楊龍華，薛 琦

(山東省青島市藥品檢驗(yàn)所，山東 青島 266071)

多維生素糖漿(樂(lè)唯多，Alvityl Syrup)是含有維生素A棕櫚酸酯(VitA)、鹽酸硫胺(VitB1)、核黃素-5'-磷酸鈉、右泛醇、鹽酸吡多辛(VitB6)、氰鈷胺(VitB12)、抗壞血酸(VitC)、膽骨化醇(VitD3)、d1-α-生育酚醋酸酯(VitE)、生物素(VitH)、煙酰胺(VitPP)的復(fù)方制劑，以山梨酸作為防腐劑，臨床主要用于防治兒童維生素缺乏癥。多維生素糖漿中維生素成分較多、含量較低且干擾雜質(zhì)多，難以同時(shí)測(cè)定各組分含量。已有文獻(xiàn)報(bào)道了糖漿劑中3種B族維生素和山梨酸同時(shí)測(cè)定的方法[1]。由于樂(lè)唯多糖漿中維生素的種類和成分較多，分析方法繁雜，故在上述文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行深入試驗(yàn)，期望能夠同時(shí)測(cè)定樂(lè)唯多糖漿中更多的成分。將多維生素糖漿直接用純水稀釋后以高效液相色譜-紫外分光光度(HPLC-UV)法同時(shí)測(cè)定其中 VitC，VitPP，VitB1，VitB6，核黃素 -5'- 磷酸鈉和防腐劑山梨酸的含量。該方法快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可有效控制多維生素糖漿的質(zhì)量;在工業(yè)化生產(chǎn)和進(jìn)口藥品檢驗(yàn)中，可有效節(jié)約成本，提高藥品檢驗(yàn)工作的效率?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-2010C型高效液相色譜-紫外儀，Class VP色譜工作站?？箟难?VitC，批號(hào)為0604-05)，煙酰胺(VitPP，批號(hào)為0604-04)，鹽酸硫胺(VitB1，批號(hào)為 0607-26)，核黃素 -5'-磷酸鈉(批號(hào)為 R0603-26)，鹽酸吡多辛(VitB6，批號(hào)為 0607-20)，山梨酸(批號(hào)為0607-22)，以上對(duì)照品均由韓國(guó)永進(jìn)藥品有限公司提供;多維生素糖漿(批號(hào)分別為06004，06005，06006，韓國(guó)永進(jìn)藥品有限公司);甲醇為色譜純，水為超純水，己烷磺酸鈉、三乙胺、醋酸均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Allthna C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:A為0.01 mol/L己烷磺酸鈉溶液(1 000 mL溶液加入三乙胺0.25 mL和醋酸9.5 mL)，B為甲醇，按表1進(jìn)行梯度洗脫;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.2 溶液制備

精密稱取 VitC對(duì)照品 102.23 mg(99.6%)、VitPP對(duì)照品51.67 mg(99.6%)、VitB1對(duì)照品 20.80 mg(95.6%)、核黃素 -5'-磷酸鈉對(duì)照品19.09 mg(100%)、VitB6對(duì)照品14.21 mg(99.2%)和山梨酸對(duì)照品58.35 mg(99.7%)，分別置10 mL量瓶中，均加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到VitC(10.182 1 g/L)、VitPP(5.146 3 g/L)、VitB1(1.988 5 g/L)、核 黃 素 -5'-磷 酸 鈉 (1.909 0 g/L)、VitB6(1.409 6g/L)和山梨酸(5.8175g/L)各對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。分別量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加水制成每1 mL中約含VitC 1 mg、VitPP 0.5 mg、VitB10.1 mg、核黃素 -5'- 磷酸鈉 0.1 mg、VitB60.03 mg和山梨酸0.15 mg的混合對(duì)照品溶液。精密量取多維生素糖漿樣品(批號(hào)為06006)10mL，置50mL量瓶中，用水洗出移液管內(nèi)的附著液并入量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按多維生素糖漿處方比例制備不含VitC，VitPP，VitB1，核黃素-5'-磷酸鈉，VitB6和山梨酸的樣品，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，用水洗出移液管內(nèi)的附著液并入量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):將混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液按上述色譜條件分析，記錄色譜圖(見(jiàn)圖1)。結(jié)果6種組分與相鄰色譜峰分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于2 000，處方中無(wú)雜質(zhì)干擾6種組分的測(cè)定。

線性關(guān)系考察:分別量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液各適量，分別置同一10 mL量瓶中，加水制成質(zhì)量濃度約為VitC 0.15，0.3，1，1.5，2.0 g/L、VitPP 0.1，0.25，0.5，0.8，1.0 g/L、VitB1和核黃素 -5'-磷酸鈉 0.02，0.05，0.1，0.2，0.4 g/L，VitB60.007，0.015，0.03，0.06，0.1 g/L 及山梨酸 0.03，0.07，0.15，0.3，0.6 g/L 的5份混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，精密量取各溶液10 μL，按上述色譜條件分析，記錄色譜圖，以峰面積 A對(duì)各溶液質(zhì)量濃度 C(g/L)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果

精密度試驗(yàn):取同一混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果VitC，VitPP，VitB1、核黃素-5'-磷酸鈉、VitB6、山梨酸色譜峰面積的 RSD分別為0.32%，0.10%，0.08%，0.18%，0.06%，0.11%(n=6)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0，2，4，8，12，24，36，48 h 時(shí)測(cè)定峰面積。結(jié)果 VitC，VitPP，VitB1、核黃素-5'-磷酸鈉、VitB6、山梨酸峰面積的 RSD分別為 0.5%，0.3%，0.2%，0.5%，0.2%，0.1%(n=8)，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):采用加樣回收法。精密稱取各對(duì)照品適量，VitC 333.92 mg，VitPP 166.73 mg，VitB170.86 mg，核黃素 -5'- 磷酸鈉67.59 mg，VitB617.02 mg和山梨酸99.85 mg，置同一50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取該混合溶液1.5，3.0，6.0 mL各3份，分別置9個(gè)50 mL量瓶中，再向各量瓶中精密加入已知含量的多維生素糖漿樣品10 mL(批號(hào)為06004)，用水洗出移液管內(nèi)的附著液并入量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。依法進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算平均回收率。結(jié)果 VitC，VitPP，VitB1、核黃素-5'-磷酸鈉、Vit B6、山梨酸的平均回收率分別為99.9%，98.4%，99.4%，100.9%，100.4%，100.3%，RSD分別為 0.5%，0.6%，0.4%，0.9%，1.0%，0.8%(n=9)，表明方法回收率符合測(cè)定要求，方法可行。

2.4 樣品含量測(cè)定

取多維生素糖漿(樂(lè)唯多)3批，依法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;將供試品溶液的峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算各成分濃度及含量。根據(jù)該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，VitC，VitPP，VitB1、核黃素 -5'-磷酸鈉、VitB6的含量均應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～150.0%，山梨酸的含量應(yīng)不超過(guò)標(biāo)示量的100.0%。3批樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果(標(biāo)示量的%)

3 討論

VitC和VitPP均為水溶性維生素，極性較大，在C18柱上保留較弱。在文獻(xiàn)[1]的基礎(chǔ)上，通過(guò)增大流動(dòng)相中離子對(duì)試劑己烷磺酸鈉溶液的濃度、改變流動(dòng)相的梯度以及提高柱溫，使各相鄰色譜峰達(dá)到良好分離。綜合考慮各組分色譜峰保留時(shí)間和分離度，發(fā)現(xiàn)采用文中的色譜系統(tǒng)，各成分色譜峰保留時(shí)間適宜、分離度高、峰形良好、重現(xiàn)性好。將樣品以純水稀釋后，采用HPLC-UV法進(jìn)行分析，操作簡(jiǎn)單，可使這5種維生素和防腐劑同時(shí)得到準(zhǔn)確測(cè)定。因此，本方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可作為多維生素糖漿(樂(lè)唯多)的質(zhì)量控制項(xiàng)目之一。

[1]楊龍華，薛 琦，盧京光.HPLC法同時(shí)測(cè)定糖漿劑中三種B族維生素及山梨酸的含量[J].齊魯藥事，2010，29(6):343-345.