王麗麗,王立群,高 歌

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林長(zhǎng)春130033)

本文通過(guò)檢測(cè)原發(fā)性肝癌(PHC)、肝硬化(LC)和正常對(duì)照組血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3)蛋白,探討血清Glypican-3檢測(cè)能否作為滿意的PHC腫瘤標(biāo)記物以及與AFP聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值,為今后PHC早期臨床診斷提供一些幫助。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 2006年 3月-2008年3月,門診和住院收治的PHC患者共64例為肝癌組,其中男54例,女10例。年齡24-81歲,平均58.06±12.13歲。所有的PHC患者的診斷符合2001年9月中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)修訂的《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》,且經(jīng)病理證實(shí)。其中Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為6例(9.38%)、28例(43.75%)、26例(40.63%)、4例(6.25%);伴門脈癌栓26例(40.63%);腫瘤直徑≥5 者 28例(43.75%);癌結(jié)節(jié) 2個(gè)以上者24例(37.5%);肝功能狀況采用Child-pugh分級(jí)法:A級(jí)22例(34.38%)、B級(jí) 14例(21.88%)、C級(jí) 28例(12.50%)。肝硬化組選取同期收治的LC患者共63例,其中男45例,女18例。年齡24-80歲,平均53.92±11.67歲。診斷符合2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)西安會(huì)議修訂的《病毒性肝炎防治方案》標(biāo)準(zhǔn)。健康對(duì)照組為健康體檢者共54例,其中男41例,女13例。年齡35-79歲,平均54.17±12.67歲。三組患者在性別、年齡等一般資料比較無(wú)顯著性差異。

1.2 標(biāo)本采集

所有患者留取清晨空腹12小時(shí)肘靜脈血3 ml共兩管,即刻于 4℃、3 000 r/ml離心15 min,分離血清0.5-1 ml置Ependorff管分裝,-20℃冰箱中冰凍待用,全部標(biāo)本于實(shí)驗(yàn)時(shí)一批測(cè)定。

1.3 主要試劑及儀器

Glypican-3應(yīng)用美國(guó)寶特公司生產(chǎn)的ELX-800全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè),試劑盒購(gòu)自美國(guó)ADL公司。AFP應(yīng)用美國(guó)雅培公司生產(chǎn)的AXSYM全自動(dòng)免疫分析儀,試劑盒購(gòu)自美國(guó)雅培公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

Glypican-3采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)。AFP采用微粒子酶免化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 結(jié)果判斷

腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)分別以試劑盒推薦的臨界參考值數(shù)值為準(zhǔn)。Glypican-3＞80 ng/ml為陽(yáng)性;AFP ＞20 μ g/ml為陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,GPC3、AFP檢測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x—±s)表示,陽(yáng)性率的比較用 χ2檢驗(yàn),PHC與對(duì)照組組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)性肝癌、肝硬化組及正常對(duì)照組血清GPC3、AFP 檢測(cè)結(jié)果

見(jiàn)表1。

表1 三組GPC3、AFP檢測(cè)結(jié)果(±s)

表1 三組GPC3、AFP檢測(cè)結(jié)果(±s)

★與對(duì)照組比較 P＜0.01;※與LC組比較 P＜0.01

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2.2 GPC3、AFP在PHC中的檢出率比較

見(jiàn)表2。

表2 GPC3、AFP在三組中檢測(cè)陽(yáng)性率的比較

2.3 不同臨床參數(shù)的外周血GPC3的表達(dá)

將64例PHC患者按性別、年齡、臨床TNM分期、腫瘤直徑、癌結(jié)節(jié)數(shù)目、有無(wú)門脈癌栓及肝功能分級(jí)分組,其血清GPC3陽(yáng)性檢測(cè)率見(jiàn)表3。

64例PHC 患者中AFP陰性的(AFP＜20 μ g/ml)患者數(shù)為17例,其中有13例GPC3為陽(yáng)性,占AFP陰性數(shù)的76.47%。在AFP陽(yáng)性與陰性不同表達(dá)時(shí)GPC3陽(yáng)性率的比較,差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。血清AFP ＞200μ g/ml組(21/28,75.00%)與血清 AFP20-200 μ g/ml組(14/19,73.68%)的 PHC患者外周血GPC3檢出率與血清AFP＜20 μ g/ml組比較,差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)。

表3 不同臨床參數(shù)的患者外周血GPC3的表達(dá)

2.4 GPC3與AFP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PHC診斷價(jià)值

單項(xiàng)檢測(cè)GPC3的敏感性為75.00%,特異性為100%,漏診率為25.00%,AFP的敏感性為73.43%,特異性為92.16%,漏診率為26.57%。兩者比較,差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。二者聯(lián)合檢測(cè),可使敏感性提高到93.75%,漏診率降至6.25%,與GPC3、AFP單獨(dú)檢測(cè)相比,差異有顯著性(P＜0.05)。見(jiàn)表4。

表4 GPC3與AFP聯(lián)檢對(duì)PHC診斷價(jià)值的比較

3 討論

原發(fā)性肝癌(PHC)是一種常見(jiàn)、多發(fā)、死亡率高的惡性腫瘤之一。目前PHC的診斷主要依靠影像學(xué)的發(fā)現(xiàn)和血清腫瘤標(biāo)志物(TM)的檢測(cè)。PHC標(biāo)志物分析有助于PHC早期診斷、療效觀察、術(shù)后隨訪及復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移監(jiān)測(cè),為早期診斷惡性腫瘤提供特異的科學(xué)依據(jù)。因此,希望找到一種特異性強(qiáng),敏感度高的TM。由于腫瘤標(biāo)志物只有相對(duì)特異性,大多數(shù)項(xiàng)目缺乏定位診斷價(jià)值,單一的腫瘤標(biāo)志物作為診斷PHC的指標(biāo)均有不同程度的局限性。

Capurro和Nakatsura等[1,2]在應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)到PHC患者血清中的Glypican-3,發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率高,capurro報(bào)道的陽(yáng)性有 53%(18/34),Nakatsura報(bào)道有40%(16/40),而在肝炎合并肝硬化患者血清中Capurro檢測(cè)到1例陽(yáng)性(共20例),正常人血清中未檢測(cè)到。Yamauchi等[3]進(jìn)一步證實(shí)了Glypican-3在PHC組織中的表達(dá)同基因水平相一致,在非癌肝組織中同樣沒(méi)有表達(dá)或表達(dá)量極低。這與本試驗(yàn)得出的結(jié)論相一致。而Capurro在肝炎合并肝硬化患者血清中檢測(cè)到1例陽(yáng)性,在隨訪時(shí)發(fā)現(xiàn)該患者發(fā)展為PHC,說(shuō)明Glypican-3可用于PHC的早期診斷,有助于鑒別良、惡性肝病。因此,蛋白印跡、酶聯(lián)免疫吸附法研究表明Glypican-3是一個(gè)良好的PHC 血清學(xué)標(biāo)記物[1、2、4]。

Capurro M[2]和Filmus J[5]分別分析比較了PHC病人血清中Glypican-3和AFP的表達(dá),結(jié)果顯示在同一患者血清中兩者的表達(dá)沒(méi)有相關(guān)性,Glypican-3mRNA在小肝癌檢出率明顯比AFPmRNA和血清中的AFP高[6]。研究表明,Glypican-3在AFP陰性的PHC中有較高的表達(dá)[7],與我們的結(jié)果相一致,提示Glypican-3可提高AFP陰性PHC患者的診斷率。

我們的研究結(jié)果顯示:Glypican-3蛋白表達(dá)與病理分級(jí)有顯著相關(guān)性(P＜0.05),而與腫瘤直徑無(wú)明顯相關(guān)性,這與國(guó)外報(bào)道相一致[8],提示Glypican-3蛋白作為一個(gè)特異性的腫瘤標(biāo)記物,可能在細(xì)胞癌變的初始即有穩(wěn)定的表達(dá),發(fā)生于PHC的早期,檢測(cè)血液中的Glypican-3的表達(dá)對(duì)于預(yù)測(cè)腫瘤的惡性程度、病情輕重及預(yù)后有重要價(jià)值。由此我們認(rèn)為檢測(cè)Glypican-3可作為診斷PHC的腫瘤特異性標(biāo)志物。

本實(shí)驗(yàn)單獨(dú)檢測(cè)Glypican-3的敏感性為75.0%,漏診率為25.0%,AFP的敏感性為73.4%,漏診率為26.6%。兩者比較,無(wú)顯著性差異。表明Glypican-3與AFP在PHC中表達(dá)無(wú)相關(guān)性。AFP陰性PHC患者血清有較高的Glypican-3檢出率。Glypican-3對(duì)AFP陰性及低濃度的原發(fā)性肝癌的篩選均有一定的臨床診斷和鑒別診斷價(jià)值,有助于提高原發(fā)性肝癌的早期診斷率,減少漏診。二者聯(lián)合檢測(cè),可使敏感性提高到93.8%,漏診率降至6.2%,我們認(rèn)為若采用Glypican-3作為PHC血清標(biāo)志物與AFP聯(lián)合檢測(cè)用于臨床,可更進(jìn)一步提高PHC診斷的陽(yáng)性率,尤其是AFP陰性患者的診斷率。Glypican-3、AFP可以起到較好的互補(bǔ)作用,是解決AFP假陽(yáng)性和假陰性問(wèn)題的有效途徑,是PHC血清學(xué)診斷方法發(fā)展的必然趨勢(shì)。特別是在當(dāng)前國(guó)內(nèi)PHC有上升趨勢(shì),早期、快速、準(zhǔn)確的篩查發(fā)現(xiàn)PHC,這一方法具有重要價(jià)值。

為了提高PHC的診斷靈敏度、準(zhǔn)確性和鑒別診斷價(jià)值,減少漏診率,建議采用Glypican-3、AFP聯(lián)合檢測(cè)。

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