王 爽,齊 玲,金 宏,張以忠,曹志友

(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院 實(shí)驗(yàn)中心,吉林 吉林市132013;2.吉林醫(yī)藥學(xué)院直屬醫(yī)院)

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)在腫瘤的免疫監(jiān)視中起到一定作用。rhTRAIL可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。研究表明,大多數(shù)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株對(duì)TRAIL抵抗[1],因此,我們研究化療藥物與TRAIL聯(lián)合作用對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞 非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞株由吉林醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 主要試劑 rhTRAIL(Peprotech公司),RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清(GIBCO公司),順鉑、放線菌素D及對(duì)硝基苯(上海生物工程技術(shù)公司)。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) 復(fù)蘇A549細(xì)胞,用含10%血清的RPMI 1640培養(yǎng)液,置于培養(yǎng)箱中,37℃,5%CO2,飽和濕度下培養(yǎng),隔日換液,1∶3傳代。

1.3.2 TRAIL聯(lián)合化療藥物對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響 細(xì)胞融合至85%,胰酶消化,計(jì)數(shù)活細(xì)胞,以每孔8×103個(gè)細(xì)胞接種于 96孔板中,培養(yǎng)24 h,將細(xì)胞分為4組,分別加入TRAIL 100 ng/ml,TRAIL 100 ng/ml與順鉑10 μ g/ml,TRAIL 100ng/ml與放線菌素D10 ng/ml聯(lián)合,對(duì)照組使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基。作用24 h后,小心棄上清,PBS洗去培養(yǎng)基,每孔加入酸性磷酸酶底物檢測(cè)溶液(用對(duì)硝基苯新鮮配制)100 μ l,繼續(xù)培養(yǎng)90 min,加入終止液,室溫下孵育5 min。酶標(biāo)儀405 nm處測(cè)定各孔光吸收值。

2 結(jié)果

A549細(xì)胞經(jīng)TRAIL作用后,測(cè)定結(jié)果為0.47±0.02,TRAIL與放線菌素D聯(lián)合作用結(jié)果為0.36±0.02,TRAIL與順鉑聯(lián)合作用為0.25±0.01,結(jié)果均有顯著性差異(P＜0.01),見表1。

表1 TRAIL與化療藥物作用后A549細(xì)胞增殖情況(±s)

表1 TRAIL與化療藥物作用后A549細(xì)胞增殖情況(±s)

與對(duì)照組相比:*P＜0.01

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3 討論

TRAIL可由體內(nèi)的免疫系統(tǒng)正常表達(dá),它能誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,而對(duì)正常的組織和細(xì)胞無明顯毒性作用[2]。TRAIL凋亡傳導(dǎo)路徑是體內(nèi)天然的抗腫瘤途徑。經(jīng)研究,TRAIL可以誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡[3],在體動(dòng)物研究也表明,rhTRAIL能明顯地抑制小鼠體內(nèi)肺癌細(xì)胞移植瘤的增生,而對(duì)正常的小鼠沒有毒副作用[4]。

化療藥物可以非特異性的與腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞同時(shí)結(jié)合,但化療藥物在應(yīng)用治療量時(shí),也會(huì)引起廣泛的化療副反應(yīng)。最近的研究顯示,非毒性劑量的化療藥物可以增加TRAIL對(duì)腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用[5]。也有一些明顯的證據(jù)表明,TRAIL可以作為治療非小細(xì)胞肺癌的藥物,尤其是與化療藥物聯(lián)合作用時(shí)可以克服TRAIL抵抗作用[6]。

本實(shí)驗(yàn)小組采用A549細(xì)胞株,應(yīng)用TRAIL對(duì)其進(jìn)行處理,并且聯(lián)合順鉑、放線菌素D作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組相比,A549細(xì)胞經(jīng)TRAIL作用,可以發(fā)生凋亡作用,如與順鉑或放線菌素D聯(lián)合作用,細(xì)胞增殖則明顯受抑。說明TRAIL與化療藥物順鉑、放線菌素D聯(lián)合作用后發(fā)生了協(xié)同作用。但TRAIL與化療藥物發(fā)生協(xié)同作用的機(jī)制是什么樣的,還需要進(jìn)一步深入研究討論。

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