武書庚 齊廣海 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京100081

高銅（硫酸銅）能降低肉雞血漿和肌肉中膽固醇含量(Bakalli等，1995)。其它動(dòng)物上的研究也表明，缺銅引起的高膽固醇血癥是一個(gè)與動(dòng)物種類無關(guān)的普遍現(xiàn)象，缺銅時(shí)膽固醇合成以及組織沉積均增加。根據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果，銅對(duì)降低雞蛋中膽固醇含量作用顯著，CuCit比同水平CuSO4作用效果明顯。銅作為生物抗氧化劑直接或間接參與活性氧的清除，銅的抗氧化作用主要通過對(duì)機(jī)體抗氧化酶的影響、頡抗其它微量元素和有害物質(zhì)的毒性以及與其它抗氧化物質(zhì)的協(xié)同來實(shí)現(xiàn)，銅對(duì)蛋雞機(jī)體抗氧化性能的影響，需要進(jìn)一步研究。前期研究表明（齊廣海等，2000），產(chǎn)蛋雞日糧中銅的適宜添加量為6～30mg/kg，此銅的適宜添加量范圍比較寬，試驗(yàn)動(dòng)物周齡較大（78周齡產(chǎn)蛋雞）。不同銅源及添加量在機(jī)體內(nèi)的生化作用是否與產(chǎn)蛋雞周齡有關(guān)，需要進(jìn)一步探討。

1 材料與方法

1.1 銅源

硫酸銅（純度98%，含銅25%）。檸檬酸銅（分子量360.21，純度98%，含檸檬酸63.5%，含銅34.5%，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所添加劑室提供）。硫酸銅和檸檬酸銅的理化指標(biāo)見表1。

1.2 基礎(chǔ)日糧

本試驗(yàn)采用玉米－豆粕-棉粕-菜粕型蛋雞日糧（粉料），基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)價(jià)值見表2。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用體重和產(chǎn)蛋率相近 （產(chǎn)蛋率大于90%）的海蘭褐23周齡產(chǎn)蛋雞，采用隨機(jī)單位組設(shè)計(jì)，試驗(yàn)共設(shè)11個(gè)處理（表3），每個(gè)處理采食一種試驗(yàn)日糧。每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9只雞，共用雞396只，預(yù)試期1周，試驗(yàn)期8周。

表1 硫酸銅和檸檬酸銅的理化特性＊Table 1 The characteristic of cupric sulphate and cupric citrate

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)素含量Table 2 The composition and nutrient content of the basal diet

1.每 kg 日糧中提供（mg）：Zn，20；Fe，40；Mn，30；I，0.175；Se，0.075。

2.每 kg日糧中提供：維生素 A 10800IU；維生素D32160 IU；維生素K31.0mg；維生素E 4.6mg；維生素 B10.4mg；維生素 B25mg；維生素B126mg；泛酸鈣 5mg；煙酸 7mg；葉酸 0.1mg。

3.實(shí)測(cè)值。

表3 試驗(yàn)處理的設(shè)置Table 3 Aarrangement of experimental treatments

1.4 飼養(yǎng)管理

采用密閉式雞舍，二層立體籠養(yǎng)，同一排相連的9個(gè)雞籠（30×25cm）作為一個(gè)重復(fù)單位，每籠1只雞。同一處理各重復(fù)均勻分布于雞舍，以消除位置效應(yīng)。試驗(yàn)期間雞舍溫度變化范圍為15℃～30℃，相對(duì)濕度變化范圍為50%～80%。每天恒定光照為16小時(shí)，采用自動(dòng)照明控制系統(tǒng)，在白天自然光照不足的情況下補(bǔ)充相應(yīng)光照，光照強(qiáng)度為14LX。飼喂干粉料，自由采食、自由飲水。按常規(guī)防疫程序進(jìn)行防疫和雞舍消毒。

1.5 樣品的采集與制備

試驗(yàn)開始時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取兩只雞進(jìn)行稱重；每日以重復(fù)為單位，記錄產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋量、軟破蛋數(shù)、死亡淘汰數(shù)，每周以重復(fù)為單位，統(tǒng)計(jì)一次耗料量、產(chǎn)蛋率，計(jì)算平均日采食量，以制定下一周的喂料量。分別在試驗(yàn)第4周和第8周統(tǒng)計(jì)耗料、產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量、料蛋比，同時(shí)，以重復(fù)為單位取雞蛋3枚，用于測(cè)定雞蛋品質(zhì)有關(guān)指標(biāo)，采用自制蛋黃分離器，取3個(gè)雞蛋的鮮蛋黃，混勻，-16℃冷藏備用。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取2只雞，稱重后心臟采血，離心制備血漿（肝素鈉抗凝），冷藏備用。

1.6 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.6.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)：根據(jù)飼養(yǎng)試驗(yàn)紀(jì)錄整理蛋料比、產(chǎn)蛋率、耗料量等。

1.6.2 雞蛋品質(zhì)指標(biāo)：采用日本富士坪公司生產(chǎn)的系列雞蛋品質(zhì)測(cè)定儀，測(cè)定雞蛋品質(zhì)（哈夫單位、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋殼重、蛋形指數(shù)）。

1.6.3 蛋黃膽固醇：雞蛋膽固醇用蛋黃膽固醇濃度（mg/g）和雞蛋膽固醇含量（mg/枚）兩個(gè)指標(biāo)來表示。蛋黃膽固醇濃度即指每g蛋黃中膽固醇的含量，雞蛋膽固醇含量是指每枚雞蛋中膽固醇的含量。本試驗(yàn)采用目前國際上較為通用的氣相色譜法，以5α-膽固醇（Sigma公司）為內(nèi)標(biāo)。樣品預(yù)處理參照J(rèn)iang（1991），測(cè)定條件以中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)（GB 9695.24-90）膽固醇測(cè)定法為依據(jù)，在提取技術(shù)方面加以改進(jìn)。

測(cè)定原理：組織中的脂類經(jīng)皂化后，膽固醇作為不皂化物被提取出來，并與一定的內(nèi)標(biāo)物混合后一起注入氣相色譜柱，求出膽固醇與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比，根據(jù)工作曲線計(jì)算膽固醇的重量，以求得組織中膽固醇的含量。

不皂化物的提?。悍Q取0.50～1.00g脂肪，置于10ml容量瓶中用氯仿定容并搖勻。準(zhǔn)確量取該試液1～5ml置于 25ml具塞試管中，準(zhǔn)確加入 0.5～1ml內(nèi)標(biāo)物溶液，然后將氯仿蒸干。加入1mol/l氫氧化鉀溶液5ml，裝上冷凝管，在85℃～95℃水浴上緩緩皂化1h，取下冷卻至室溫，全部移入50ml分液漏斗中，用水10ml洗具塞試管，洗液并入分液漏斗，加乙醚10ml輕輕振搖，靜置分層后，將水相放入原試管中，加乙醚10ml振搖，待分層后，將乙醚移入分液漏斗內(nèi)。再用10ml乙醚提取一次，此時(shí)分液漏斗中共有溶液30ml。用水2～3ml洗滌乙醚液，分層后，棄去水相，用無水硫酸鈉10g干燥后，將乙醚移入另一具塞試管中，通入N2干后，加入乙醇1ml。

色譜分離條件選擇：對(duì)膽固醇峰要求其理論塔板不少于1600。膽固醇與菜油醇二者峰分辨率不小于2.2，膽固醇的保留時(shí)間在8～12min之間；膽固醇峰強(qiáng)度為滿量程的0.25～0.5。

色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm。初始柱溫250℃，保持8min，然后線性升溫至260℃（1℃/min）。FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度300℃，衰減為5。載氣為高純N2，流速41.3ml/min，空氣流速 397ml/min，分流比 74∶1。

1.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)用SAS 6.12程序包的GLM模型對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行雙因素方差分析，采用LSD（最小顯著極差）法對(duì)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 CuSO4和CuCit對(duì)產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

產(chǎn)蛋率。試驗(yàn)雞產(chǎn)蛋率在91%到96%之間變化（表4），所有銅添加組的產(chǎn)蛋率和料蛋比均高于對(duì)照組，差異顯著 （p＜0.05）。6，15和 60mg/kg的CuSO4處理的產(chǎn)蛋率顯著高于對(duì)照組（p＜0.05），其中，6mg/kg銅的產(chǎn)蛋率與對(duì)照組差異極顯著 （p＜0.01）；各CuCit處理的產(chǎn)蛋率極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），但 CuCit處理組之間差異不顯著 （p＞0.05）。隨銅添加量的增加，產(chǎn)蛋率有下降趨勢(shì)，尤其是125mg/kg處理組，總體上比6mg/kg處理下降了1.7個(gè)百分點(diǎn)。所有CuCit處理的產(chǎn)蛋率均高于同水平CuSO4處理，但差異不顯著。

料蛋比。所有銅添加組的料蛋比均極顯著低于對(duì)照組（p=0.0001）；60mg/kg CuSO4處理組的料蛋比最低，水平間差異不顯著 （p＞0.05）；6mg/kg CuCit處理組的料蛋比最低，水平之間差異不顯著（p＞0.05）；總體上 CuCit與 CuSO4處理之間無顯著差異（p=0.8131），但 CuCit處理組之間變異小，曲線平穩(wěn)。

體增重。產(chǎn)蛋雞體增重(g)隨日糧銅添加量的增加而變化的曲線呈拋物線。兩種銅源6mg/kg處理組低于15～30mg/kg處理組，但高于其他組；15～30mg/kg處理組達(dá)波峰，與其他處理組差異顯著（p＜0.05）；兩種銅源均在15mg/kg處理的體增重最大，與其他處理差異極顯著（p＜0.01）；60mg/kg 高于對(duì)照和125mg/kg處理組，但顯著低于6～30mg/kg處理組（p＜0.05）；125mg/kg處理組的體增重與對(duì)照組和60mg/kg處理組無差異，與6，15和30mg/kg處理差異極顯著(p＜0.01)，說明125mg/kg處理組已影響到產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能。CuCit處理組的體增重曲線平滑，所有處理組均好于同水平CuSO4，但差異不顯著（p=0.0870）。