劉海燕

（衡陽市第一人民醫(yī)院，湖南 衡陽 421002）

地高辛是臨床常用治療抗心功能不全的常規(guī)藥物，臨床上因其安全范圍窄、治療指數(shù)低、不良反應(yīng)多等因素[1]，使得在治療時對其的使用劑量無法有效的控制。地高辛的有效藥物濃度在1102～2156nmol/L，若濃度過高則會使患者出現(xiàn)與心臟病本身引起的難以區(qū)分的心律失常癥狀。故對人血漿中地高辛濃度的檢測顯得尤為重要。本課題依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)及結(jié)合中國藥典相關(guān)資料，采用高效液相色譜法（HPLC）對衡陽市第一人民醫(yī)院2007年至2010年就診的600例心功能不全者口服杭州民生藥業(yè)有限公司的地高辛后的血藥濃度經(jīng)時過程，估算其藥代動力學(xué)參數(shù)，為其臨床用藥提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

研究對象為2007年8月至2010年8月來衡陽市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科就診的600例心功能不全患者，其中男性391例，女性209例，年齡18～93歲，平均68歲。所有入選病例均根據(jù)臨床癥狀、病史、胸片、心電圖、心臟超聲、物理檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查及治療中的反應(yīng)確診為心功能不全者。

1.2 儀器

色譜儀（日本進(jìn)口的JASCO-1500型），紫外檢測（西域公司的UV-975型）；電子天平（奧斯豪公司的CP114型），超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司的KH.50B型）。

1.3 藥品和試劑

地高辛對照品（中國藥品生物制品檢定所，100015-200308，含量99.1%）；地高辛（杭州民生藥業(yè)有限公司，批號050112，受試制劑），地高辛（上海醫(yī)藥有限公司信誼制藥總廠，批號05071 l、060201，參比制劑），乙腈（德國Merck公司，色譜純），甲醇（依能色譜公司，色譜純），鹽酸（廣州化學(xué)試劑廠，分析純），乙醇（廣州化學(xué)試劑廠，分析純），水為超純化水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamonsil C18（4.6mm ×200mm，5μm），流動相為乙腈-超純水（32∶68），流速為1mL/min，檢測波長為230nm，進(jìn)樣量為20μL，柱溫為室溫[2]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取地高辛20.0mg，將稱好的地高辛置入100mL的容量瓶中，加少量乙醇溶解、定容、搖勻，加入適量流動相稀釋至刻度，超聲15min，即制得濃度為200μg/mL的地高辛標(biāo)準(zhǔn)液。

2.3 血漿樣品的處理

取血漿樣品0.5mL，加入20%的三氯醋酸沉淀蛋白100μL，旋渦3s混合，于4000r/min離心5min，取上清液，進(jìn)樣。

3 結(jié) 果

3.1 專屬性試驗(yàn)

按照本次報道中的色譜條件，將地高辛標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白人血漿、空白人血漿加地高辛，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣，結(jié)果表明基線噪音小，血漿中雜質(zhì)不干擾地高辛的測定，本試驗(yàn)建立的HPLC法具有很好的專屬性。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

取1950μL血漿于20mL離心管中，再分別加入濃度為5、20、100μg/mL三種不同濃度的地高辛標(biāo)準(zhǔn)溶液50μL，注入色譜儀，依法測定，橫坐標(biāo)為藥物濃度（C），縱坐標(biāo)為峰面積（A）[3]，得線性回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=56802.13C+26040.72，r=0.9999，表示地高辛濃度在10～75μg/L時，峰面積與藥物濃度具有良好的線性關(guān)系。

3.3 精密度試驗(yàn)

取含1.5896μg/mL地高辛濃度的含藥血漿，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，計算RSD=0.8%，符合標(biāo)準(zhǔn)，精密度良好。

3.4 回收率試驗(yàn)

分別配制濃度為5、20、100μg/mL的血漿樣品，，采用HPLC法進(jìn)行測定，將測定的地高辛峰高代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出測定藥物濃度，按測定濃度與實(shí)際濃度之比計算方法回收率：見表1。

表1 回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取含1.5896μg/mL地高辛濃度的含藥血漿，每4h進(jìn)樣一次，連續(xù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)測定結(jié)果

4 討 論

地高辛的有效血藥濃度范圍在臨床上為一個籠統(tǒng)的概念，同樣的血藥濃度值在不同的患者中其藥理作用會不甚相同。臨床上部分患者會出現(xiàn)較好的臨床療效，部分則會出現(xiàn)中毒反應(yīng)，故對地高辛的血藥濃度檢測顯得尤為重要。臨床上因地高辛的中毒濃度、無效濃度及治療窗之間存在著一定程度的交叉[5]，故在對患者給予地高辛治療時，需根據(jù)其臨床癥狀及相關(guān)指標(biāo)，運(yùn)用臨床藥理學(xué)及藥物動力學(xué)的原理在血藥濃度監(jiān)測結(jié)果的基礎(chǔ)上，去制定一個合適的治療方案，從而確保患者的臨床用藥安全。

本組實(shí)驗(yàn)中所采用的色譜條件均根據(jù)中國藥典2005版藥物峰與其他成分峰有良好的分離度[4]，不影響檢測結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)選定的檢測波長為230nm，因其靈敏度高、血漿中雜質(zhì)干擾較少。從本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，采用高效液相色譜法測定人血漿中地高辛濃度，效果可靠，操作簡單，易于重復(fù)，對于地高辛的濃度控制意義重大。

[1] 李景蘇.地高辛給藥方案與血藥濃度及臨床療效的關(guān)系[J].臨床誤診誤治,2006,19 (1):3.

[2] 吳放,吳明釵,章如玲.高效液相色譜法測定地高辛口服溶液的含量[J].海峽藥學(xué),2007,19(10):30-31.

[3] 李優(yōu)鑫,毛靜遠(yuǎn),李惠芬.地高辛血藥濃度檢測方法的分析[J].中國中藥雜志,2007,32(4):285-288.

[4] 肖正儒,李愛光.229例地高辛血藥濃度監(jiān)測結(jié)果分析[J].廣東藥學(xué),2003,13 (6):25.

[5] Yao M,Zhang HH,Chong S,et al.A rap id sensitive LCMS-MS assay for quantitative determination of digoxin in ratplas ma[J].J Pharm Biomed Anal,2003,32(6): 1189.