張麗萍,李志梅
(浙江省溫州市藥品檢驗所,325028)
嬰兒保肺寧收載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第八冊,該藥具有清肺化痰、止咳降逆的功效。用于肺熱咳嗽、喘滿痰盛、嘔吐身熱。處方由川貝母160 g,橘紅120 g,姜半夏80 g,赭石60 g,桔梗、百部、紫蘇梗、紫蘇子(炒)各50 g,天竺黃、朱砂、冰片各40 g,硼砂、石膏、滑石各30 g組成[1]?,F(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)僅限于散劑的常規(guī)檢查項目,專屬性不強,難以控制該藥品質(zhì)量。為提高該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平,確保療效,參照有關(guān)文獻(xiàn)[2],筆者對川貝母、橘紅及桔梗進(jìn)行了薄層鑒別;采用高效液相色譜法對處方中橘紅中的主要有效成分橙皮苷進(jìn)行了含量測定,為有效控制該藥品的質(zhì)量提供了可靠的依據(jù)。
Agilent 1200高效液相色譜儀(具二極管陣列檢測器),METTLE XS205DU百萬分之一天平。橙皮苷對照品(批號:110721-200613)、貝母素乙對照品(批號:110751-200303)、桔梗對照藥材(批號:121028-200608)均由中國藥品生物制品檢定所提供,甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。嬰兒保肺寧(按處方及制法自制樣品3批,處方中藥材均購自溫州醫(yī)藥商業(yè)集團(tuán),經(jīng)我所中藥室鑒定來源符合規(guī)定。制法:以上14味,除朱砂水飛或粉碎成極細(xì)粉,冰片研成細(xì)粉外,其余川貝母等12味粉碎成細(xì)粉,與上述朱砂、冰片等粉末配研,過篩,混勻,即得)。
2.1 薄層鑒別
2.1.1 川貝母的鑒別 取本品5 g,加濃氨試液10 mL,密塞,浸泡 1 h,加二氯甲烷 40 mL,超聲處理1 h,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇0.5 mL使溶解,作為供試品溶液。另取缺川貝母的陰性樣品,同法制成陰性對照溶液。取貝母素乙對照品加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液。作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄ⅥB)實驗,吸取供試品溶液、陰性對照溶液各20 μL,對照品溶液2 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液-水(18∶2∶1∶0.1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以碘化鉍鉀試液。在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的橙紅色的斑點。而陰性樣品色譜相同位置上,未顯相同斑點。
2.1.2 桔梗的鑒別 取本品3 g,加7%硫酸乙醇-水(1∶3)混合液20 mL,加熱回流3 h,放冷,用三氯甲烷振搖提取2次,每次20 mL,合并三氯甲烷液,加水30 mL洗滌,棄去洗液,三氯甲烷液用無水硫酸鈉脫水,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。另取缺桔梗的陰性樣品,同法制成陰性對照溶液。另取桔梗對照藥材1 g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄ⅥB)實驗,吸取上述溶液各10 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙醚(1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點。而陰性樣品色譜相同位置上,未顯相同斑點。
2.1.3 橘紅的鑒別 取本品粉末2 g,加甲醇10 mL,加熱回流20 min,濾過,取濾液5 mL,濃縮至 1 mL,作為供試品溶液。另取缺橘紅的陰性樣品,同法制成陰性對照液。另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄ⅥB)實驗,吸取上述溶液各2 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(15∶3∶2)為展開劑,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈(波長365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的淺黃色的熒光斑點,而陰性樣品色譜相同位置上未顯相同斑點。
2.2 含量測定
2.2.1 色譜條件 色譜柱:Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-醋酸-水(35∶2∶63)為流動相,流速1 mL·min-1;檢測波長283 nm,柱溫:30℃。進(jìn)樣量:5 μL。按處方藥味的比例,自配不含橘紅的群藥,依“2.2.3”項方法制備缺橘紅陰性樣品溶液。上述條件下,供試品溶液中橙皮苷色譜峰與其他峰分離良好,峰形對稱,色譜圖見圖1。
2.2.2 對照品溶液的制備 取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h的橙皮苷適量,精密稱定,用甲醇溶解并配制成濃度為40 μg·m L-1的溶液,作為對照品溶液。
2.2.3 供試品溶液的制備 取混勻的樣品約0.4 g,精密稱定,精密加甲醇20 mL,稱定質(zhì)量,回流提取1 h,放冷,再稱定質(zhì)量,用甲醇補足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過,即得。
圖1 嬰兒保肺寧中橙皮苷的HPLC圖譜A.陰性樣品;B.樣品;C.對照品;1.橙皮苷
2.2.4 線性關(guān)系考察 取濃度為41.05 μg·m L-1對照品溶液,分別進(jìn)樣 1,2,5,8,10 μL,記錄色譜峰的面積。以橙皮苷進(jìn)樣量(X,μg)為橫座標(biāo),對照品峰面積(Y)為縱座標(biāo),得到橙皮苷的回歸方程為:Y=992.7X+3.483 9(r=0.999 5),表明橙皮苷在0.041 05~0.410 5 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。
2.2.5 精密度實驗 吸取同一對照品溶液各5 μL,分別連續(xù)6次進(jìn)樣,測定峰面積,對照品溶液品溶液橙皮苷峰面積RSD為0.97%。
2.2.6 穩(wěn)定性實驗 取供試品溶液放置0,1,2,3,6 h后進(jìn)樣,測定峰面積,橙皮苷RSD為1.78%,結(jié)果表明供試品溶液在室溫下放置6 h穩(wěn)定。
2.2.7 重復(fù)性實驗 取6份同一批次嬰兒保肺寧各約0.4 g,按供試品溶液制備方法操作,測定,測得橙皮苷含量,計算RSD,橙皮苷RSD為0.96%,表明此方法
重復(fù)性良好。
2.2.8 加樣回收率實驗 分別精密稱取2.64 mg·g-1樣品6份,每份約0.2 g,精密稱定后,分別精密加入橙皮苷對照品溶液適量,按供試品溶液的制備方法制備樣品溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣分析,測橙皮苷含量,計算回收率,結(jié)果見表1。平均回收率97.55%,RSD=1.51%。
表1 嬰兒保肺寧中橙皮苷加樣回收率實驗結(jié)果
2.2.9 樣品含量測定 取樣品,按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣測定,按外標(biāo)法計算橙皮苷的含量,結(jié)果含量分別為2.51,2.64,2.76 mg·g-1。按嬰兒保肺寧處方中橘紅量計算,1 g含橙皮苷應(yīng)不得少于2.19 mg,結(jié)果已達(dá)《中華人民共和國藥典》2010年版規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。
筆者在本實驗中對含量測定項中流動相曾比較了甲醇-水[3]及甲醇-醋酸-水[4]多種不同配比,提取方法比較了加甲醇、乙醇、75%乙醇超聲處理45,60 min及加熱回流提取30,60 min[5]等多種提取方法,結(jié)果顯示加甲醇加熱回流提取1 h提取完全,用甲醇-醋酸-水(35∶2∶63)為流動相出峰時間適當(dāng),且橙皮苷與鄰峰基線分離好,峰形好,重現(xiàn)性好。
原標(biāo)準(zhǔn)中僅有散劑的常規(guī)檢查項目,筆者通過優(yōu)化色譜條件,檢測橙皮苷的含量,增強了專屬性;另增加了川貝母、桔梗和橘紅的薄層鑒別,進(jìn)一步提高完善了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第八冊[S].1993:167.
[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:262-263.
[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:355-356.
[4] 王福霞彭柳 王曉瓊.高效液相色譜法測定健胃消食口服液橙皮苷含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2009,28(2):236-237.
[5] 蔣慶宇,陳平,廖琦,等.高效液相色譜法測定追風(fēng)藥酒中橙皮苷含量[J].中國藥業(yè),2009,18(7):19-20.