胡長敏 ，郭愛珍 ，3

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北武漢430070；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室，湖北武漢430070；3.國家肉牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系疾病控制功能研究室，湖北武漢430070 )

支原體是一類在自然界廣泛存在、能在無活細(xì)胞培養(yǎng)基中繁殖、無細(xì)胞壁、高度多形性的最小微生物,據(jù)報道己分離鑒定的牛的支原體約有30種,但最為嚴(yán)重的有兩種,一種是絲狀支原體絲狀亞種小菌落型,導(dǎo)致牛傳染性胸膜肺炎（CBPP),另一種是牛支原體,導(dǎo)致牛支原體肺炎,二者屬于支原體屬不同種。

一、牛肺疫的流行與防控

牛傳染性胸膜肺炎又稱牛肺疫,以出現(xiàn)纖維素性胸膜肺炎為主要特征,是一種烈性接觸性傳染病,對養(yǎng)牛業(yè)危害嚴(yán)重,目前仍在亞洲、非洲和拉丁美洲部分國家和地區(qū)流行。我國早在20世紀(jì)30～40年代,牛肺疫在我國西北、東北、內(nèi)蒙古和西藏部分地區(qū)大流行。1949年以后,我國在全國范圍內(nèi)啟動了疫苗免疫、隔離、撲殺等綜合性牛肺疫防控措施,終于有效控制牛肺疫疫情。1996年,我國自行宣布消滅牛肺疫。2011年5月24日,世界動物衛(wèi)生組織(OIE)第79屆年會通過決議,認(rèn)可中國為無牛傳染性胸膜肺炎國家,中國成為繼美國、澳大利亞、瑞士、葡萄牙、博茨瓦納和印度等后的第7個獲得OIE認(rèn)證無該病的國家。這也是我國獲得的OIE第二個無疫認(rèn)可,第一個是2008年獲得的無牛瘟OIE認(rèn)可。

二、牛支原體的危害

有關(guān)。目前已證實牛支原體除導(dǎo)致牛肺炎、關(guān)節(jié)炎、乳腺炎外,還可導(dǎo)致角膜結(jié)膜炎、耳炎、生殖道炎癥、流產(chǎn)與不孕等多種疾病,是牛呼吸疾病綜合征(bovine respiratory disease complex, BRD)的主要病因。該病在世界范圍內(nèi)存在,歐洲每年約有25%～33%的犢牛肺炎是由牛支原體引起的,相當(dāng)于每年損失1.44～1.92億歐元,其中英國每年有190萬頭?；寂Ｖгw肺炎,死亡達(dá)15.7萬頭。美國每年由于牛支原體導(dǎo)致的牛呼吸系統(tǒng)疾病和乳腺疾病所造成損失達(dá)1.40億美元,牛場感染率可達(dá)70%。

2009年在加拿大召開了全球第一屆牛支原體會議,標(biāo)志著全球開始高度關(guān)注牛支原體感染。接著歐盟第七框架資助了一個為期三年的牛支原體項目,內(nèi)容包括牛支原體診斷與牛支原體病的控制,參加國有英國、德國、意大利和以色利。

在我國，1983年黎濟(jì)申首次報道從乳腺炎牛奶中牛分離到牛支原體,此后一直未引起重視,直到2008年大規(guī)模流行牛支原體肺炎。

三、牛支原體的病原學(xué)特征

雖然支原體廣泛存在于自然界,但大部分支原體都具有種屬特異性,牛支原體對牛、羊和雞胚敏感,但對人及其它動物包括常見實驗動物等都不敏感。

一般說來,支原體是呼吸道、腸

2008年夏天,我國湖北地區(qū)新從外地引進(jìn)的架子牛暴發(fā)了以壞死性肺炎與胸膜炎為主要特征的“疑似牛肺疫”疫情,發(fā)病率為50%～100%,病死率平均10%,可在40%以上,臨床治療效果差,繼發(fā)關(guān)節(jié)炎,給我國養(yǎng)牛業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。經(jīng)鑒定,該病不是牛肺疫,而是牛支原體引起的呼吸系統(tǒng)傳染病,稱為牛支原體肺炎。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),我國除西藏、青海、海南等省外,牛支原體肺炎在各地廣泛發(fā)生,與運輸應(yīng)激有密切關(guān)系，多在運輸后2周左右發(fā)病。

牛支原體于1961年首次在美國從患乳腺炎的牛乳中分離獲到,1976年首次報道與牛呼吸系統(tǒng)疾病道、生殖道和乳腺等組織黏膜的常在菌,牛支原體主要寄生在鼻腔,其次在乳腺。支原體在外界環(huán)境中的生存能力很差,牛支原體在環(huán)境中的存活力較其它支原體稍強(qiáng),如在避免陽光直射條件下可存活數(shù)周,在4℃牛乳和海綿中可存活2個月；在水中可存活2周以上；在65℃2分鐘、70℃1分鐘可滅活,但4℃～37℃范圍內(nèi)在液體介質(zhì)中可存活59～185天；在其它材料中的存活時間是；糞37天,棉18天,秸桿13天,木和不銹鋼1～2天。

四、牛支原體肺炎的流行病學(xué)

自然感染的潛伏期較難確定。據(jù)報道,臨床健康犢牛購入24小時后,鼻腔中可檢出牛支原體,但大部分牛7天后經(jīng)鼻腔可檢牛支原體。多數(shù)牛在運達(dá)目的地后2周左右發(fā)病,不良環(huán)境下如途中遭雨淋等,牛可在運達(dá)目的地后第2天即發(fā)病。感染牛支原體的?？蓴y帶病原體數(shù)月甚至數(shù)年而成為一個傳染源。主要傳播途徑是通過飛沫呼吸道傳播,近距離接觸、吮吸乳汁或生殖道接觸等也可傳播牛支原體。

牛支原體病通常和其它病原體混合致病,國外早期認(rèn)為的細(xì)菌性病原主要有多殺性巴氏桿菌和溶血曼氏桿菌。但三年來發(fā)現(xiàn),導(dǎo)致該病的細(xì)菌性病原增多,除以上兩種菌外,還有化膿隱秘桿菌、昏睡嗜血桿菌等。國內(nèi)關(guān)最常見的混合感染細(xì)菌有多殺性巴氏桿菌、化膿隱秘桿菌和溶血曼氏桿菌,但出現(xiàn)比例低于20%。

常見的混合感染病毒有牛皰疹病 毒1型(bovine herpesvirus-l,BHV-l )或牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV)、牛副流感病毒3型(PIV-3)、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、牛呼吸道合胞體病毒(BRSV)、牛冠狀病毒(bovine coronavirus)和牛呼腸孤病毒(bovine reovirus)等。這些病毒可誘導(dǎo)免疫抑制,促使細(xì)菌性病原增殖并下行至肺,引致肺炎。

我國有零星報道證實曾從患呼吸性疾病的臨床病例中分離到牛副流感病毒3型、牛皰疹病毒I型、牛病毒性腹瀉病毒和牛呼吸道合胞體病毒,但缺少病原學(xué)群體流行證據(jù),尚不能確定這些病毒在我國牛呼吸疾病綜合癥中的作用。

異地運輸、飼養(yǎng)方式、環(huán)境條件改變等應(yīng)激因素是牛支原體肺炎的誘發(fā)因素,同時牛支原體感染對機(jī)體免疫系統(tǒng)造成極大的破壞作用,也進(jìn)一步促進(jìn)繼發(fā)感染或混合感染的病原微生物的致病作用。除細(xì)菌和病毒的混合感染外,血孢子蟲感染可能對牛支原體肺炎的發(fā)生也有促進(jìn)作用。

五、牛支原體肺炎的臨床癥狀與病理變化

發(fā)病初期體溫升高至42℃左右,病牛精神沉郁,食欲減退,咳嗽,氣喘,清晨及半夜或氣溫轉(zhuǎn)涼時咳嗽劇烈,有清亮或膿性鼻汁,嚴(yán)重者食欲廢絕,病程稍長時患牛明顯消瘦,被毛粗亂無光；有的患牛繼發(fā)腹瀉,糞水樣或帶血；有的患牛繼發(fā)關(guān)節(jié)炎,表現(xiàn)跛行、關(guān)節(jié)膿腫等癥狀；也有病牛繼發(fā)結(jié)膜炎,眼結(jié)膜潮紅,有大量漿液性或膿性分泌物。嚴(yán)重者出現(xiàn)死亡,犢牛病情相對嚴(yán)重,死亡率可達(dá)50%。

剖檢病理變化主要集中在胸腔與肺部。肺和胸膜發(fā)生不同程度粘連,有少量積液;心包積水,液體黃色澄清；肺發(fā)生不同程度的病變,可能與病程及機(jī)體抵抗力有關(guān)。輕者可見肺尖葉、心葉及部分膈葉的局部紅色肉變,或同時有化膿灶散在分布；嚴(yán)重者可見肺部廣泛分布有干酪樣或化膿性壞死灶。病理組織學(xué)觀察可見支氣管肺炎或化膿性壞死性肺炎,或凝固性壞死性肺炎。

六.牛支原體病的診斷方法

目前,國內(nèi)外牛支原體病的確診方法主要集中在病原體的分離鑒定和基因診斷兩個方面。

1.牛支原體的分離鑒定。盡管牛支原體可存在于健康牛體內(nèi),作者在國內(nèi)牛群的病原學(xué)研究中發(fā)現(xiàn),健康牛很少排菌,肺組織中更難分到牛支原體。按照無菌操作規(guī)程將小塊組織樣本涂于含類胸膜肺炎微生物(PPLO)和適當(dāng)抗生素的固體培養(yǎng)基表面,于含5%的CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng),同時將小塊組織樣本投入到PPLO液體培養(yǎng)基中。2～3天后在光學(xué)顯微鏡低倍觀察菌落形態(tài),支原體菌落應(yīng)具有“煎蛋樣”典型特征,液體培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色且透亮,通過配套的生化實驗可以對牛支原體進(jìn)行初步鑒定。病變肺組織的分離成功率很高,鼻拭子分離率相對低。鑒定該法費時長,靈敏性低,不能做為早期快速診斷方法。

2.牛支原體基因檢測。牛支原體基因檢測方法主要是PCR方法,擴(kuò)增牛支原體16S rRNA并測序鑒定可進(jìn)行診斷,但由于牛支原體和牛無乳支原體有很高的同源性,該方法不能區(qū)分牛支原體和牛無乳支原體。

用于PCR檢測的另一靶基因為uvrC基因或DNA聚合酶III基因,該基因在牛支原體保守，但可區(qū)分牛支原體及牛無乳支原體感染,是臨床上常用的一種檢測方法。

3.牛支原體血清學(xué)診斷。牛支原體感染牛后,其脂質(zhì)及蛋白抗原能激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng),血清中牛支原體抗體可以持續(xù)存在幾個月,故血清學(xué)檢測被認(rèn)為是診斷牛支原體感染的手段之一。但由于牛支原體持續(xù)感染較普遍,抗體陽性率普遍較高。近牛來,牛支原體基因組序列被解析,基于基因組序列信息建立的新型診斷方法有望提高檢測靈敏度。

七、牛支原體疫苗

由于牛支原體已對世界養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失,藥物治療效果差,疫苗研究受到重點關(guān)注。但目前除美國外,幾乎沒有商業(yè)化疫苗用于牛支原體病的預(yù)防。美國雖有兩種商業(yè)化疫苗用于乳腺炎防治, 但未見公開發(fā)表的證據(jù)確認(rèn)疫苗的有效性。目前所用的其它種類支原體疫苗也都是全細(xì)胞疫苗,包括滅活疫苗或部分致弱的活疫苗,基本上都只能提供暫時或部分保護(hù),且常具有較嚴(yán)重的副作用。有報道研究者通過將牛支原體體外傳代成功致弱牛支原體,有望將其開發(fā)為弱毒疫苗。

八、綜合防治措施

（一）加強(qiáng)牛群引進(jìn)管理不從疫區(qū)或發(fā)病區(qū)引進(jìn)牛,緊持就近原則和產(chǎn)地購牛原則,減少交易環(huán)節(jié)。牛群引進(jìn)前應(yīng)做好檢疫檢測,防止引進(jìn)病?；蛱幱跐摲腥酒诘膸Ь！ｎA(yù)防接種應(yīng)在產(chǎn)地完成。牛群引進(jìn)后應(yīng)進(jìn)行隔離觀察,確保無病后方可與健康?；烊?。育肥牛群采用全進(jìn)全出制度,在空欄期要對牛舍進(jìn)行徹底消毒。

（二）加強(qiáng)牛只的飼養(yǎng)管理保持牛舍通風(fēng)良好、清潔、干燥。牛群密度適當(dāng),避免過度擁擠。不同年齡及不同來源的牛應(yīng)分開飼養(yǎng)。適當(dāng)補(bǔ)充精料與維生素及礦物元素,保證日糧的全價營養(yǎng)。確保犢牛至少在運輸前30天斷奶,并已適應(yīng)粗飼料與精飼料喂養(yǎng)。定期消毒牛舍,及時發(fā)現(xiàn)與隔離病牛,盡早診斷與治療。

（三）已發(fā)病牛群的疫病控制與治療措施“早診斷,早治療”是有效控制本病的基本原則。早期應(yīng)用抗生素治療牛支原體病有一定效果,但應(yīng)保持足夠用藥量和用藥效程。據(jù)反映,肉牛抵達(dá)育肥場后即用抗生素進(jìn)行全群治療,能顯著降低發(fā)病率。實驗室藥敏試驗結(jié)果證實牛支原體的敏感抗生素有四環(huán)素類、替米考星或壯觀霉素等。牛支原體對喹諾酮類藥物如環(huán)丙沙星、泰樂菌素類藥物也敏感。