劉偉忠，陳清霞，莫玉泉，溫預關(guān)，王廣發(fā)

(1.廣州市腦科醫(yī)院國家藥品臨床試驗機構(gòu)，510370;2.中山大學附屬第二醫(yī)院藥學部，廣州 510120;3.南方醫(yī)科大學藥學院，廣州 510515)

鹽酸齊拉西酮 (ziprasidone hydroachloride)，化學名稱 5-［2-［4-(1，2-苯并異噻唑-3-基)-1-哌嗪基］-乙基］-6-氯-13-二氫-2(1H)-吲哚-2-酮鹽酸鹽半水化合物，屬新型非典型抗精神病藥物，對5-羥色胺2(5-hydroxy tryptamine 2，5-HT2)受體和多巴胺 2(Dopamine 2，D2)受體都有拮抗作用，用于精神分裂或分裂情感性精神障礙患者的治療，具有很好的效果［1］。該藥在治療劑量范圍內(nèi)使用安全，不良反應少，而且可以快速增加劑量。在臨床用藥劑量范圍內(nèi)，血漿濃度與劑量呈線性關(guān)系［2-3］。阿立哌唑(aripiprazole)，化學名稱:7-［4-［4-(2，3-二氯苯基)-1-哌嗪基］丁氧基］-3，4-二氫-2(1H)喹啉酮。是一種高脂溶性抗精神病新藥［4］。雖然其藥理作用尚未完全清楚，但普遍認為阿立哌唑具有拮抗多巴胺受體和激動自身受體的雙重作用，與目前上市的典型及非典型抗精神病藥的作用機制完全不同，為第2代新型非典型抗精神病藥物［5-6］。臨床上，齊拉西酮與阿立哌唑常聯(lián)合用于治療難治性情感精神分裂癥患者，已有單獨測定此兩種藥物血藥濃度的報道［7-10］，但筆者尚未見到同時測定兩種藥物血漿濃度的報道。筆者參考相關(guān)文獻，建立了一種簡單、快速同時測定人血漿中齊拉西酮與阿立哌唑濃度的反相高效液相色譜法，并應用于臨床血藥濃度檢測。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀［Agilent 1100，包括G1322A在線脫氣機、G1315B二極管陣列紫外檢測器(diode-array detector，DAD)、G1313A 自動進樣器、G1311A自動調(diào)配器、G1316A可調(diào)柱溫恒溫箱和Agilent色譜化學工作站］，渦旋混合器(上海醫(yī)科大學儀器廠)，電子分析天平(瑞士SARTORIUS)，高速離心機(美國 MICRO1224)，真空干燥箱(德國 MMMGROUP)，超純水儀(法國MILLIPORE)。

1.2 藥品和試劑 齊拉西酮與阿立哌唑?qū)φ掌?Sigma公司。齊拉西酮批號:SH113705，含量＞99%;阿立哌唑批號:HT112507，含量＞99%)，內(nèi)標物地西泮(廣東省藥品檢驗所提供，批號:20060508，含量＞99%)，甲醇(美國迪馬公司，色譜級)，醋酸銨(廣東臺山粵僑試劑有限公司，批號:20090125，含量＞98%)，提取劑乙酸乙酯與二氯甲烷(廣州化學試劑廠，含量＞99%)，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品與內(nèi)標溶液的配制 精密稱取齊拉西酮對照品與阿立哌唑?qū)φ掌犯?0.0 mg，分別置于2個10 mL量瓶，加甲醇溶解，并定容至10.0 mL，置冰箱4℃保存。臨用時用甲醇稀釋成所需濃度的齊拉西酮與阿立哌唑?qū)φ掌啡芤?。配制濃度?.0 mg·L-1的地西泮甲醇溶液作為工作內(nèi)標液。

2.2 色譜條件 色譜柱:美國迪馬公司的C18鉆石色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:0.03 mol·L-1醋酸銨-甲醇(14∶86);流速:0.8 mL·min-1;柱溫:40℃;檢測波長:254 nm;靈敏度為0.01AUFS。

2.3 樣品處理方法 取含齊拉西酮與阿立哌唑的血漿樣品1.0 mL加至10 mL具塞錐形離心管中，精確加入1.0 mg·L-1內(nèi)標液20 μL，快速振蕩數(shù)秒。再加入乙酸乙酯與二氯甲烷(80∶20)4.0 mL，密塞，渦旋振蕩3 min，5 000 r·min-1離心 5 min。吸取上清液放入5 mL具塞錐形離心管內(nèi)，40℃真空干燥至干。進樣前加入甲醇100 μL快速振蕩數(shù)秒溶解殘渣，吸取15 μL進樣。

2.4 色譜分離情況 在本實驗條件下，空白血漿、齊拉西酮與阿立哌唑?qū)φ掌费獫{，以及精神病患者服藥后的血漿樣品，經(jīng)高效液相色譜分析法測定，得到的色譜圖見圖1。由圖1可知，內(nèi)標物、齊拉西酮與阿立哌唑的色譜峰能完全分離，沒有明顯的內(nèi)生雜質(zhì)峰干擾，可見本方法具有較高的專屬性。齊拉西酮、內(nèi)標物與阿立哌唑的保留時間為4.449，5.065和6.503 min。

圖1 3種血漿的高效液相色譜圖A.空白血漿;B.空白血漿+齊拉西酮與阿立哌唑?qū)φ掌?內(nèi)標;C.患者服用齊拉西酮與阿立哌唑后的血漿+內(nèi)標;1.齊拉西酮;2.內(nèi)標;3.阿立哌唑Fig．1 HPLC chromatograms of 3 kinds of plasmaA.blank plasma;B.blank plasma spiked with ziprasidone，aripiprazole and internal standard;C.patient＇s plasma sample spike with internal standard;1.ziprasidone;2.internal standard;3.aripiprazole

2.5 標準曲線的繪制 在7個10 mL具塞錐形離心管中分別加入不同濃度齊拉西酮與阿立哌唑?qū)φ掌啡芤?0 μL，真空抽干后，再加空白血漿1.0 mL，振蕩數(shù)秒，使血漿齊拉西酮濃度分別相當于20.0，40.0，80.0，160.0，240.0，480.0，640.0 ng·mL-1;阿立哌唑濃度分別相當于 25.0，50.0，100.0，200.0，400.0，800.0，1 000.0 ng·mL-1。然后按“2.3”項處理，經(jīng)高效液相色譜分析，測得藥物峰面積(Ai)、內(nèi)標峰面積(As)，以Ai/As的值X為橫坐標，以血漿樣品所對應各點藥物濃度(Y)為縱坐標繪制標準曲線。經(jīng)加權(quán)最小二乘法進行線性回歸，得齊拉西酮20.0～640.0 ng·mL-1，阿立哌唑25.0 ～1 000.0 ng·mL-1標準曲線。齊拉西酮曲線方程為:Y=61.717X+2.16，r=0.998 9;阿立哌唑曲線方程為:Y=87.946X+1.37，r=0.999 1;權(quán)重系數(shù)為W=1/C2。當信躁比(S/N)=3時，齊拉西酮與阿立哌唑的檢測定量下限可達到10.0 ng·mL-1。

2.6 回收率與精密度實驗［11］取濃度為 40.0，160.0，480.0 ng·mL-1齊拉西酮和 50.0，200.0，800.0 ng·mL-1阿立哌唑含藥血漿樣品，經(jīng)色譜分析，以峰面積比較，得到的相對回收率均＞90%，提取回收率＞70%。同時在1 d內(nèi)重復5次和1周內(nèi)重復5次測定濃度，計算日內(nèi)、日間誤差及方法回收率(表1)。結(jié)果表明，該方法符合生物樣品分析要求。

表1 齊拉西酮和阿立哌唑的回收率與日內(nèi)、日間精密度實驗結(jié)果Tab．1 Recovery and intra-and inter-day precision of ziprasidone and aripiprazole ±s，n=5

表1 齊拉西酮和阿立哌唑的回收率與日內(nèi)、日間精密度實驗結(jié)果Tab．1 Recovery and intra-and inter-day precision of ziprasidone and aripiprazole ±s，n=5

藥物 加入量/(ng·mL–1)日內(nèi)精密度實測濃度/(ng·mL–1)RSD/%日間精密度實測濃度/(ng·mL–1)RSD/%方法回收率% RSD/%提取回收率% RSD/%齊拉西酮40.0 40.3 8.71 40.1 8.97 100.21 7.21 78.26 7.52 160.0 158.7 6.92 157.9 6.76 97.71 4.32 74.33 4.36 480.0 481.2 4.59 482.6 4.62 96.95 3.87 71.42 3.35阿立哌唑 50.0 50.4 8.39 50.6 5.31 101.82 8.02 79.32 8.15 200.0 197.5 7.16 196.3 5.38 98.36 6.74 76.51 5.47 800.0 796.6 5.58 795.1 4.23 97.87 5.45 72.67 3.19

2.7 樣品穩(wěn)定性實驗 按“2.5”項方法分別配制40.0，160.0，480.0 ng·mL-1齊拉西酮和 50.0，200.0，800.0 ng·mL-1阿立哌唑血漿樣品，3組共18個樣品(雙樣)，分別在室溫(25～28℃)放置 0，12 h和-20℃凍存1 d，以及-20℃凍存1，3周，分別進行色譜測定，未見凍存樣品的藥物降解。統(tǒng)計結(jié)果顯示RSD均＜10%。

2.8 樣品的質(zhì)量控制 按“2.5”項方法分別配制40.0，160.0，480.0 ng·mL-1齊拉西酮和 50.0，200.0，800.0 ng·mL-1阿立哌唑36個血漿樣品(一式12份)，置-20℃凍存?zhèn)溆?，為質(zhì)控樣品。每次檢測血樣時同時檢測質(zhì)控樣品，如果相對回收率均落在85% ～115%(低濃度在80% ～120%)之內(nèi)，即可認為儀器檢測正常，否則需檢查整個操作過程以及儀器原因。

2.9 臨床應用 1例男性住院精神病患者，口服齊拉西酮片(重慶圣華曦藥業(yè)有限公司，批號:20091201，規(guī)格:每片20 mg)40 mg·d-1和阿立哌唑片(上海中西藥業(yè)股份有限公司，批號:20100522，規(guī)格:每片10 mg)20 mg·d-1。2周后早晨服藥前采血檢測其血漿濃度。結(jié)果齊拉西酮為56.9 ng·mL-1，阿立哌唑為416.2 ng·mL-1。

3 討論

齊拉西酮與阿立哌唑化學結(jié)構(gòu)中都有苯環(huán)，紫外吸收明顯。吸取齊拉西酮與阿立哌唑?qū)φ掌芬涸?90～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)齊拉西酮在210，254和320 nm處均有最大吸收峰，阿立哌唑在219，257 nm處有最大吸收峰，因此本實驗選擇254 nm為檢測波長。齊拉西酮與阿立哌唑的血漿濃度檢測方法國內(nèi)外已有報道［5-10］。相比之下，本實驗采用高效液相色譜法同時測定人血漿中齊拉西酮與阿立哌唑濃度的方法，具有操作簡單、成本低、精密度和回收率高等特點，適用于化學藥物分析和臨床藥動學研究，結(jié)果可靠。

本實驗過程中筆者曾分別使用乙醚、正己烷、乙酸乙酯和三氯甲烷為提取劑，提取率都達不到要求。而且單采用乙酸乙酯提取時血漿容易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，后發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯與二氯甲烷(80∶20)作提取劑，提取率最高，且避免了血漿乳化。采用此混合提取劑一次提取，后用甲醇定容進行紫外色譜分析，所取血漿僅為1.0 mL，進樣量15 μL便達到實驗要求，既提高了靈敏度又減少了樣品雜質(zhì)，保證色譜柱能進行大量樣品的連續(xù)分析。

在臨床精神科，對一些難治性的精神分裂癥或雙相情感障礙患者，單用齊拉西酮或阿立哌唑往往很難控制患者癥狀，而將這兩種藥聯(lián)合應用，治療效果顯著。由于抗精神病藥物治療窗相對較窄，不良反應較大，因此對它們進行治療藥物監(jiān)測，尋找療效最佳、不良反應最輕的適宜血漿濃度，具有積極臨床意義;齊拉西酮與阿立哌唑單個藥物的血漿濃度檢測雖已有報道［7-10］，相比之下，本實驗建立同時測定人血漿中齊拉西酮與阿立哌唑濃度的方法，并應用臨床檢測，方法學的實用性更好。

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