黃小琪,陳松林,林英輝*,陳 晶,熊 彪

(1.廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院a.分子生物學(xué)實驗室;b.檢驗科,廣西 南寧530023;2.欽州市第一人民醫(yī)院檢驗科)

到目前為止,研究人員廣泛認為結(jié)核性胸膜炎的診斷與鑒別診斷是臨床難題之一[1]。目前的免疫學(xué)研究發(fā)現(xiàn),結(jié)核性胸膜炎患者常存在Th1/Th2免疫失衡,主要表現(xiàn)為Th1型細胞免疫功能低下,但是對于最新發(fā)現(xiàn)的Th17細胞是如何參與結(jié)核性胸膜炎的免疫反應(yīng),本研究從Th17細胞入手,探討其與結(jié)核性胸膜炎的診斷之間的相互關(guān)系,以期建立更為靈敏,特異的臨床診斷方法。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇住院2009年10月-2010年10月之間,入院治療的初次結(jié)核性胸膜炎患者30例,均經(jīng)臨床癥狀診斷,X光診斷、CT診斷以及病原學(xué)檢查確診,符合全國結(jié)核病分類與診斷標準[2]。在所有入選病例中,首先需要經(jīng)過如下的入選標準選擇:無臟器合并癥狀,無其它感染,無免疫相關(guān)性或免疫缺陷性疾病,入院近3個月內(nèi)未用過激素及免疫抑制劑。所有入選病例中,男性20例,女性10例,年齡21歲-50歲,平均(42.8±9.4)歲。疾病對照組選擇同期住院治療的非結(jié)核性胸膜炎患者20例,排除結(jié)核病患者。其中男性13例,女性7例,年齡34歲-64歲,平均(52.4±11.5)歲。選擇同期于我院體檢診斷健康的體檢人員20例為正常對照組,其中男11例,女9例;年齡23歲-52歲,平均(39.2±8.6)歲。

1.2 方法 所有結(jié)核性胸膜炎患者均接受正規(guī)抗結(jié)核化療,并于入院時和經(jīng)過治療,癥狀緩解后抽取清晨空腹靜脈血5 mL和胸水10 mL(正常對照人群只抽取靜脈血)。非結(jié)核性胸膜炎患者入院時抽取清晨空腹靜脈血5 mL和胸水10 mL。胸水與靜脈血以3 000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心 15分鐘(Eppendoff 5417-R離心機),分離胸水上清液和血清后,將其中含有的細胞用PBS稀釋,常規(guī)密度梯度離心法分離其中含有的細胞。使用RPMI 1640培養(yǎng)液(加上5%FCS)在24孔板中培養(yǎng)細胞。同時加入刺激因子PMA 15 μ g/L,以及蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑BFA(10 mg/L),用以抑制免疫因子的分泌,使其聚集在細胞內(nèi)部,便于其后的檢查。陰性對照則選取不加刺激劑的細胞,混勻后將細胞置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.3 流式細胞檢測 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6小時后,收集細胞,加入FITC-CD 4抗體,室溫避光孵育30分鐘,以選擇CD4+的細胞群落。之后PBS清洗3次。加入固定液繼續(xù)室溫避光孵育20min。然后加入破膜劑緩沖液洗滌3次。加入打孔緩沖液進行細胞破膜打孔,同時加入PE-IL-17A抗體,室溫避光孵育30 min。最后用破膜劑緩沖液洗滌后上機檢測。對照管中加入相應(yīng)的同型對照抗體。應(yīng)用貝克曼公司EPI-CS XL型流式細胞儀進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理,兩組之間差異比較采用t檢驗,多組差異比較采用單因素方差分析檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

見表1,2。

表1 三組人群外周血血清和胸水中的Th17細胞含量(%CD4+T細胞)

表2 結(jié)核性胸膜炎患者入院時和治療后,其外周血血清和胸水中Th17細胞含量(%CD4+T細胞)

3 討論

Th17細胞是新近被發(fā)現(xiàn)的一種新型的CD4陽性免疫細胞,由天然T細胞前體細胞和T0細胞分化而來,具有獨立的調(diào)節(jié)機制,并特異性產(chǎn)生IL-17效應(yīng)因子,因此在機體防御性的免疫反應(yīng)中具有獨特而重要的意義。Th17細胞通過產(chǎn)生IL-17從而與靶細胞的IL-17受體(IL-17R)結(jié)合并發(fā)揮功能,可以動員和富集中性粒細胞,具有促炎癥性質(zhì),并可以有效地介導(dǎo)病變組織的炎癥反應(yīng)[3-5]。在動物模型中人們證實IL-17可以促進炎癥因子IL-6和TNF-α的合成,因此人們提出以分泌IL-17為主的Th17細胞在某些炎癥反應(yīng)性疾病的發(fā)病中具有比Th1/Th2更重要的作用[6,7]。

在本研究中,我們發(fā)現(xiàn),對于結(jié)核性胸膜炎的患者來說,其外周血和胸水中的Th17細胞含量都要顯著高于正常人群,也要明顯高于非結(jié)核性胸膜炎患者。該結(jié)果提示,Th17細胞可能特異性的參與到了結(jié)核性胸膜炎的發(fā)病過程中,至少在結(jié)核性胸膜炎中,Th17細胞可能有自己特殊的作用。而進一步的研究我們發(fā)現(xiàn),經(jīng)過治療之后,隨著患者的病情出現(xiàn)好轉(zhuǎn),Th17細胞的含量也出現(xiàn)了下降,這些結(jié)果說明Th17細胞可能全程參與到了結(jié)核性胸膜炎的發(fā)病過程中,并且可能成為其診斷的重要依據(jù)。

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