韓建英

山西省呂梁市人民醫(yī)院分子生物實(shí)驗(yàn)室，山西 呂梁 033000

1 資料和方法

1.1 一般資料

2009年的202份血清標(biāo)本，其中有16份為急性乙肝患者的血清選取了某醫(yī)院標(biāo)本，有30份為慢性乙肝患者的血清標(biāo)本，6份為重度乙肝患者的血清標(biāo)本，16份為原發(fā)性肝癌患者血清標(biāo)本，有16份為肝硬化患者的血清標(biāo)本，有64份為其他患者的血清標(biāo)本，有54份為健康體檢者的血清標(biāo)本。

1.2 方法

本研究所用的儀器是美國(guó)的PE7700自動(dòng)熒光PCR儀，試劑是HBV－FQ－PCR試劑，以及ELISA試劑。

1.2.1 HBV—DNA檢測(cè)

熒光光譜分析儀能夠測(cè)得定量的結(jié)果，反應(yīng)的是原始模板的量，F(xiàn)Q－PCR儀能夠通過(guò)全程的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)得出一個(gè)樣品實(shí)際擴(kuò)增曲線來(lái)找到PCR擴(kuò)增的對(duì)數(shù)期，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品的對(duì)數(shù)期進(jìn)行比較，從而得出每一樣品的特定模板DNA的起始拷貝數(shù)/ml，定量的范圍是0－1010/ml，定量的準(zhǔn)確度是100%。

1.2.2 具體的操作過(guò)程

把標(biāo)本進(jìn)行洗滌液化，用12000r/min的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，去上清液，采用常規(guī)堿裂解法來(lái)對(duì)HBV—DNA進(jìn)行提取，在各個(gè)反應(yīng)管中放入PE7700自動(dòng)熒光儀，并按下條件擴(kuò)增732min預(yù)變性，然后按下列條件擴(kuò)增，也就是按9345s－55120s，一共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，待反應(yīng)結(jié)束之后，計(jì)算機(jī)會(huì)自動(dòng)把定量的結(jié)果計(jì)算出來(lái)。對(duì)于肝炎標(biāo)志物ELISA的原理和步驟直接按照試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行就可以了。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用的是SAS統(tǒng)計(jì)軟件來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 檢測(cè)結(jié)果

本研究中202份血清標(biāo)本用FQ－PCR檢測(cè)HBV—DNA的結(jié)果與檢測(cè)結(jié)果的比較如下。

組別 ELISA陽(yáng)性 例數(shù) 陽(yáng)性數(shù) (%)陽(yáng)性樣品定值拷貝數(shù) 定量測(cè)值范圍拷貝數(shù)1 HbsAg HbeAg HbcAb 48 48(100%) 7.4×108 1.4×106－7.4×109 2 HbsAg HbeAb HbcAb 64 30(46.9%) 1.1×107 0－8.1×107 3 HbsAg HbeAg 20 10(50%) 2.4×106 0－7.0×104 4 HbsAb HbcAb 4 2(50%) 4.0×103 0－4.0×102 5 HbsAg HbcAb 2 0(0) —— ——6 HbsAb 28 2(7.1%) 5.0×104 0－5.0×104 7全陰性 36 2(5.6%) 4.9×105 0－4.9×105合計(jì) 202 94(46.5%)標(biāo)本來(lái)源 例數(shù) 陽(yáng)性率 (%)陽(yáng)性樣品定制平均值 定量測(cè)值范圍急性乙肝患者 16 8(50%) 1.6×106 0－3.7×106慢性乙肝患者 30 22(73.3%) 7.0×108 0－7.0×109重度乙肝患者 6 4(66.7) 7.2×104 0－8.1×105肝癌患者 16 16(100%) 3.1×107 0－8.1×108肝硬化患者 16 10(62.5%) 1.3×107 0－8.1×107其他患者 64 10(15.6%) 1.9×107 0－8.1×107健康體檢者 54 0(0) 0 0合計(jì) 202 70(36.7%)

從第1、第2、第6以及第7組的結(jié)果可以看出，該試劑盒相對(duì)于乙肝血清免疫指標(biāo)的假陽(yáng)性和假陰性率比較低，靈敏度比較高。另外，第1組陽(yáng)性組平均HBV—DNA拷貝數(shù)為7.4×108，第2組陽(yáng)性組拷貝數(shù)為1.1×107，第6組陽(yáng)性組拷貝數(shù)為5.0×104，可以知道FQ－PCR檢測(cè)HBV—DNA的結(jié)果能夠反映病程的發(fā)展。

本研究中202份血清標(biāo)本用FQ－PCR檢測(cè)HBV—DNA的結(jié)果與臨床的關(guān)系如上表。

從中可以看出，16例急性乙肝患者血清標(biāo)本FQ－PCR檢測(cè)，8例為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為50%。30例慢性乙肝患者，16例肝癌患者，6例重度乙肝患者，16例肝硬化患者FQPCR檢測(cè)，其陽(yáng)性率在62.5%至100%之間，要明顯比其他患者組來(lái)得高，這就表明了FQ－PCR檢測(cè)HBV—DNA的結(jié)果可以用來(lái)指導(dǎo)臨床。

3 結(jié)語(yǔ)

對(duì)于ELISA方法來(lái)講，是對(duì)DNA的表達(dá)物及其應(yīng)答系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)的，PCR是HBV—DNA最敏感的方法，能夠結(jié)合酶動(dòng)力學(xué)的特點(diǎn)來(lái)獲得DNA模板的準(zhǔn)確定量結(jié)果。從本文的研究中，可以看出FQ－PCR能夠準(zhǔn)確的反應(yīng)病毒的復(fù)制情況，為HbsAg、HbeAb、HbcAb患者提供了比較有價(jià)值的診斷指標(biāo)。

［1］徐明華，陸渝琳.1 034份血清乙型肝炎病毒前S1抗原與HBV－M、HBV－DNA檢測(cè)結(jié)果分析［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2005.

［2］潘國(guó)慶.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)在臨床醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用［J］.青?？萍迹?005年01期.