唐志立，彭賢東，譚正懷，龍 鳳，張浩玲

替硝唑螺內(nèi)酯乳膏系四川省南充市中心醫(yī)院自行研制的一種外用制劑，是以替硝唑、螺內(nèi)酯為主要成分的水包油型乳膏劑[1]。替硝唑陰道泡騰片、復(fù)方替硝唑栓劑的急性毒性已有研究[2－3]，復(fù)方螺內(nèi)酯乳膏治療尋常痤瘡的臨床療效也有報道[4]，但替硝唑、螺內(nèi)酯聯(lián)合外用治療痤瘡的毒性研究，國內(nèi)外尚未見相關(guān)報道。為評價替硝唑螺內(nèi)酯乳膏的用藥安全性，筆者對其進(jìn)行了急性毒性試驗，現(xiàn)報道如下。

1 材料

1.1 藥物

替硝唑原料藥(浙江蘇泊爾制藥有限公司，批號為20091201);螺內(nèi)酯原料藥(浙江新華制藥有限公司，批號為OT00N100610);替硝唑螺內(nèi)酯乳膏(自制，為乳白色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑2.0 g，螺內(nèi)酯0.3 g，批號為100628);替硝唑螺內(nèi)酯乳膏賦形劑(自制，批號為100628);替硝唑+螺內(nèi)酯混合物(按替硝唑原藥20%+螺內(nèi)酯原藥0.3%的比例配成所需濃度的混合液，備用);15倍臨床濃度替硝唑螺內(nèi)酯乳膏(淺黃色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑30 g、螺內(nèi)酯4.5 g，批號為100628);30倍臨床濃度替硝唑螺內(nèi)酯乳膏(淺黃色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑60 g，螺內(nèi)酯9.0 g，批號為100628)。

1.2 動物

昆明種小鼠，50只，雌雄各半，體重18～21 g，SPF級動物，生產(chǎn)合格證號為SCXK(川)2008－19號;SD大鼠70只，雌雄各半，體重180～330 g，SPF級動物，生產(chǎn)合格證號為 SCXK(川)2008－19號。均由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實驗動物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 小鼠口服給藥的急性毒性試驗

2.1.1 方法

按替硝唑20%、螺內(nèi)酯0.3%的比例制成替硝唑螺內(nèi)酯混合物溶液備用。將動物隨機(jī)分為5組，分別按每1 kg體重一次性灌胃給予替硝唑螺內(nèi)酯混合物 1.12，1.49，1.98，2.64，3.50 g，觀察給藥后14 d內(nèi)動物的中毒情況和死亡情況。

2.1.2 結(jié)果

給藥后10 min左右，小鼠陸續(xù)出現(xiàn)運(yùn)動減少，繼而出現(xiàn)運(yùn)動不協(xié)調(diào)、震顫，并出現(xiàn)呼吸急促、陣攣性抽搐，部分動物因咬傷口腔或舌而出現(xiàn)口角流血。多數(shù)動物在給藥后出現(xiàn)趴伏、呼吸急促，嚴(yán)重者出現(xiàn)抽搐。給藥后約半小時，逐漸有動物死亡，多數(shù)死亡動物在給藥后4 h出現(xiàn)，存活動物則逐漸恢復(fù)。給藥后14 d內(nèi)動物的中毒情況和死亡情況見表1。解剖死亡動物尸體，觀察其主要臟器，未見明顯異常。運(yùn)用Bliss法計算半數(shù)致死量(LD50)，采用回歸方程 Y=1.563 8+14.625 log D，計算得小鼠口服混合物的 LD50為 1.717 7 g/kg。結(jié)果見表 2。

表1 口服替硝唑螺內(nèi)酯混合物急性毒性試驗小鼠死亡時間分布(只)

2.2 大鼠皮膚給藥的急性毒性試驗

2.2.1 分組

取健康SD大鼠70只，雌雄各半，試驗前將大鼠背部脊柱兩側(cè)剪毛后，用8%硫化鋇脫毛，每側(cè)脫毛區(qū)大小約為5 cm×4 cm。脫毛后24 h禁食不禁水，16 h后隨機(jī)將動物均分為7組，再隨機(jī)選其中4組動物，脫毛區(qū)皮膚用消毒刀片做“井”字劃破至輕度滲血為度，作為破損皮膚組，余下3組即為完整皮膚組。

表2 Bliss法計算的 LD50

2.2.2 給藥

3個完整皮膚組分別在脫毛區(qū)涂敷0.115 g/kg替硝唑螺內(nèi)酯乳膏、15倍臨床濃度替硝唑螺內(nèi)酯乳膏1.725 g/kg、30倍臨床濃度替硝唑螺內(nèi)酯乳膏3.45 g/kg;4個破損皮膚組同樣在脫毛區(qū)涂敷替硝唑螺內(nèi)酯乳膏0.115 g/kg、15倍臨床濃度替硝唑螺內(nèi)酯乳膏1.725 g/kg、30倍臨床濃度替硝唑螺內(nèi)酯乳膏3.45 g/kg和替硝唑螺內(nèi)酯乳膏賦形劑每100 g體重0.5 mL。給藥后用紗布固定以保持藥物與皮膚接觸，24 h后用溫水洗去殘留藥物。

2.2.3 觀察

逐日觀察動物的全身反應(yīng)情況，連續(xù)觀察14 d，觀察大鼠的行為活動、呼吸、毛發(fā)、食欲、體重、眼睛和黏膜等有無異常，記錄毒性表現(xiàn)。若有死亡則記錄各組死亡動物數(shù)，檢查死亡動物各臟器，如有肉眼可見的病變則作病理學(xué)檢查。試驗結(jié)束時，放血處死動物，取心、肝、脾、肺、腎等主要臟器稱濕重并計算其臟器指數(shù)。

2.2.4 結(jié)果

涂抹給藥后，大鼠未見異常反應(yīng)，飲食、大小便、活動均正常，無分泌物增加等表現(xiàn)。去除藥物后，局部皮膚顏色正常，未見刺激反應(yīng)，14 d內(nèi)無動物死亡。各給藥組動物未出現(xiàn)中毒反應(yīng)。對完整皮膚和破損皮膚各劑量組用藥前、用藥后7 d和14 d稱重，結(jié)果見表3?？梢姡鲃┝刻嫦踹蚵輧?nèi)酯乳膏對完整皮膚和破損皮膚大鼠的體重?zé)o明顯影響，與賦形劑組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。大鼠用藥后觀察14 d處死，解剖肉眼觀察各組動物的心、肝、脾、肺、腎，均無明顯影響，與賦形劑組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果見表4。

表3 替硝唑螺內(nèi)酯乳膏對大鼠體重的影響(X ± s，n=10)

3 討論

本試驗結(jié)果表明，口服替硝唑螺內(nèi)酯混合物對小鼠有一定的急性毒性作用，測得其 LD50為1.7177g/kg，但替硝唑螺內(nèi)酯乳膏經(jīng)皮膚給藥對完整皮膚或破損皮膚大鼠均無明顯急性毒性作用，提示用藥濃度比相當(dāng)于臨床用濃度15倍低時是安全的。

表4 替硝唑螺內(nèi)酯乳膏對大鼠臟器指數(shù)的影響(X ± s，n=10)

使用替硝唑會出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)、過敏反應(yīng)、雙硫侖樣反應(yīng)等不良反應(yīng)，螺內(nèi)酯常見有高鉀血癥、胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)[5]，二者聯(lián)合口服，會加重不良反應(yīng)的發(fā)生。從小鼠口服替硝唑螺內(nèi)酯混合物所觀察到的癥狀與兩藥的不良反應(yīng)基本一致，說明口服替硝唑螺內(nèi)酯對小鼠有一定的急性毒性。

對于大鼠的完整皮膚和破損皮膚，使用替硝唑螺內(nèi)酯乳膏不同劑量后逐日觀察，均未出現(xiàn)中毒反應(yīng)，說明皮膚給藥是安全的。經(jīng)皮給一次性予替硝唑螺內(nèi)酯乳膏對完整皮膚和破損皮膚大鼠的心、肝、脾、肺以及腎臟的臟器指數(shù)均無明顯影響，與賦形劑組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明經(jīng)皮給藥對大鼠的內(nèi)臟無影響。

綜上所述，選擇可抑制皮脂腺分泌的藥物螺內(nèi)酯和可殺滅痤瘡丙酸桿菌、卵圓形糠秕孢子菌的替硝唑，將二者聯(lián)合制成外用乳膏劑，通過動物實驗，證明外用無明顯急性毒性作用，為臨床安全用藥提供了依據(jù)。

[1]彭賢東，唐志立，龍 鳳，等.替硝唑螺內(nèi)酯乳膏的制備及質(zhì)量控制[J].中國藥業(yè)，2010，19(5):34 －36.

[2]張曉雙，王文會.替硝唑陰道泡騰片急性毒性黏膜刺激與過敏性實驗研究[J].西北藥學(xué)雜志，2010，25(2):117 －118.

[3]王雪晴，王 震，朱興平，等.復(fù)方替硝唑栓劑的毒理學(xué)研究[J].中國藥業(yè)，2006，15(18):18.

[4]揣瑞梅，張玉珍，吳汝英.復(fù)方螺內(nèi)酯乳膏治療尋常痤瘡86例[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2003，22(S1):24.

[5]衛(wèi)生部合理用藥專家委員會.中國醫(yī)師藥師臨床用藥指南[M].重慶:重慶出版社，2009:217，1 037.