成玉霞，孫 青

胸腹水細(xì)胞涂片通常行HE染色診斷，有時(shí)需再進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色以滿足鑒別診斷之用。但由于再次取材受限，往往使工作陷于被動(dòng)或無(wú)法進(jìn)行。筆者在工作中成功摸索出一種在一張涂片上同時(shí)進(jìn)行多種抗體的免疫組織化學(xué)染色，并保留一部分HE染色的方法，現(xiàn)以1例會(huì)診的HE涂片為例介紹如下。

材料和試劑：免疫組化油筆、一抗和試劑盒。方法：將切片放入二甲苯中浸泡，直到蓋玻片脫落（封存太久的切片可先將蓋玻片加熱取下再放入二甲苯中）。溶解掉中性樹(shù)膠后，經(jīng)梯度乙醇水化后，放入鹽酸酒精（70%乙醇，1%鹽酸）中去除HE染色。切片經(jīng)水洗后，用免疫組化油筆（購(gòu)自福州邁新公司）圈定3處需要行免疫組化標(biāo)記的區(qū)域（根據(jù)原HE染色涂片細(xì)胞情況確定），行免疫組化染色，步驟如下：①用0.1%TritonX-100處理 30 min，在細(xì)胞膜上打孔；②PBS洗3 min×3次，把TritonX-100徹底洗掉；③3%H2O2處理10 min，去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；④PBS洗3 min×3次；⑤在3個(gè)圈定區(qū)域分別加上不同的一抗 （CK5/6、LCA和Calretinin均購(gòu)自福州邁新公司），室溫1 h；⑥PBS洗3 min×3次；⑦加二抗（邁新公司的MaxVisionTM試劑盒編號(hào)KIT5020）孵育15min；⑧PBS洗3 min×3次；⑨DAB顯色。

顯色后的切片用蘇木素復(fù)染核2 min，脫水透明后，將免疫組化染色部分用小蓋玻片封片，加熱干燥。然后將蓋玻片外部分再行伊紅染色，脫水透明的同時(shí)將小蓋玻片去掉，重新用一大蓋玻片封片。如此，1張同時(shí)具有3種免疫組化染色，而且保留了部分HE染色結(jié)果的細(xì)胞涂片成功完成（圖1～5）。

圖1 3個(gè)圈從左到右分別為L(zhǎng)CA，CK5/6和Calretinin染色。圈外是保留的HE染色。

圖2 CK5/6癌細(xì)胞（+）

圖3 LCA淋巴單核細(xì)胞（+）

圖4 Calretinin間皮細(xì)胞（+）

圖5 保留的HE染色細(xì)胞

這種染色方法在取材受限的情況下不失為一種良策，關(guān)鍵是用免疫組化油筆圈定細(xì)胞的時(shí)候一定得嚴(yán)密，保證抗體之間不能有交叉，以保證結(jié)果的可靠性。這種方法同樣適用于經(jīng)過(guò)HE染色的組織切片再進(jìn)行免疫組化染色，只是需根據(jù)抗體要求進(jìn)行修復(fù)，不用TritonX-100處理。