湯永峰 謝莉莉

(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市婦幼保健院病理科 南京 210004； 2.南通體臣衛(wèi)生學(xué)校醫(yī)技系 南京 210000)

上皮粘附素(E-cadherin)表達(dá)于絕大多數(shù)上皮細(xì)胞表面,尤以細(xì)胞連接處最為集中,是上皮細(xì)胞表面最重要的細(xì)胞間粘附分子之一。它通過介導(dǎo)同型細(xì)胞間的粘附反應(yīng),維持上皮組織結(jié)構(gòu)的完整性和細(xì)胞的極性,具有細(xì)胞接觸性生長抑制功能,防止細(xì)胞的相互分離,是典型的某些類型腫瘤形成/浸潤抑制因子。乳腺癌抗原(breast cancer antigen-225,BCA-225)是乳腺癌細(xì)胞株T47D分泌的一種糖蛋白,分子量為225KDa,通常乳腺腺癌表達(dá)此種蛋白[3]。本研究聯(lián)合檢測E-cadherin及BCA-225蛋白在乳腺癌中的表達(dá),分析它們與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系,以及這二者的表達(dá)水平與乳腺癌患者的預(yù)后關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

由南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科提供80例2004年2月至2005年12月期間手術(shù)切除標(biāo)本,均為女性。其中乳腺良性腫瘤10例。原發(fā)性乳腺癌70例,均為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌。原發(fā)性乳腺癌患者年齡為30～72歲,平均50.7歲。乳腺癌病理分級I級20例,II級26例,III級24例。按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)提出的TNM國際分期標(biāo)準(zhǔn),I期22例,II期28例,III期20例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目＜4個的13例,≥4個的18例。腫瘤最長徑≤5cm的61例,＞5cm的9例。雌激素受體(estrogen receptor,ER)陰性39例,陽性31例。孕激素受體(progesterone receptor,PR)陰性37例,陽性33例。術(shù)后隨訪到45例病人,失訪25例,隨訪率64.29%,隨訪截止日期2008年11月30日,生存期的計算從手術(shù)日期到隨訪截止日期,或因復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止,隨訪最長時間57個月,最短時間36個月,平均生存時間45.33個月,隨訪病例3年生存率為88.89%?；颊咝g(shù)前均未接受放療、化療或內(nèi)分泌治療。

1.2 試劑

鼠抗人E-cadherin即用型單克隆抗體(MAB-0589;Clone:A42C7),鼠抗人BCA-225即用型單克隆抗體(MAB-0175;Clone:CU18),二步法免疫組化檢測試劑盒均購于福州邁新公司。

1.3 方法

按SP試劑盒操作說明書進(jìn)行。石蠟切片脫蠟水化,按要求抗原修復(fù),免疫組化染色,DAB顯色,蘇木精復(fù)染。PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷

E-cadherin蛋白表達(dá)以細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽性,但以細(xì)胞膜為主。BCA-225蛋白表達(dá)以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。每張切片選5個高倍視野(200倍),按腫瘤陽性細(xì)胞率和著色強(qiáng)度分別進(jìn)行計分:(1)按陽性細(xì)胞百分率:0分為≤5%,1分為6%～25%,2分為26%～50%,3分為51%～75%,4分為>75%;(2)按著色計分:分為4個等級,0分為無著色,1分為淡黃色,2分為黃色,3分為棕黃色。兩者乘積0分為(-),1～4分為(+),5～8分為(++),9～12分為(+++)。為臨床及統(tǒng)計分析的目的,將(-)和(+)歸為低表達(dá),(++)和(+++)歸為高表達(dá)[1]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

經(jīng)統(tǒng)計分析軟件STATA 7.0分析。各組數(shù)據(jù)間比較采用χ2檢驗和四格表確切概率法。用Spearman等級相關(guān)分析判定相關(guān)性。Kaplan-Meier法描述生存曲線、Log-rank法進(jìn)行差別顯著性檢驗、Cox比例風(fēng)險回歸模型作為多因素的生存分析。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 乳腺癌中E-cadherin、BCA-225蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

圖1 E-cadherin表達(dá)的Kaplan-Meier生存曲線分析

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin的表達(dá)

在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌與良性病變組織中,E-cadherin蛋白陽性均定位于癌細(xì)胞及導(dǎo)管上皮細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)上,著色深淺不一,呈片狀、灶狀或散在分布。E-cadherin表達(dá)在對照組與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。E-cadherin蛋白表達(dá)與乳腺癌患者的ER、PR及人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)無相關(guān)性,與臨床分期、病理分級、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，見表1。

2.2 BCA-225的表達(dá)

在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中,BCA-225蛋白陽性主要定位于癌細(xì)胞質(zhì)中,著色深淺不一,呈片狀、灶狀或散在分布。BCA-225表達(dá)在對照組與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。BCA-225蛋白表達(dá)與乳腺癌患者的ER、PR、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小均無相關(guān)性,而與腫瘤病理分級及癌基因Her-2相關(guān)，見表1。

2.3 E-cadherin與BCA-225蛋白在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性

在31例BCA-225蛋白低表達(dá)組中,E-cadherin蛋白低表達(dá)17例,高表達(dá)14例;39例BCA-225蛋白高表達(dá)組中,E-cadherin蛋白低表達(dá)25例,高表達(dá)14例;spearman相關(guān)分析提示兩者無相關(guān)性(r=-0.0307,P＞0.05)。

2.4 乳腺癌中E-cadherin和BCA-225蛋白不同表達(dá)水平對預(yù)后影響的分析

對E-cadherin和BCA-225蛋白表達(dá)情況與生存率的關(guān)系進(jìn)行Kaplan-Meier生存曲線分析,結(jié)果顯示E-cadherin高表達(dá)患者的生存率明顯高于低表達(dá)者,2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.01,P<0.05)。而BCA-225蛋白表達(dá)情況在此分析中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.26,P>0.05)(圖1、2)。

圖2 BCA-225表達(dá)的Kaplan-Meier生存曲線分析

將腫瘤病理分級、腋淋巴結(jié)狀態(tài)及E-cadherin、BCA-225蛋白表達(dá)的情況共4種因素進(jìn)行Cox比例風(fēng)險回歸多因素的生存分析,結(jié)果顯示E-cadherin蛋白表達(dá)有獨立的預(yù)后意義,風(fēng)險度exp為-1.795954(P<0.05)。

3 討論

E-cadherin是鈣依賴性細(xì)胞間連接的細(xì)胞粘附分子,當(dāng)E-cadherin活性正常時,腫瘤細(xì)胞不易從原發(fā)灶上脫落下來,而E-cadherin失活導(dǎo)致細(xì)胞間粘附作用下降和極性紊亂,促使腫瘤轉(zhuǎn)移,即E-cadherin是一種癌侵襲、轉(zhuǎn)移的抑制因子。

實驗結(jié)果顯示E-cadherin在乳腺良惡性腫瘤中的表達(dá)差異顯著,其表達(dá)隨著TNM分期的增高、病理分級級別的增高、腫瘤增大及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目的增多而下降,單因素和多因素分析顯示E-cadherin是乳腺癌患者獨立的預(yù)后指標(biāo)。與PARK等[2]學(xué)者的報道一致。提示E-cadherin表達(dá)缺如或下調(diào)是乳腺癌浸潤性增加、轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)的一個指征,是乳腺癌重要的預(yù)后因子,可作為篩選術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移高危人群的有效指標(biāo)。關(guān)于E-cadherin在乳腺癌中表達(dá)下調(diào)或缺失的機(jī)制,有學(xué)者報道E-cadherin的基因突變,轉(zhuǎn)錄和翻譯異常[3～4],可以抑制E-cadherin在乳腺癌中的正常表達(dá),導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生。另外,E-cadherin的甲基化、糖基化、NF的影響、雌孕激素及E-cadherin介導(dǎo)的黏附復(fù)合體功能異常等均可導(dǎo)致乳腺組織中E-cadherin的異常表達(dá),從而導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生。

BCA-225是乳腺癌細(xì)胞株T47D分泌的一種糖蛋白,分子量為225KDa,通常乳腺腺癌表達(dá)此種蛋白。目前,關(guān)于BCA-225的研究主要集中在該蛋白對各個系統(tǒng)轉(zhuǎn)移或異位腫瘤的鑒別診斷上[5～6]。但關(guān)于BCA-225與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系目前國內(nèi)外少有報道。

實驗結(jié)果顯示BCA-225蛋白表達(dá)隨著病理分級級別的增高而增加,在癌基因Her-2陽性組中BCA-225表達(dá)高于其陰性組,病理分級代表著腫瘤的分化程度,是傳統(tǒng)的預(yù)后指標(biāo),又因為癌基因Her-2是乳腺癌患者可靠的預(yù)后指標(biāo)[7],推測BCA-225對判斷患者的預(yù)后可能有一定的參考價值。但單因素和多因素分析顯示BCA-225表達(dá)與乳腺癌患者術(shù)后生存狀況均無相關(guān)性。

上述結(jié)果表明,E-cadherin在乳腺癌發(fā)生發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用,檢測E-cadherin的表達(dá)對乳腺癌患者預(yù)后的評估有重要意義,并且可為乳腺癌患者的鑒別診斷和基因治療提供理論根據(jù)。BCA-225作為乳腺癌患者獨立的預(yù)后評價指標(biāo)還尚待進(jìn)一步深入探討。

[1]翁密霞,吳翠環(huán),楊秀萍.E-cadherin,CD44v6和PCNA在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及意義[J].癌癥Chinese Journal of Cancer,2008,27(2):191～195.

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