馬偉超，李一婧，念亞男

（天水師范學(xué)院生命科學(xué)與化學(xué)學(xué)院，甘肅 天水 741001）

木糖醇（xylitol）的化學(xué)名稱為 l，2，3，4，5-戊五醇，是木糖代謝的中間產(chǎn)物，甜度與蔗糖相當(dāng)，可替代蔗糖作為甜味劑，且具有良好的抗齲齒性能，故在食品、醫(yī)藥工業(yè)具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值[1]。玉米芯和玉米秸稈中富含多縮戊糖、纖維素、半纖維素，是制備木糖醇的良好來源。目前工業(yè)上主要采用木糖化學(xué)催化加氫的方法來生產(chǎn)木糖醇，其設(shè)備和工藝復(fù)雜、成本很高，而利用發(fā)酵法生產(chǎn)木糖醇不需純化木糖，且發(fā)酵液中木糖醇的分離提純較簡(jiǎn)單，能夠降低生產(chǎn)成本[2]。試驗(yàn)用稀硫酸預(yù)處理玉米秸稈，進(jìn)一步優(yōu)化木糖醇發(fā)酵生產(chǎn)的工藝條件。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌 種 熱帶假絲酵母（Candida tropicalis菌種保存號(hào)：CICC 1779），購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏中心，4℃保存。

1.1.2培養(yǎng)基YM培養(yǎng)基[3]（5mL）：3 g/L麥芽汁、5 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、pH=6.0。發(fā)酵培養(yǎng)基[4]：蛋白胨 2.5 g/L、酵母粉 2.5 g/L、KH2PO45 g/L、MgSO40.5g/L、（NH4）2SO40.5 g/L ，溶解于秸稈水解液中，121℃滅菌15min。

1.1.3 試 劑 麥芽汁（10波林度麥芽汁）（北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠）；木糖、木糖醇均為分析純（南京奧多福尼生物科技有限公司）；其他藥品均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 利用地衣酚比色法[5]制作木糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線；利用變色酸比色法[6]制作木糖醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 玉米秸稈水解液的制備[7-9]參考江滔[7]，邵世芳[8]，張繼泉[9]等，將玉米秸稈用高速組織搗碎機(jī)搗碎，稱取7.5 g，設(shè)置3個(gè)處理組，分別為：①1.5%H2SO4（100 mL）125℃ 80 min；②1.0%H2SO4（75 mL）120℃2 h；③4.0%H2SO4（75 mL）90℃4 h，在鼓風(fēng)干燥箱中處理，然后過濾，收集濾液，調(diào)pH值為7.0，2 500 r/min離心5 min，取上清液，待用。

1.2.3 脫色水解液的制備 按曾雷等[10]的方法，在玉米秸稈水解液中加一定量的活性炭（8%～10%質(zhì)量比），置于搖床 55℃、1 000 r/min脫色 40 min，然后用真空泵抽濾以除去活性炭。測(cè)水解液和脫色水解液的木糖含量。

1.2.4 發(fā)酵培養(yǎng) 取活化的熱帶假絲酵母菌懸液1mL，以接種量5%加入發(fā)酵培養(yǎng)液中，于30℃、180 r/min搖床培養(yǎng)，每24 h測(cè)一次發(fā)酵液中木糖和木糖醇的濃度。

1.2.5 木糖和木糖醇含量的測(cè)定 將發(fā)酵液在12 000 r/min條件下離心5 min，取上清液，用分光光度計(jì)測(cè)木糖OD670吸光值和木糖醇OD570吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算出發(fā)酵液中木糖和木糖醇的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.1 木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 木糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.065 4 x+0.027 7，R2=0.997 8。

圖1 木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.2 木糖醇標(biāo)準(zhǔn)曲線 木糖醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.177 3 x+0.016，R2=0.999 0。

圖2 木糖醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 水解液中木糖的含量

對(duì)脫色前后的水解液中木糖含量進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如表1。由表1可以看出，脫色后水解液的木糖含量比脫色前略低，這是由于活性炭吸附脫色時(shí)吸附了少量木糖所致。在不同濃度酸處理水解液中，1%的硫酸處理對(duì)木糖產(chǎn)量的影響明顯優(yōu)于1.5%硫酸處理組，但與4%硫酸處理組差異不顯著。經(jīng)方差分析后得出，硫酸濃度和脫色與否對(duì)水解液中木糖含量的影響都極顯著，但從兩者貢獻(xiàn)的離差平方和來看，硫酸濃度對(duì)因變量木糖產(chǎn)量的影響大于脫色對(duì)因變量的影響。

表1 初始培養(yǎng)基中木糖的含量

2.3 發(fā)酵液中木糖醇及其轉(zhuǎn)化率的測(cè)定

發(fā)酵過程中的發(fā)酵液木糖醇濃度測(cè)定結(jié)果見表2。由表2可知：脫色后發(fā)酵液中木糖醇的濃度較未脫色組高，用4%硫酸處理組的木糖醇濃度較1%硫酸和1.5%硫酸處理組高。將其進(jìn)行發(fā)差分析及差異顯著性分析，如表3、表4。

表2 發(fā)酵液中木糖醇濃度 （mg/100mL）

表3 木糖醇產(chǎn)量的方差分析

由表3、表4可得出：脫色與否對(duì)發(fā)酵液中木糖醇濃度的影響極顯著；4%硫酸處理組對(duì)木糖醇含量的影響最大，其次是1%硫酸處理組，最后是1.5%硫酸組。

根據(jù)木糖醇轉(zhuǎn)化率=木糖醇濃度/培養(yǎng)基初始木糖濃度，對(duì)不同處理組的木糖醇轉(zhuǎn)化率進(jìn)行比較，結(jié)果如圖3。由圖3可知，脫色后木糖轉(zhuǎn)化率比未脫色組整體要高一些，其中，4%硫酸處理組最高，達(dá)46.59%。

表4 木糖醇產(chǎn)量差異顯著性分析

圖3 木糖醇轉(zhuǎn)化率

根據(jù)木糖醇生成速率（g/L·h）=（木糖醇的最終濃度-木糖醇的最初濃度）/發(fā)酵時(shí)間，對(duì)不同處理組的木糖醇生成速率進(jìn)行比較，結(jié)果如圖4。由圖4可知：木糖醇的生成速率以4%硫酸脫色處理組最高，達(dá)到1.37mg/L·h。以1.5%硫酸未脫色組最低。

圖4 木糖醇的生成速率

3 結(jié) 論

利用3種不同濃度稀硫酸處理玉米秸稈，然后吸附脫色，比較脫色前后不同處理組水解液中木糖含量，得出以1%硫酸未脫色的處理組木糖量最高，為253.348 6μg/mL；4%硫酸未脫色處理組位于其次，為225.519 9μg/mL；且脫色處理木糖量整體低于未脫色處理。將熱帶假絲酵母接種在含上述不同水解液的培養(yǎng)基上進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵72 h后，4%硫酸脫色處理組發(fā)酵液中木糖醇含量最高，達(dá)10.507 6 mg/100mL；比較各組發(fā)酵液中木糖醇轉(zhuǎn)化率，脫色處理組比未脫色處理組整體要高，且以4%脫色處理組最高，木糖醇轉(zhuǎn)化率可達(dá)46.59%；比較木糖醇生成速率，仍以4%硫酸脫色處理組最高，達(dá)到1.37 mg/L·h。

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