周 峰

（南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，江蘇 南京 211171）

細(xì)胞質(zhì)膜是細(xì)胞與外界環(huán)境之間物質(zhì)和能量交換的第一道屏障。當(dāng)細(xì)胞受到環(huán)境脅迫時(shí)，質(zhì)膜必然首先最先接觸到環(huán)境因子，可能最早作出響應(yīng)或受到傷害，繼而影響細(xì)胞內(nèi)一系列生理生化代謝。作為細(xì)胞的重要組成成分及功能行使者，質(zhì)膜H+-ATPase（PM H+-ATPase）也毫無(wú)疑問(wèn)地會(huì)對(duì)環(huán)境脅迫作出響應(yīng)，而且有可能是最早的響應(yīng)，并以加速或減緩細(xì)胞與環(huán)境之間的物質(zhì)和能量交換，使植物體與改變了的環(huán)境之間盡快達(dá)到相對(duì)平衡（如滲透調(diào)節(jié)等）。因此，近年來(lái)人們已開始注意離子均衡化（K+、Na+）這方面的研究，但工作才剛剛起步。

1 PM H+-ATPase的分子結(jié)構(gòu)和特點(diǎn)

PM H+-ATPase有蛋白激酶和磷酸酶活性部位，故屬E1E2-或P-ATPase型。該酶約有918個(gè)氨基酸殘基組成，為100 kD二聚體。Morsomme等[1]提出了PM H+-ATPase的拓?fù)鋵W(xué)模式圖（圖1）。PM H+-ATPase的N末端構(gòu)成H+入口的門；小胞質(zhì)環(huán)可能在PM H+-ATPase酶循環(huán)構(gòu)象變化中起作用；大胞質(zhì)環(huán)是ATP結(jié)合區(qū)，具有Asp位點(diǎn)，在酶循環(huán)中能夠被磷酸化；而C末端構(gòu)成了離子通道的出口，而且C末端作為自抑制結(jié)構(gòu)域?qū)γ富钫{(diào)節(jié)起關(guān)鍵作用[1]。PM H+-ATPase的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)決定其有以下生化特性：（1）受陽(yáng)離子激活：K+>NH4+>Rb+>Na+>Cs+>Li+；（2）受釩酸鹽的專一性抑制，因?yàn)樵撁笇貳1E2型；（3） 具有天冬氨酰磷酸化中間體；（4）pH 偏酸性，最適 pH 值為 6.0～6.5；（5）對(duì) Mg2+是必需的[2－3]。

圖1 PM H+-ATPase分子拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)圖[1]

2 PM H+-ATPase的生理功能

PM H+-ATPase在高等植物生命活動(dòng)中享有主宰酶的美譽(yù)。可見這種酶對(duì)植物生命活動(dòng)有何等重要的意義。其主要生理功能：維持細(xì)胞內(nèi)，特別是細(xì)胞質(zhì)pH相對(duì)穩(wěn)定，以保證生命活動(dòng)的正常進(jìn)行。提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和離子運(yùn)輸?shù)尿?qū)動(dòng)力。即由PM H+-ATPase活動(dòng)產(chǎn)生跨膜ΔμH+和ΔΨ，即跨膜電化學(xué)勢(shì)梯度（ΔP），又稱質(zhì)子驅(qū)動(dòng)力。溶質(zhì)的次級(jí)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)（如載體和離子通道）均依賴于PMF。PM H+-ATPase的生理作用包括：（1）控制細(xì)胞的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，根據(jù)酸生長(zhǎng)理論（Acid growth theory），PM H+-ATPase把H+從細(xì)胞內(nèi)泵入細(xì)胞壁，使壁pH值下降，塑性增加，細(xì)胞得以生長(zhǎng)；（2）通過(guò)改變細(xì)胞內(nèi)pH值而控制種子萌發(fā)；（3）控制氣孔和葉柄運(yùn)動(dòng)；（4）器官的極性生長(zhǎng)；（5）與鹽耐受性有關(guān)[1-3]。

3 K+、Na+與 PM H+-ATPase的活性

K+是植物必需的三大營(yíng)養(yǎng)元素之一，在各種類型植物細(xì)胞的生長(zhǎng)及代謝中發(fā)揮重要作用，參與許多生理過(guò)程（包括酶活性調(diào)節(jié)，蛋白質(zhì)合成及滲透調(diào)節(jié)等）。Na+與K+的化學(xué)性質(zhì)有很多相似性，但生物功能卻完全不同。Na+的主要生理作用是增大植物細(xì)胞的滲透勢(shì)，提高原生質(zhì)的親水性。由于K+、Na+水合離子半徑相似，外界Na+會(huì)影響K+的正常吸收，導(dǎo)致K+缺乏和Na+過(guò)量。而植物維持NaCl脅迫下K+穩(wěn)態(tài)的機(jī)制是和質(zhì)膜H+-ATPase的活性有密切關(guān)系[4]。

PM H+-ATPase水解ATP，建立跨膜電化學(xué)勢(shì)，為K+、Na+等次級(jí)運(yùn)輸提供驅(qū)動(dòng)力。K+對(duì)PM H+-ATPase活性的影響的研究剛剛開始，目前尚未取得一致意見。研究結(jié)果表明，K+可以使PM H+-ATPase的轉(zhuǎn)運(yùn)活力和水解活性增加，但關(guān)于PM H+-ATPase催化K+直接運(yùn)輸?shù)淖C據(jù)還沒有。也有研究結(jié)果證明，即使在缺K+的情況下，純化的PM H+-ATPase也能進(jìn)行ATP水解和H+運(yùn)輸，即ATPase在K+直接運(yùn)輸和ATP水解之間并不起調(diào)節(jié)作用，而只通過(guò)調(diào)節(jié)質(zhì)膜電化學(xué)勢(shì)調(diào)控K+跨質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)[5-6]?；h領(lǐng)等[7]的研究結(jié)果表明，生長(zhǎng)環(huán)境中鉀脅迫會(huì)導(dǎo)致小麥根PM H+-ATP酶水解活性增加，且水解活性受鉀刺激也增加；生長(zhǎng)環(huán)境中鉀充足會(huì)導(dǎo)致此酶水解活性比鉀虧缺時(shí)低，且水解活性受鉀刺激而下降。表明環(huán)境鉀水平可影響根內(nèi)PM H+-ATP酶活性及其某些性狀。NaCl脅迫對(duì)PM H+-ATPase的活性的影響可能因植物的種類和器官而異，Yamashita等[8]的研究表明，NaCl脅迫使大麥根PM H+-ATPase的活性減少了20%～30%，而在番茄愈傷組織中，NaCl脅迫對(duì)PM H+-ATPase的活性無(wú)影響，但在菜豆的葉肉細(xì)胞中[9]和犬細(xì)菌[10]中，NaCl脅迫卻提高了PM H+-ATPase的活性。

NaCl脅迫引起PM H+-ATPase的活性變化及酶蛋白量變化之間的關(guān)系，目前有兩種結(jié)果，一種認(rèn)為：NaCl脅迫使PM H+-ATPase活性的變化是由于NaCl使蛋白量發(fā)生變化所致，而不是由于對(duì)其活性的調(diào)節(jié)。Gabbay等[10]研究耐鹽的犬細(xì)菌時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著高鹽處理時(shí)間的延長(zhǎng)，PM H+-ATPase的活性逐漸增加，并且100 kD的蛋白質(zhì)的量也增加。也有研究表明NaCl脅迫既沒有增加PM H+-ATPase的活性也沒有增加PM H+-ATPase的蛋白量[11]。Yamashita等[8]用NaCl處理大麥，其PM H+-ATPase的活性下降，電泳結(jié)果表明其蛋白量也下降。另一種則認(rèn)為：NaCl脅迫引起PM H+-ATPase活性的變化不是由于蛋白量的調(diào)節(jié)，而是受其他因子的影響。Chung等[12]用200 mmol/L NaCl處理黃瓜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃瓜的PM H+-ATPase活性明顯低于對(duì)照，但SDS-PAGE電泳表明其蛋白量不變，他們認(rèn)為此酶活性增加是由于NaCl影響了Ca2+濃度和磷脂的變化，進(jìn)而影響了酶的活性，這與Matsumoto[13]的結(jié)論一致，Matsumoto認(rèn)為黃瓜PM H+-ATPase活性的下降是由于Ca2+的缺乏。Ayala等[14]用NaCl處理鹽角草（Salicornia bigelovii Torr.），增加了其質(zhì)膜H+-ATPase活性，但免疫分析表明，蛋白量未發(fā)生變化。綜上所述，PM H+-ATPase又與K+、Na+吸收及K+/Na+選擇性密切相關(guān)。因此，研究PM H+-ATPase與K+、Na+相互之間的關(guān)系有重要意義。

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