楊明會(huì) 張海燕 王文明 劉毅 李紹旦

急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是臨床較為常見的急危重癥，死亡率高，由于發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前尚無(wú)特效的治療手段[1]。有研究表明，中藥對(duì)ALI具有良好的防治作用[2]。ALI病理過(guò)程中，肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，各種炎性細(xì)胞聚集，血管通透性增加，引起肺小血管的充血和肺間質(zhì)水腫[3]，導(dǎo)致肺部血管舒縮功能障礙，進(jìn)一步加重肺組織損傷，而血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-prostaglandinF1α，6-Keto-PGF1α)是反映血管舒縮情況的重要指標(biāo)[4]。本研究予以益氣活血中藥黃芪與丹參對(duì)脂多糖(lipopolysacchride，LPS)急性肺損傷模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)觀察血漿TXB2、6-Keto-PGF1α含量的變化，來(lái)探討益氣活血中藥防治急性肺損傷可能的作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

兩月齡健康清潔級(jí)SD雄性大鼠30只，體重(200±20)g，由解放軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)[HCXX(京)2006-0094]。

1.2 供試藥品

益氣活血中藥由生黃芪和丹參組成，生黃芪和丹參用量為1∶1，生藥材由解放軍總醫(yī)院中藥房采購(gòu)及鑒定。由解放軍總后衛(wèi)生部藥品檢定所制備水煎劑，每毫升藥液相當(dāng)于生藥0.25 g。

1.3 主要試劑

脂多糖(lipopolysacchride，LPS)為Sigma公司產(chǎn)品。TXB2放免試劑盒、6-Keto-PGF1α放免試劑盒均購(gòu)自北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司。速眠新Ⅱ注射液由解放軍軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，吉獸藥試字(2004005013)。

1.4 動(dòng)物分組與處理方法

用隨機(jī)數(shù)字法將30只大鼠隨機(jī)分為3組，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、中藥組各10只。

所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，模型對(duì)照組和正常對(duì)照組每日予以生理鹽水2 ml灌胃，連續(xù)7天。中藥組，每日予以中藥2 ml(相當(dāng)于生藥0.5 g)灌胃，連續(xù)7天。所有大鼠用速眠新Ⅱ肌肉注射麻醉后，模型對(duì)照組、中藥組動(dòng)物造模采用LPS氣管滴入法[5]。每只大鼠LPS用量按1 mg/kg體重計(jì)算，溶于0.2 ml生理鹽水。正常對(duì)照組大鼠每只氣管滴入0.2 ml生理鹽水。上述所有大鼠在經(jīng)氣管滴入LPS或生理鹽水處理后3小時(shí)，靜脈取血，檢測(cè)血漿TXB2和6-Keto-PGF1α。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

正常對(duì)照組大鼠的血漿TXB2含量最低，為(882.81±44.95)pg/ml，模型對(duì)照組大鼠的血漿TXB2含量最高，為(1259.09±32.72)pg/ml，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組、中藥組兩組比較具有顯著性差異(P<0.01)。正常對(duì)照組與中藥組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

模型對(duì)照組大鼠的血漿6-Keto-PGF1α含量最低，為(121.64±17.72)pg/ml，正常對(duì)照組大鼠的血漿6-Keto-PGF1α含量最高，為(236.05±35.18)pg/ml，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組、中藥組兩組比較具有顯著性差異(P<0.01)。正常對(duì)照組與中藥組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)大鼠血漿TXB2與6-Keto-PGF1α含量比較

3 討論

ALI/ARDS的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，對(duì)其發(fā)病機(jī)制的深入探討與中西醫(yī)治療有效藥物的篩選，在很大程度上依賴于和人類ALI/ARDS病理改變相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立與應(yīng)用。LPS氣管滴入法制備ALI的動(dòng)物模型，是當(dāng)前公認(rèn)的成熟模型[6]，已廣泛地應(yīng)用于ALI發(fā)病機(jī)制和預(yù)防治療的研究中。本研究采用此模型來(lái)探討益氣活血中藥黃芪與丹參防治ALI的作用機(jī)理。

黃芪，味甘，性溫，歸肺、脾經(jīng)，有益氣固表、補(bǔ)益脾肺、斂瘡生肌之功效，現(xiàn)代藥理研究表明，黃芪具有增強(qiáng)心肌收縮力，清除自由基，減少過(guò)氧化脂質(zhì)，增加超氧化歧化酶活性，抑制血小板凝聚，降低血液黏稠度，改善微循環(huán)等作用[7]。丹參，味苦，性微寒，歸心、肝經(jīng)，具有祛瘀止痛、涼血消癰等功效，現(xiàn)代藥理研究顯示，丹參具有改善微循環(huán)、促進(jìn)組織修復(fù)與再生、抗炎、抗缺氧等作用[8]。丹參得黃芪之助，活血之力倍增，黃芪得丹參相佐，生新而不留瘀，兩藥配伍，相得益彰。

血栓素A2(thromboxane A2，TXA2)、前列環(huán)素(prostacyclin，PGI2)是機(jī)體調(diào)節(jié)血小板功能、保護(hù)血管的一對(duì)重要因子。TXA2主要由血小板、白細(xì)胞分泌合成，是目前已知最強(qiáng)的收縮血管物質(zhì)，也是體內(nèi)較強(qiáng)的血小板聚集劑，能夠促進(jìn)血小板聚集及血栓形成；PGI2主要來(lái)源于內(nèi)皮細(xì)胞，有較強(qiáng)的擴(kuò)張血管和抗血小板聚集作用，可拮抗TXA2作用，抑制血小板聚集，擴(kuò)張血管，穩(wěn)定細(xì)胞膜[9]。正常生理狀態(tài)下循環(huán)血漿中TXA2和PGI2濃度處于相對(duì)平衡狀態(tài)，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[10]。當(dāng)TXA2升高、PGI2降低，打破兩者濃度平衡時(shí)，可引發(fā)血管收縮、血小板聚集及血栓形成等。由于體內(nèi)TXA2和PGI2很不穩(wěn)定，迅速代謝為穩(wěn)定而又無(wú)活性的TXB2和6-K-PGF1α，因而可通過(guò)測(cè)定TXB2、6-K-PGF1α作為判斷其濃度的指標(biāo)[11]。本研究結(jié)果顯示，中藥組大鼠的血漿TXB2含量低于模型對(duì)照組(P<0.01)，6-Keto-PGF1α含量高于模型對(duì)照組(P<0.01)，且與正常對(duì)照組差異不大，提示益氣活血中藥黃芪與丹參可通過(guò)調(diào)節(jié)TXA2和PGI2的濃度，維持TXA2/PGI2的相對(duì)平衡，抑制血小板聚集，擴(kuò)張血管，從而達(dá)到對(duì)模型大鼠ALI的防治作用。

通過(guò)本研究結(jié)果推斷，益氣活血中藥黃芪與丹參可能通過(guò)調(diào)節(jié)TXA2和PGI2的濃度，維持TXA2/PGI2的相對(duì)平衡，發(fā)揮防治模型大鼠ALI的作用。但中藥防治疾病是多途徑、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的，可能存在其他防治ALI的作用途徑，需進(jìn)一步深入研究。

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