于 艷,張安玲

(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科,吉林吉林市132011;2.吉林大學(xué)第四醫(yī)院口腔科)

口腔鱗狀細(xì)胞癌其患病率和死亡率較高,而浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是造成其不良預(yù)后的主要因素,早期診斷非常重要。研究表明[1],基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。本研究對(duì)50例口腔鱗癌中MMP-2表達(dá)進(jìn)行研究,為臨床早期診斷提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 一般資料

收集2008年1月至2010年1月在吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科手術(shù)切除經(jīng)病理診斷確診的口腔鱗狀細(xì)胞癌歸檔蠟塊50例,男28例,女22例,具有完整的病史、病理數(shù)據(jù),術(shù)前均未接受過放化療治療?；颊吣挲g38-80歲,平均年齡45.5歲。經(jīng)頸淋巴結(jié)清掃術(shù)證實(shí)伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例;按TNM分期,Ⅰ+Ⅱ期患者20例,Ⅲ+Ⅳ期患者30例。鱗癌分化程度:低分化10例,中分化25例,高分化15例。正?？谇火つそM織標(biāo)本20例做對(duì)照(經(jīng)H E染色證實(shí))。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將10%福爾馬林固定、石蠟包埋的組織蠟塊進(jìn)行常規(guī)切片,經(jīng)免疫組化染色,石蠟切片脫蠟水化,根據(jù)每一種抗體的要求,對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。將切片浸入0.01 M(pH6.0)枸櫞酸鹽緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10 min后,反復(fù)1-2次,冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。用已知的陽(yáng)性的口腔癌切片作陽(yáng)性對(duì)照,用已知的陰性的口腔癌切片作陰性對(duì)照,以PBS緩沖液代替一抗作空白對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

由兩位病理醫(yī)師對(duì)免疫組化染色分別進(jìn)行半定量計(jì)數(shù)。MMP-2蛋白的陽(yáng)性結(jié)果判定:MMP-2蛋白主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞膜或胞漿,呈棕黃色顆粒,以染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞的百分比乘積作為半定量標(biāo)準(zhǔn)[2]。染色強(qiáng)度:未著色0分,淡黃色1分,棕黃色2分,棕褐色3分;陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)＜5%為0分,5%-25%為1分,26%-50%為2分,＞50%為3分,二者乘積＞l視為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析,口腔鱗癌MMP-2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系采用 χ2檢驗(yàn),統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)以P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

MMP-2在口腔鱗癌組織中呈高表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)率為66.00%,口腔正常黏膜組織的陽(yáng)性表達(dá)率為25.00%,二者相比有顯著差異(P＜0.01);腫瘤不同分化程度間MMP-2表達(dá)率無(wú)顯著性差異(P＞0.05);在TNMⅠ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期的表達(dá)率無(wú)顯著性差異(P＞0.05);MMP-2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率相比有顯著性差異(P＜0.05)。(詳見表1)。

表1 MMP-2在口腔鱗癌中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

3 討論

口腔鱗狀細(xì)胞癌的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段、多水平、多因素的過程,關(guān)鍵是降解腫瘤周圍的基質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明[3],瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力與其誘導(dǎo)產(chǎn)生蛋白酶、降解細(xì)胞外基質(zhì)、基底膜的能力密切相關(guān)。首先是腫瘤細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜,其主要步驟包括瘤細(xì)胞穿過ECM屏障、血管壁的基底膜及穿出血管壁進(jìn)入宿主微循環(huán)。對(duì)ECM的降解必須有蛋白水解酶的激活和參與,ECM降解酶主要分為三大類[4]:絲蛋白酶、半胱氨酸酶、MMPs,其中MMPs是近年來(lái)在研究細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解平衡的一組酶,幾乎能降解細(xì)胞外所有成分 ,在轉(zhuǎn)移癌中明顯高表達(dá)?；|(zhì)金屬蛋白-2(MMP-2)基因位于人類染色體16q21,由13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子組成,結(jié)構(gòu)基因總長(zhǎng)度為27kb,MMP-2是一種非糖化的明膠酶,分子量為72 KD,屬于膜型基質(zhì)金屬蛋白酶類,是MMPs家族中的一個(gè)亞家族。在腫瘤細(xì)胞侵襲過程中,活化的MMP-2是定位細(xì)胞穿透基質(zhì)的突出部位,具有“鉆頭”樣作用[5]。存在于腫瘤細(xì)胞表面的MMP-2能使這些腫瘤細(xì)胞降解其下面的基底膜,穿透基質(zhì)并發(fā)生轉(zhuǎn)移。大量實(shí)驗(yàn)證明[6]MMP-2在人類多數(shù)腫瘤組織及其轉(zhuǎn)移灶中高度表達(dá),并且在癌細(xì)胞脫落、游走、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過程中起著相當(dāng)重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)口腔鱗癌織中MMP-2表達(dá)率66.00%,顯著高于正常口腔黏膜組織,癌巢周圍的腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)水平更高,說明癌巢周邊的腫瘤細(xì)胞可以分泌更多的MMP-2。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示,在口腔鱗癌組織中MMP-2高表達(dá)與口腔鱗癌病理分級(jí)和臨床分期無(wú)關(guān),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組中,MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,提示MMP-2在口腔鱗癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移可能起著促進(jìn)作用。

綜上所述,基質(zhì)金屬蛋白-2與口腔鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,已為我們認(rèn)識(shí)腫瘤進(jìn)程的機(jī)理提供了有力的依據(jù),隨著這一領(lǐng)域研究的深入,將為臨床腫瘤的診斷預(yù)防提供可信的指標(biāo),也為臨床治療腫瘤提供新的策略與方向,為口腔鱗癌早期診斷、治療及預(yù)后的評(píng)價(jià)提供重要的幫助。

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