蔣玲燕， 李 清， 陳曉輝， 戴榮華， 畢開順

(沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽 110016)

魚腥草為三白草科植物蕺菜Houttuyniae cordataThunb的新鮮全草，又名側(cè)耳根、紫蕺、豬鼻孔、九節(jié)蓮等［1］，廣泛分布于我國西北、華北、華中和長江以南各地，多生于溝邊、溪邊或林下濕地。其新鮮植株破碎后有刺鼻的腥臭味，故稱魚腥草［2-3］。該藥性味辛，微寒，歸肺經(jīng)，具清熱解毒，抗菌，抗炎，抗病毒，增強(qiáng)機(jī)體免疫力以及利尿等藥理作用［4-6］。目前臨床中魚腥草及其制劑主要用于治療上呼吸道感染，肺膿瘍，尿路炎癥及其它部位化膿性炎癥［5］。魚腥草除具有較高的藥用價值，還具有極高的食療價值，在許多地方將其作為野生蔬菜食用，它也可以作為輔料做成各種菜肴［7］，國家衛(wèi)生部確定其為藥食兩用的品種之一。

《中國藥典》2010年版一部魚腥草項下對魚腥草只有鑒別項，無定量測定項［8］。阮桂平等［9-14］均是通過測定單一成分甲基正壬酮的量控制魚腥草藥材質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，單一成分定量測定不能全面反應(yīng)中藥的質(zhì)量控制，建立多指標(biāo)成分測定對中藥質(zhì)量控制具有重要意義，因此本實(shí)驗采用氣相色譜法同時測定魚腥草藥材中的4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮。所建立的方法簡便，準(zhǔn)確，可以作為魚腥草藥材質(zhì)量控制的依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Agilent 6890N氣相色譜儀(Agilent公司);電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司);電子天平(天津市天馬儀器廠);AGBP210S電子天平(德國Satorius公司);揮發(fā)油提取器。

1.2 試劑 甲基正壬酮對照品(批號:118034-200502)和乙酸龍腦酯對照品(批號:110759-200303)購自中國藥品生物制品檢定所。4-萜烯醇對照品和α-松油醇對照品由湖南正清制藥集團(tuán)提供，純度均大于 97%。十一碳烯(純度大于99.5%)購自Fluka公司。正己烷(色譜純)，購自山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司，無水硫酸鈉(分析純)購自天津大茂化學(xué)試劑廠。鮮魚腥草藥材由湖南正清制藥集團(tuán)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:DB-1毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm);程序升溫:70 ℃保持 5 min，以5℃/min上升至140℃，保持5 min，再以20℃/min上升至250℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度280℃(FID);分流比 10 ∶1;進(jìn)樣量 1 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液配制 分別取4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮適量，精密稱定，加正己烷配成 0.990、0.516、8.16、10.40 mg/mL 的貯備液，分別精密量取上述對照品貯備液2、1、1、4 mL置10 mL量瓶中，正己烷定容至刻度，作為混合對照品貯備液，4℃冰箱中保存。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液配制 取十一碳烯適量，精密稱定，加正己烷配成1.988 mg/mL的貯備液，4℃冰箱中保存。

2.2.3 供試品溶液配制 稱取本品50 g，洗凈，剪碎，置圓底燒瓶中，加150 mL水，連接揮發(fā)油測定器。自測定器上端加水充滿刻度部分，加正己烷1 mL，加熱至沸，保持微沸4 h，停止加熱，冷卻至室溫，分取正己烷層，加無水 Na2SO4約0.4 g，除去水分，取上層溶液至10 mL量瓶，精密加入1 mL內(nèi)標(biāo)溶液，正己烷定容，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 專屬性考察 取空白溶劑、對照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下測定，結(jié)果顯示在對照品和內(nèi)標(biāo)保留時間處無雜質(zhì)峰干擾，供試品溶液中其他成分對測量無干擾，表明方法專屬性良好。見圖1。

圖1 空白溶劑(A)，對照溶液(B)和供試品溶液(C)GC色譜圖譜Fig.1 GC chromatograms of blank solution(A)，reference solution(B)，sample solution(C)

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 分別精密量取混合對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.5、1、1.5 mL 置2 mL 量瓶中，精密加入 0.2 mL內(nèi)標(biāo)溶液，正己烷定容，即得系列混合對照品溶液，在上述色譜條件下測定。以對照品與內(nèi)標(biāo)峰面積比(Y)為縱坐標(biāo)，以各對照品濃度(X∶mg/mL)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程見表1。結(jié)果表明4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮分別在 9.90 ～148.5 μg/mL，2.580 ～38.70 μg/mL，40.80 ～612.0 μg/mL，208.0～3 120 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 鮮魚腥草藥材中4種成分的回歸方程Tab.1 Regression equation of four components in Houttuynia cordata

2.3.3 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，測得4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的 RSD 分別為 0.8%，1.7%，0.8%，1.1%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗 分別精密稱取6份同一批號樣品，每份50 g，照2.2.3項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，測得4-萜烯醇，α-松油醇，乙酸龍腦酯，甲基正壬酮的RSD分別為2.4%，1.5%，1.9%，2.3%，結(jié)果表明方法重復(fù)性好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于 0、2、4、8、12、24 h 在上述色譜條件下測定，測得4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮與內(nèi)標(biāo)峰面積比的RSD分別為2.6%、1.7%、1.2%、1.4%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 回收率試驗 稱取已知量的同一批號魚腥草藥材25 g，共6份，分別加入各對照品貯備液適量，照2.2.3項下方法制備溶液，在上述色譜條件下測定，4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮的平均回收率分別為 96.1%、95.5%、97.4%、96.7%，RSD 分別為 1.2%、2.4%、2.4%、2.7%。

2.4 樣品測定 取10批魚腥草藥材，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，計算鮮魚腥草藥材中4種成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表2。

表2 魚腥草藥材4種成分測定結(jié)果 (n=3)Tab.2 Determinnation of four components in Houttuynia cordata (n=3)

3 討論

3.1 分別考察了 HP-5，DB-1，DB-17毛細(xì)管色譜柱，結(jié)果表明采用DB-1色譜柱時分離效果最好，因此選用DB-1毛細(xì)管色譜柱。

3.2 考察了提取時間分別為3，4，5 h時揮發(fā)油的提取量，結(jié)果表明提取4 h和提取5 h提取效率均較高，考慮到節(jié)省時間，故選擇4 h作為提取時間。

3.3 分別考察了加入3倍量，4倍量和5倍量水時揮發(fā)油的提取量，結(jié)果表明加入3倍量水時揮發(fā)油提取最完全。

3.4 實(shí)驗結(jié)果表明不同批次藥材中4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮量差別較大，這可能與藥材的采收時間和用藥部位不同有關(guān)。其中批號為090904的藥材莖葉已有嚴(yán)重干枯萎蔫現(xiàn)象，導(dǎo)致?lián)]發(fā)油量降低，所以在實(shí)驗中未檢測到。

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