陳大忠，于永軍，王海龍，王艷紅，楊炳友，石朗

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江省軍區(qū)醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;4.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

龍牙楤木中物質(zhì)基礎(chǔ)成分齊墩果酸，是在東北道地中藥材龍牙楤木中提取、分離后獲得的。目前，以膠囊劑劑型在臨床上用于治療黃疸型肝炎、遷延性肝炎、酒精肝和脂肪肝等［1－2］。國內(nèi)對于齊墩果酸單體緩釋制劑有文獻(xiàn)研究報道，本實(shí)驗(yàn)結(jié)合文獻(xiàn)對齊墩果酸緩釋制劑的研究［3］，采用重復(fù)正交實(shí)驗(yàn)考察骨架緩釋材料的類型、骨架緩釋材料的用量、填充劑的種類比例和粘合劑的種類，確定出龍牙肝泰緩釋片的最佳工藝。

1 儀器與藥品

Waters 600E－2487型高效液相色譜儀(美國);Millennium 32色譜工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國);電子分析天平BS124SGC－06(北京賽多利斯儀器有限公司);乙腈(色譜級);水為重蒸餾水;其他均為分析純;齊墩果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所);羥丙基甲基纖維素(HPMCK100、HPMCK15、HPMCK4M，上海COLORCON有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 緩釋片累積釋放度的測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(250mm ×4.6mm，5μm);流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液(67∶33)［4］;檢測波長:210nm;流速:1.0mL·min－1;柱溫:30℃［5］。

2.1.2 累積體外釋放度的方法

按照2010年版《中國藥典》體外釋放度試驗(yàn)法的轉(zhuǎn)藍(lán)法測定，轉(zhuǎn)速100rpm·min－1，釋放介質(zhì)選用0.5%十二烷基硫酸鈉溶液［磷酸鹽調(diào) pH值為(7.0±0.1)］，溫度為(37 ±0.5)℃。分別在 2、6、12h取樣5ml(同時補(bǔ)充等體積同溫介質(zhì))，濾過，精密取續(xù)濾液20μl注入液相色譜儀，測定峰面積。再精密稱取齊墩果酸對照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成濃度為0.102mg·mL－1的對照品溶液，精密吸取對照品溶液20μl注入液相色譜儀，外標(biāo)法測定不同時間的累計釋放度。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計重復(fù)試驗(yàn)優(yōu)化緩釋片制劑工藝

2.2.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計

根據(jù)各單因素對緩釋片釋放度影響的預(yù)考察，針對影響釋放度貢獻(xiàn)大的4因素，即 HPMC分型(黏度)、HPMC用量、填充劑比例關(guān)系和粘合劑的分型，采用3水平正交實(shí)驗(yàn)，見表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)表因素水平表

表2 緩釋片制劑工藝正交實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果(n=3)

2.2.2 正交實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果

利用2h、4h和6h三個時間點(diǎn)的累計釋放度(Q)作為綜合指標(biāo)，采用公式:Y=Q12h－［(Q2h－30%)2+(Q6h－50%)2］1/2計算綜合分值。由于4因素占據(jù)了正交實(shí)驗(yàn)表L9(34)中的所有列，故9個處方試驗(yàn)中，對每個處方試驗(yàn)進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，對其27次試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果見表2、表3。

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果表明，各因素對緩釋片制劑釋放度影響的大小順序?yàn)?C＞D＞A＞B，由方差分析顯著性確定最佳緩釋片制劑工藝應(yīng)為A1B2C3D2，即親水凝膠骨架材料 HPMCK4M使用量35%，填充劑MCC(微晶纖維素)與乳糖比例為1∶1，粘合劑采用6%PVP(聚乙烯吡咯烷酮)溶液。

3 討論

3.1 在正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計考察影響緩釋片的主要4因素HPMC分型(黏度)、HPMC用量、填充劑比例關(guān)系和粘合劑的分型過程中，采用了正交實(shí)驗(yàn)表L9(34)試驗(yàn)方案，由于考察的4因素占滿了正交表的所有列，誤差項(xiàng)空白列缺省。因此，對9個處方試驗(yàn)增加了每個實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次的試驗(yàn)方法，利用誤差項(xiàng)SSe作為對照方差分析，結(jié)果準(zhǔn)確、合理，根據(jù)最終確定的最佳制劑工藝，骨架材料的選擇與相關(guān)文獻(xiàn)［6］報道基本一致。

3.2 在正交實(shí)驗(yàn)的處方篩選綜合評分K值計算參考了法莫替丁緩釋片綜合評分思想［7］，根據(jù)2005版《中國藥典》二部的要求，緩釋片應(yīng)在2h釋放(Q2)接近30%，6h釋放(Q6)接近50%為宜，［(Q2－30)2+(Q6－50)2］1/2反映了2h、6h的釋藥偏差，二者越小越好;12h釋藥應(yīng)大于75%，因此，K=Q12－［(Q2－30)2+(Q6－50)2］1/2越大越好。

［1］杜施霖，遲寶榮.龍牙楤木皂苷對大鼠酒精性肝病防治的作用［J］.吉林大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2005，31(1):64－67.

［2］吳勃巖，祝司霞，王晶.龍牙楤木葉總皂甙對荷瘤鼠尾變型p53表達(dá)的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2005，33(1):38－39.

［3］劉亞妮，易以木，陳華庭，等.齊墩果酸緩釋片的研制及體外釋放度考察［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(5):345－347.

［4］何文斌，何作民，黃婉鋒.HPLC法測定齊墩果酸膠囊中齊墩果酸含量［J］.中國藥事，2008，22(6):485－486.

［5］韋建華，李耀華，蔡少芬，等.HPLC法測定柿子中齊墩果酸與熊果酸的含量［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(13):48－50.

［6］祝志賢，梁秋文.苦參堿緩釋片的制備及其釋放度的研究［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2008，24(6):569－571.

［7］曾環(huán)想，潘三衛(wèi)，陳濟(jì)民，等.法莫替丁緩釋片的制備工藝及其體外釋放特性的研究［J］.中國藥學(xué)雜志，1997，32(4):213－216.