脂肪代謝、增強(qiáng)免疫等效果，是一類新型的綠色飼料添加劑（羅贊等，2008；劉海英等，2003）。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖還是一種良好的抗氧化劑。不同相對(duì)分子質(zhì)量殼聚糖對(duì)蘋(píng)果汁中2，2-二苯基-1-苦阱基自由基（DPPH自由基）、羥基自由基、超氧陰離子自由基等的清除效果的研究表明，低相對(duì)分子質(zhì)量的殼聚糖抗氧化活性最高 （刑榮娥等，2005）。本試驗(yàn)研究殼聚糖對(duì)肉仔雞抗氧化能力及免疫器官指數(shù)的影響機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì) 選擇96只1日齡AA肉仔雞，隨機(jī)分成4個(gè)日糧處理組，每個(gè)日糧處理組分4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞。第1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，第2、3、4組分別在日糧中添加50、100、150 mg/kg的殼聚糖?；A(chǔ)日糧參考NRC（1994）肉雞營(yíng)養(yǎng)需要配制，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)肉雞雙層籠養(yǎng)，自由采食和飲水，控制舍內(nèi)溫度、濕度和光照，衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)符合雞的衛(wèi)生要求。7日齡進(jìn)行新城疫弱毒苗首免，14日齡進(jìn)行法氏囊疫苗飲水免疫，21日齡新城疫弱毒苗加強(qiáng)免疫。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及其營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 樣品采集與測(cè)定 分別在21、42日齡時(shí)（采血前停止喂食12 h），從每組隨機(jī)取6只肉雞（雌雄各半），從翅靜脈采血，3000 r/min離心10 min分離得血清。裝于1.5 mL的eppendorf管中，置–20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.1 血液生化指標(biāo)測(cè)定 血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶 （GSH-Px）、CAT活力的測(cè)定采用試劑盒法，所用試劑盒由南京建成生物工程研究所購(gòu)買。

1.3.2 免疫器官指數(shù)測(cè)定 分別在21、42日齡從每個(gè)處理中隨機(jī)選取4只雞（1只/重復(fù)）宰殺，完整摘取脾臟、胸腺、法氏囊并稱重，用免疫器官的重量占體重的相對(duì)重量表示免疫器官指數(shù)（g/kg·BW）。

免疫器官指數(shù)=（免疫器官鮮重/活重）×100。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行方差分析，試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果分析

2.1 殼聚糖對(duì)肉仔雞抗氧化能力的影響

2.1.1 殼聚糖對(duì)肉仔雞血清中MDA含量的影響由表2可見(jiàn)，肉雞血清中MDA的含量，在21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的MDA含量無(wú)顯著差異 （P＞0.05）。而在42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，殼聚糖150 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA顯著降低7.10%（P<0.05）。

2.1.2 殼聚糖對(duì)肉仔雞血清中SOD、GSH-Px和CAT活力的影響 由圖1可知，在21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的SOD含量無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。而在42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，殼聚糖100 mg/kg組和150 mg/kg組雞血清中的SOD活力顯著上升（P<0.05）。

表2 殼聚糖對(duì)肉雞仔血清中MDA含量的影響mmol/mL

由圖2可知，在21日齡和42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的GSH-Px含量均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

由圖3可知，在21日齡和42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，殼聚糖100 mg/kg組和150 mg/kg組肉仔雞血清中的CAT顯著上升（P<0.05）。

圖1 殼聚糖對(duì)肉仔雞血清中SOD活力的影響

圖2 殼聚糖對(duì)肉仔雞血清中GSH-Px活力的影響

圖3 殼聚糖對(duì)肉仔雞血清中CAT活力的影響

2.2 殼聚糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 由表3可知，21日齡時(shí)，各處理組的脾臟指數(shù)差異不顯著（P＞0.05），而42日齡時(shí)各組間表現(xiàn)出顯著差異 （P＜0.05），其中 100 mg/kg殼聚糖組和150 mg/kg殼聚糖組較高，分別比對(duì)照組高40.7%和37.2%。各處理組肉仔雞的法氏囊指數(shù)在整個(gè)試驗(yàn)期間均未表現(xiàn)出顯著性差異（P＞0.05）。在21日齡時(shí)，殼聚糖150 mg/kg組的法氏囊指數(shù)最高；42日齡時(shí)，仍以100 mg/kg殼聚糖組和150 mg/kg殼聚糖組較高。胸腺指數(shù)在21日齡時(shí)組間差異不顯著（P＞0.05），但在42日齡時(shí)，殼聚糖100 mg/kg組和殼聚糖150 mg/kg組要顯著高于其他各組，分別比對(duì)照組高 63.8%和34.9%（P＜0.05）。

表3 殼聚糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響%

3 討論

3.1 殼聚糖對(duì)肉仔雞抗氧化能力的影響 生物體內(nèi)存在多種防御自由基損傷的抗氧化酶類，GSH-Px、SOD及 CAT是比較重要的幾種。而MDA為脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物 （LPO），因此測(cè)定MDA的量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接反映細(xì)胞損傷的程度（王述柏等，1998）。

SOD是酶促抗氧化體系中非常重要的一種抗氧化劑，其活性的高低可以反映機(jī)體清除氧自由基的能力（王鏡巖等，2002），往往與GSH-Px協(xié)調(diào)工作，阻止氧自由基啟動(dòng)的自由基鏈鎖反應(yīng)。盧美鸞等（2008）報(bào)道，添加低分子量殼聚糖的試驗(yàn)組中肉雞血清中SOD酶活力顯著提高，說(shuō)明殼聚糖可通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)抗氧化防御酶系活性來(lái)降低機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化水平，進(jìn)而使機(jī)體免受脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。本試驗(yàn)表明，在21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的SOD含量無(wú)顯著差異 （P＞0.05）。而在42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，100 mg/kg組和150 mg/kg組肉仔雞血清中的SOD顯著上升（P＜0.05）。

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過(guò)氧化物分解酶。正常情況下，GSH-Px特異性地催化GSH對(duì) H2O2的還原反應(yīng)，可以起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用，屬于體內(nèi)主要的抗氧化酶之一 （王鏡巖等，2002）。劉靜娜（2009）報(bào)道，高脂飼糧組（HF 組）大鼠血清GSH-Px活性顯著低于正常飼糧組（NF組），表明機(jī)體對(duì)氧化產(chǎn)物清除能力減弱；殼聚糖組 （CIS組）大鼠血清 GSH-Px活性與 NF組相近，表明殼聚糖能增強(qiáng) GSH-Px活性，減少過(guò)氧化對(duì)機(jī)體的傷害。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在21日齡和42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的GSH-Px含量均無(wú)顯著性差異 （P＞0.05）。

過(guò)氧化氫酶（CAT）是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶，能清除氧自由基反應(yīng)生成過(guò)氧化氫，使其成為無(wú)毒的水，保護(hù)機(jī)體組織免受損害。CAT屬于機(jī)體抗氧化系統(tǒng)中酶系統(tǒng)的重要組成之一，在清除自由基的過(guò)程中，與SOD具有協(xié)同作用。因而CAT含量的多少，亦為衡量機(jī)體抗氧化能力大小的重要因素（王鏡巖等，2002）。劉靜娜（2009）報(bào)道，高脂飼糧組（HF 組）大鼠血清 CAT活性顯著低于正常飼糧組（NF組），表明機(jī)體清除過(guò)氧化氫的能力減弱；殼聚糖組（CIS組）大鼠血清 CAT活性在正常飼糧（NF組）和高脂飼糧組（HF組）之間，表明殼聚糖能適當(dāng)增強(qiáng)CAT活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在21日齡和42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，殼聚糖100 mg/kg組和150 mg/kg組肉仔雞血清中的CAT顯著上升（P＜0.05）。

自由基造成生物體系損傷的重要因素是產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化物，其中最主要的是丙二醛（MDA）。MDA作為細(xì)胞膜不飽和脂肪酸過(guò)氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物，可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，即MDA含量的增減代表著脂質(zhì)過(guò)氧化作用的強(qiáng)弱，間接反映出細(xì)胞的受損程度。盧美鸞等（2008）報(bào)道，添加低分子量殼聚糖的試驗(yàn)組中肉雞血清中MDA含量影響不顯著。劉靜娜（2009）報(bào)道，高脂飼糧組（HF組）大鼠的血清MDA含量顯著高于脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)物MDA含量顯著升高；殼聚糖組（CIS組）大鼠血清 MDA含量水平與 NF組相近，說(shuō)明殼聚糖能抑制脂質(zhì)過(guò)氧化。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的MDA含量無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。而在42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，殼聚糖150 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA顯著降低7.10%（P<0.05）。

3.2 殼聚糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)是從免疫器官發(fā)育的角度來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)。王秀武等（2002）研究發(fā)現(xiàn)，在肉仔雞日糧中添加 0.1%的殼聚糖顯著增加了胸腺和法氏囊的相對(duì)重量。Huang等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，向日糧中添加不同劑量（50、100、150 mg/kg）的低分子殼聚糖對(duì)肉雞的免疫器官發(fā)育具有促進(jìn)作用。這與本試驗(yàn)的結(jié)果一致。

4 結(jié)論

肉仔雞日糧中添加殼聚糖能夠提高肉仔雞的抗氧化能力，增強(qiáng)免疫功能。

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