張妤琳， 曹 玲， 譚 力， 周 謐

(1.江蘇省食品藥品檢驗所，江蘇 南京 210008;2.江蘇省南通市藥品檢驗所，江蘇南通， 226006)

沉香為蒙醫(yī)和中醫(yī)常用的貴重藥材，始載于 《名醫(yī)別錄》，列為木部上品，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效。沉香臨床上常用于胸腹脹悶疼痛，胃寒嘔吐呃逆，腎虛氣逆喘急，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為有鎮(zhèn)靜，鎮(zhèn)痛，平喘，抑制結(jié)核菌的生長等作用［1-3］。其來源為瑞香科植物沉香Aquilaria agallochaRoxb，白木香A.sinensis(Lour)Gilg含有樹脂的木材，前者為進(jìn)口沉香，后者為國產(chǎn)沉香［4-6］。

由于沉香所用部位是樹的心材，生長年限長，資源有限，不能滿足需求，故市場上常有造假事件發(fā)生［7］。近來，在檢驗中發(fā)現(xiàn)有多批沉香的浸出物量高，符合現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但香氣明顯不同，經(jīng)反復(fù)實驗及考證，懷疑這些沉香中添加了含松香酸類的物質(zhì)，來增大其浸出物量［8-9］。松香酸為松香的主要成分，松香為松科植物馬尾松或其同屬植物樹干中取得的油樹脂，經(jīng)蒸餾除去揮發(fā)油后的遺留物。松香中主要成分為酸性物(樹脂酸)和中性物，其中樹脂酸約占85%～95%，而松香酸是其樹脂酸的主要成分［10］。本試驗采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，利用相對分子質(zhì)量和碎片信息，能快速，簡便，準(zhǔn)確的對沉香中是否添加了含松香酸類的物質(zhì)進(jìn)行檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器與裝置

Agilent 1100 Series LC/MSD Trap高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司)，含在線脫氣機、雙高壓梯度泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器;離子肼質(zhì)譜配有電噴霧離子(ESI)源。

1.2 材料和試劑

沉香正品藥材來自中國藥品生物制品檢定所標(biāo)本館，經(jīng)中檢所標(biāo)本館張繼館長鑒定;松香藥材由徐州彭祖中藥飲片廠提供;松香酸對照品來自德國SIGMA公司(純度約為75%);4批不同產(chǎn)地的沉香偽品藥材由南通市藥品檢驗所提供(其中編號Ⅲ來自廣東，編號Ⅳ來自安徽，編號Ⅴ來自徐州，編號Ⅵ來自啟東)。

乙腈:色譜純，Tedia公司，水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3 實驗條件

1.3.1 色譜與質(zhì)譜條件 色譜柱:Agilent zorbax SB-C18(5 μm，4.6 mm × 250 mm);流動相為乙腈-0.1%甲酸溶液(75 ∶25);體積流量 1.0 mL/min;柱溫:30℃;進(jìn)樣量10 μL。檢測器:紫外二極管陣列和質(zhì)譜串聯(lián)，紫外檢測波長241 nm。質(zhì)譜參數(shù):ESI離子源，正離子方式檢測，質(zhì)量掃描范圍m/z50～500，霧化器壓力35.0 psi，干燥氣(N2)體積流量8.0 L/min，干燥氣溫度325℃，噴霧電壓4 000 V，裂解電壓1.0 V，分流比5 ∶1。

1.3.2 對照品溶液的制備 取松香酸對照品10 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

1.3.3 對照藥材溶液的制備 取松香對照藥材12 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

1.3.4 供試品溶液的制備 取沉香正品及偽品藥材細(xì)粉0.3 g，加入乙醇25 mL，超聲處理15 min，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得沉香正品藥材溶液及偽品藥材溶液。

取沉香正品藥材細(xì)粉0.3 g以及松香酸對照品2.5 mg，加入乙醇 25 mL，超聲處理 15 min，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得沉香正品藥材加樣松香酸對照品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 松香酸對照品的LC/MS分析

對照品溶液的總離子流圖(TIC)見圖1。松香酸的保留時間為18.1 min，根據(jù)其分子質(zhì)量對圖譜進(jìn)行提取離子，結(jié)果在其提取離子流圖(EIC)中，保留時間與TIC中一致。

圖1 松香酸對照品TIC和EIC圖Fig.1 The TIC and EIC chromatogram of abietic acid

記錄其一級和二級質(zhì)譜圖(見圖2)。

2.2 松香藥材的LC/MS分析

其總離子流(TIC)以及提取離子流(EIC)，在保留時間18.1 min出現(xiàn)相對分子質(zhì)量為303.2的色譜峰，其一級、二級質(zhì)譜均與松香酸對照品一致。

2.3 沉香正品藥材的LC/MS分析

其相對總離子流圖(TIC)以及提取離子流圖(EIC)如下(見圖3)，在保留時間18.1 min未出現(xiàn)分子質(zhì)量為303.2的色譜峰。

2.4 沉香偽品藥材的LC/MS分析

圖2 松香酸對照品的一級和二級質(zhì)譜圖Fig.2 The LC/MS and LC/MS/MS chromatogram of abietic acid

圖3 沉香正品藥材的TIC和EIC圖Fig.3 The TIC and EIC chromatogram of agalloch

其總離子流圖(TIC)以及提取離子流圖(EIC)見圖4，在保留時間18.1 min均出現(xiàn)相對分子質(zhì)量為303.2的色譜峰，其一級、二級質(zhì)譜(圖5)與松香酸對照品一致。

圖4 沉香偽品藥材的TIC和EIC圖Fig.4 The TIC and EIC chromatogram of counterfeit agalloch

2.5 沉香正品藥材加樣松香酸對照品的LC/MS分析

其總離子流(TIC)以及提取離子流(EIC)，在保留時間18.1 min出現(xiàn)分子質(zhì)量為303.2的色譜峰，其一級、二級質(zhì)譜均與松香酸對照品一致。

2.6 質(zhì)譜數(shù)據(jù)

松香酸對照品、松香藥材、沉香正品、4批偽品藥材以及沉香正品藥材加樣松香酸對照品的質(zhì)譜數(shù)據(jù)見表1。

從上表中可見，松香藥材、4批沉香偽品藥材以及沉香正品藥材加樣松香酸對照品在保留時間18.1 min處均有一級、二級質(zhì)譜圖與松香酸一致的色譜峰，而沉香正品藥材未出現(xiàn)該色譜峰，可以判斷4批沉香偽品藥材中均添加了含有松香酸類的物質(zhì)。

2.7 質(zhì)譜數(shù)據(jù)解析

見表2。

3 討論

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將液相色譜的高分離效能與質(zhì)譜對結(jié)構(gòu)解析的強大功能結(jié)合起來，近年來隨著各種離子化技術(shù)的不斷出現(xiàn)，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域，在中藥及中成藥非法添加方面亦起著重要的作用。目前，國內(nèi)對沉香藥材真?zhèn)舞b別方法的研究報道較多［11-12］，主要集中在性狀、理化、導(dǎo)數(shù)光譜、薄層色譜方面［13］，而液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的運用未見報道，將其與傳統(tǒng)方法相結(jié)合，有利于我們控制藥材質(zhì)量，規(guī)范市場，保障人民群眾合理用藥。

表2 松香酸的MS和MS2數(shù)據(jù)歸屬Tab.2 The data adscription for MS/MS of abietic acid

本試驗利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對沉香藥材中是否添加松香酸類物質(zhì)進(jìn)行了檢測，其方法較為簡便快速，結(jié)果判定較為可靠。目前從文獻(xiàn)報道中可見，松香酸主要存在于松香中，為其主要成分，但要確認(rèn)添加的是否為松香類物質(zhì)，還需輔以藥材性狀鑒別及顯微鑒別等手段。

［1］冷玉杰，劉 兵.沉香的鑒別及藥理作用［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2007，15(3):103.

［2］郭桂明.名貴中藥材沉香的資源現(xiàn)狀與真?zhèn)舞b別［J］.北京中醫(yī)，2006，25(5):293-294.

［3］周 萍.沉香的真?zhèn)舞b別［J］.實用中醫(yī)藥雜志，2004，20(12):725.

［4］張成柱.沉香鑒別方法的探討［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2003，4(2):23.

［5］童 婭，劉 浩.沉香與一種沉香偽品的鑒別研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2006，17(12):2552 2553.

［6］張軍偉，白 明.沉香及其偽品的鑒別［J］.河南中醫(yī)，2004，24(1):58.

［7］衛(wèi)愛黎，趙 霞.一種偽品沉香的鑒別［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2006，82:284-287.

［8］吳 萌，饒偉文.一種市售摻偽沉香的鑒別［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2010，24(5):32-34.

［9］梅學(xué)偉，劉金成，紀(jì) 玲.中藥沉香品種鑒定及探討鑒別方法［J］.科技創(chuàng)新導(dǎo)報，2009，6(1):228.

［10］李富賢，米彩峰，石會麗.RP-HPLC測定清毒素膠囊中松香酸的含量［J］.中國中藥雜志，2008，33(9):1086-1087.

［11］呂浩然，陳代賢，郭月秋.沉香真?zhèn)钨|(zhì)量的考查［J］.中國實用醫(yī)藥，2007，2(32):127-128.

［12］高曉霞，田佳佳，章衛(wèi)民，等.一種用松香摻偽的沉香藥材鑒別研究［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2009，25(6):573-578.

［13］劉軍民，徐鴻華.國產(chǎn)沉香研究進(jìn)展［J］.中藥材，2005，28(7):627-632.