王東升

(河南省漯河市郾城區(qū)人民醫(yī)院內(nèi)科，462300)

金銀花為常用中藥，含有豐富的揮發(fā)油、黃酮類化合物、有機酸類物質(zhì)、三萜皂苷類物質(zhì)和無機元素［1］。有研究顯示，該藥具有治療濕熱黃疸、肝膽結(jié)石、尿路結(jié)石、細(xì)菌感染等作用，可用于解熱抗炎、降脂［2］、利膽保肝［3］等，在治療肝損傷上可能是有效的藥物。對乙酰氨基酚主要用于解熱鎮(zhèn)痛，如果過量使用則可導(dǎo)致嚴(yán)重的肝損害乃至死亡［4］，其誘導(dǎo)肝損傷是篩選保肝藥物的常用實驗?zāi)Ｐ停?］。筆者在本實驗中探討金銀花對對乙酰氨基酚誘導(dǎo)肝損傷的干預(yù)和保護作用及其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 試藥 金銀花(產(chǎn)地:江蘇，購自廣惠和大藥房，經(jīng)漯河醫(yī)專趙喜蘭副教授鑒定為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)試劑盒、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(glutamate aminotransferase，AST)試劑盒購自中生北控生物科技公司，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、一 氧 化 氮 (nitric oxide，NO)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSHPx)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量20～25 g，均由鄭州大學(xué)動物實驗中心提供。

1.3 儀器 低溫離心機(Eppendorf centrifuge5417R，Germany)，倒置顯微鏡(Nikon Eclipse TS100)，酶標(biāo)儀(MK3型，上海雷勃分析儀器有限公司)。

1.4 金銀花的煎煮及質(zhì)量控制 金銀花加10倍量水，煎煮1 h，煎煮2次，每次1 h，合并2次濾液，濃縮至每毫升相當(dāng)于1 g原藥材。以綠原酸為對照品，采用高效液相色譜法對其質(zhì)量進行控制，流動相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺 (15∶80∶1∶1)，檢測波長為324 nm，結(jié)果顯示提取液中綠原酸的含量為23 mg·mL-1。

1.5 小鼠肝損傷模型的建立 小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組:正常對照組，模型組，聯(lián)苯雙酯組(0.6 g·kg-1)，金銀花低、中、高劑量組(10，15，25 g·kg-1)。除正常對照組和模型組外，其他各組按體質(zhì)量分別以0.02 mL·g-1劑量給藥，每天1次;正常對照組和模型組給予等量0.9%氯化鈉溶液，連續(xù)10 d。末次給藥前24 h禁食，除正常對照組外，其余5組均腹腔注射對乙酰氨基酚400 mg·kg-1［6］。24 h后經(jīng)眼靜脈取血，分離血清，處死小鼠，取出肝臟，先用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)沖洗2次，然后用雙蒸純化水1∶5研磨成組織勻漿，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液檢測。

1.6 生化指標(biāo)的測定 按照試劑盒說明書檢測血清中 ALT、AST 和肝組織 SOD、MDA、NO、GSH-Px含量。

2 結(jié)果

2.1 金銀花對小鼠血清中ALT、AST水平的影響 模型組和正常對照組比較，肝臟組織中AST、ALT含量顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，表明對乙酰氨基酚對肝具有一定的傷害作用;與模型組比較，各給藥組血清ALT和AST均明顯下降，但各組下降程度明顯不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果見表1。

表1 6組小鼠血清ALT與AST水平測定結(jié)果U·L-1，±s

表1 6組小鼠血清ALT與AST水平測定結(jié)果U·L-1，±s

與模型組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01;與正常對照組比較，*3P＜0.05，*4P＜0.01

組別 小鼠/只ALT AST金銀花提取物低劑量組 10 286.32±20.37*1 251.78±20.14中劑量組 10 211.34±18.35*1 223.57±21.78*1高劑量組 10 181.51±11.17*2 179.67±11.27*2聯(lián)苯雙酯組 10 191.56±12.24*2 171.87±9.91*2模型組 10 319.37±21.36*3 279.97±15.97*4正常對照組10 170.17±16.70 157.21±31.68

2.2 金銀花對小鼠肝組織MDA與NO的影響 模型組和正常對照組比較，肝組織MDA、NO含量顯著增加(P＜0.05)，提示小鼠對乙酰氨基酚肝損傷時，產(chǎn)生明顯的脂質(zhì)過氧化。與模型組相比，各給藥組MDA、NO均明顯下降(P＜0.05或P＜0.01)，并且呈劑量依賴性，表明金銀花能有效提高肝臟組織抗脂質(zhì)過氧化的能力，結(jié)果見表2。

表2 6組小鼠肝組織MDA與NO含量測定結(jié)果±s

表2 6組小鼠肝組織MDA與NO含量測定結(jié)果±s

與模型組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01;與正常對照組比較，*3P＜0.05

組別 小鼠/只MDA/(nmol·mg-1)NO/(μmol·g-1)金銀花提取物低劑量組 10 3.84±0.19*1 4.89±0.61*1中劑量組 10 2.34±0.17 4.11±0.15*2高劑量組 10 2.31±0.21*2 3.84±0.48*2聯(lián)苯雙酯組 10 2.39±0.17*2 3.87±0.57*2模型組 10 4.39±0.11*3 5.74±0.25*3正常對照組10 2.25±0.17 3.67±0.11

2.3 金銀花對小鼠肝組織GSH-Px與SOD的影響模型組與正常對照組比較，GSH-Px、SOD水平顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)，說明對乙酰氨基酚對肝臟有一定的傷害;各給藥組GSH-Px、SOD水平顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，提示藥物能通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)對肝臟產(chǎn)生保護作用，減輕對乙酰氨基酚對肝臟的損傷，結(jié)果見表3。

表3 6組小鼠肝組織GSH-Px與SOD含量測定結(jié)果U·mg-1，±s

表3 6組小鼠肝組織GSH-Px與SOD含量測定結(jié)果U·mg-1，±s

與模型組比較，*1P＜0.05，*2P＜0.01;與正常對照組比較，*3P＜0.05，*4P＜0.01

組別 小鼠/只GSH-Px SOD金銀花提取物低劑量組 10 64.37±2.71*1 104.25±11.21*2中劑量組 10 65.78±1.57*1 141.27±13.11*2高劑量組 10 68.75±1.67 177.11±14.34*2聯(lián)苯雙酯組 10 70.17±1.47*2 163.55±16.78*1模型組 10 40.12±1.37*3 87.32±16.78*4正常對照組10 85.68±1.27 177.32±18.67

3 討論

血清中ALT和AST水平高低可以反映肝細(xì)胞損傷程度，ALT、AST升高水平與肝細(xì)胞損傷程度成粗略平行關(guān)系［7］。本實驗中，金銀花均能增高SOD、GSHPx活性，同時明顯降低肝組織中MDA、NO的含量，提示藥物通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)對肝臟產(chǎn)生保護作用，有降低肝指數(shù)的趨勢，可減輕對乙酰氨基酚對肝臟的損傷，其作用機制部分與抗氧化、清除自由基有關(guān)［8］。本實驗結(jié)果表明，金銀花對對乙酰氨基酚肝損傷有一定的保護作用，能降低肝損傷小鼠血清ALT和AST活性，通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增高SOD、GSHPx活性，同時明顯降低肝組織MDA、NO、TNF-α含量，具體機制還有待進一步研究。

［1］ 武曉紅，田智勇，王煥.金銀花的研究新進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2005，16(12):2303-2304.

［2］ 林宏.金銀花藥理研究進展［J］.江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，21(6):82-84.

［3］ 趙國玲，劉佳佳，林丹.金銀花化學(xué)成分及藥理研究進展［J］.中成藥，2002，24(12):973-976.

［4］ 蔡中起，趙憲噸.對乙酰氨基酚肝損害研究進展［J］.國外醫(yī)學(xué):內(nèi)科學(xué)分冊，1998，8(25):347-348.

［5］ 汪德清，丁保國，馬艷青，等.黃芪總黃酮對對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷防護作用的研究［J］.中國中藥雜志，2001，26(7):483-485.

［6］ 張昱，張偉.禿瘡花注射液對對乙酰氨基酚引起肝損傷的保護作用［J］.中華實用中西醫(yī)雜志，2004，4(17):3059-3061.

［7］ 張其蘭.肝藥靈防治實驗性肝損傷作用研究［J］.中草藥，1983，24(10):535.

［8］ 宮璀璀.金銀花在體內(nèi)抗氧化作用的實驗研究［J］.實用醫(yī)藥雜志，2006，23(5):584.