李家洲， 盧海嘯， 陳海娟， 黎建玲

(玉林師范學(xué)院，廣西玉林 537000)

海木三氯甲烷提取物對高血壓模型大鼠血壓和心率的影響

李家洲， 盧海嘯*， 陳海娟， 黎建玲

(玉林師范學(xué)院，廣西玉林 537000)

目的 探討海木三氯甲烷提取物對藥物誘導(dǎo)的高血壓模型大鼠血壓和心率的影響。方法 采用腹腔注射左旋硝基精氨酸制造大鼠高血壓模型，觀察和記錄給大鼠灌胃不同劑量的海木三氯甲烷提取物后第7天和第14天的收縮壓、舒張壓和心率變化。結(jié)果 海木三氯甲烷提取物的各劑量組與模型組及給藥前比較，血壓和心率均有非常顯著性差異(P＜0.01)。結(jié)論 海木三氯甲烷提取物對左旋硝基精氨酸引起的高血壓模型大鼠具有顯著的降壓和拮抗心率及體質(zhì)量下降的作用。

海木;三氯甲烷提取物;左旋硝基精氨酸;高血壓

楝科植物海木(Trichilia connaroides)，有清熱解毒，祛風(fēng)濕腰腿痛和心、胃氣痛等功效［1］。作者在進(jìn)行海木藥理活性的相關(guān)研究工作中發(fā)現(xiàn)，其三氯甲烷提取物對昆明小鼠建立的抑郁模型表現(xiàn)出顯著的抗抑郁作用［2］;并能增強(qiáng)正常小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，改善記憶障礙小鼠的記憶功能［3］;對SD大鼠建立的血瘀模型表現(xiàn)出顯著的活血化瘀作用［4］;對正常大鼠具有顯著降血壓作用。為進(jìn)一步觀察其對高血壓動物模型的降壓效果，本實(shí)驗(yàn)以一氧化氮合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸(NG-Nitro-L-Ariginine，L-NNA)誘導(dǎo)SD大鼠建立高血壓模型，檢測不同濃度的海木三氯甲烷提取物的降壓活性以及對心率和體質(zhì)量的影響，以期為海木的后續(xù)研究和開發(fā)利用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 SD大鼠，雄性，體質(zhì)量(260±50)g，購于廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，清潔級，許可證號:SCXK桂2003-0003。

1.2 藥物及試劑 海木枝葉:采于廣西桂林市永?？h壽城，經(jīng)廣西植物研究所劉演研究員鑒定為楝科植物海木(Trichilia connaroides)。采后剪碎，60℃烘干備用;乙醇(分析純)、石油醚(分析純)、三氯甲烷(分析純)均購于天津福晨化學(xué)試劑廠;正丁醇(分析純)，購于上海申博華工有限公司;0.9%氯化鈉注射液(廣西南寧百會藥業(yè)集團(tuán)有限公司，生產(chǎn)批號:0902003);左旋硝基精氨酸(L-NNA)廣州奇云生物技術(shù)有限公司;卡托普利(山西津華暉星制藥有限公司，生產(chǎn)批號:080102)。

1.3 主要儀器 BP-6無創(chuàng)血壓測量儀(成都泰盟科技有限公司);RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏儀市予華儀器有限責(zé)任公司);電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)等。

2 方法

2.1 海木提取物的制備 稱取海木干枝葉適量，加入適量的無水乙醇，加熱回流2h，用四層紗布過濾，得到的上清液提取液，重復(fù)提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑，得膏狀物，將此膏狀物用乙醇-水=1∶3的比例除去葉綠素，回收溶劑至干，即得粗提部分。將所得粗提物分成兩份，一份備用，另一份依次用石油醚、三氯甲烷、正丁醇、水進(jìn)行固-液萃取，即得到石油醚部分、三氯甲烷部分、正丁醇部分、水提部分。將各部分分別減壓回收溶劑至干，最后得到的膏狀物即是石油醚萃取物、三氯甲烷萃取物、正丁醇萃取物和水提物。試驗(yàn)時用生理鹽水配置成相應(yīng)濃度的懸浮液。

2.2 海木不同極性部位對正常大鼠血壓的影響 將70只SD大鼠進(jìn)行適應(yīng)性測壓后，計(jì)算每只大鼠的基礎(chǔ)血壓，剔除差異較大的，選取48只按血壓分層，再按隨機(jī)數(shù)字表分為6組:空白對照組、粗提組、石油醚組、三氯甲烷組、正丁醇組和水提組。其中空白對照組給予2 mL生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)3周;其余各組按200 mg/(kg·d)分別灌胃海木相應(yīng)提取物，連續(xù)3周。參照文獻(xiàn)［5］用BP-6無創(chuàng)血壓儀測量大鼠收縮壓(SAP)和舒張壓(DAP):測給藥前血壓;給藥后7、14、21 d血壓。每個時點(diǎn)連續(xù)測3次，取均值。

2.3 海木三氯甲烷提取物對高血壓模型大鼠血壓的影響按2.2項(xiàng)方法選取60只血壓差異較小的SD大鼠，隨機(jī)選取8只作為正常對照組，給1 mL生理鹽水腹腔注射，每日1次，連續(xù)4周，于第5周起，給2 mL生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)2周。其余的52只SD大鼠按15 mg/(kg·d)劑量，腹腔注射一氧化氮合成酶抑制劑L-NNA，連續(xù)4周。以此方法建立大鼠高血壓模型［6］。然后測定血壓，剔除差異較大的，選取32只按血壓分層，再隨機(jī)分為4組:模型對照組，于第5周起，給2 mL生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)2周;海木高劑量組，于第5周起，以250 mg/(kg·d)灌胃海木三氯甲烷提取物，每日1次，連續(xù)2周;海木低劑量組，于第5周起，以150 mg/(kg·d)灌胃海木三氯甲烷提取物，每日1次，連續(xù)2周;陽性對照組(卡托普利組)，于第5周起，以15 mg/(kg·d)連續(xù)灌胃卡托普利，每日1次，連續(xù)2周。測建模前、建模14、28 d以及建模后給藥7、14 d血壓。每個時點(diǎn)連續(xù)測3次，取均值。同時記錄大鼠心律和體質(zhì)量。

3 結(jié)果與分析

3.1 海木不同極性部位對正常大鼠血壓的影響 表1結(jié)果表明，給藥2周后，與空白對照組及給藥前比較，海木枝葉的5種不同極性部位都能不同程度地降低正常大鼠的收縮壓和舒張壓，而且基本穩(wěn)定在一定水平。其中粗提組和正丁醇組有顯著性差異(P＜0.05)，三氯甲烷組有非常顯著性差異(P＜0.01)，石油醚組和水提組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。此外，給藥2周后，各給藥組的降壓效果與三氯甲烷組相比，除粗提組的舒張壓外，其余各給藥組的收縮壓和舒張壓均有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。表明三氯甲烷部位為最高活性部位。

3.2 海木三氯甲烷提取物對高血壓模型大鼠血壓的影響由表2可見，造模2周后，各處理組與正常組比較已有非常顯著性差異(P＜0.01)，并且維持穩(wěn)定持續(xù)性的高血壓。各處理組的舒張壓和收縮壓的平均絕對值升高均大于30 mm-Hg，符合臨床對高血壓的定義。給藥1周后，與模型組及給藥前比較，高劑量組的收縮壓和舒張壓均顯著降低(P＜0.01)，并已基本恢復(fù)到建模前的水平，而且與卡托普利組比藥效有非常顯著性差異(P＜0.01)，給藥2周后有顯著性差異(P＜0.05);低劑量組給藥1周后，收縮壓和舒張壓也均顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，給藥2周后也基本恢復(fù)到建模前的水平，藥效與卡托普利組比無顯著差異(P＞0.05)。提示海木低劑量組的藥效強(qiáng)度與卡托普利組相近，高劑量組的藥效強(qiáng)于卡托普利組，且起效時間快。

表1 海木不同極性部位對正常大鼠血壓的影響(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

表1 海木不同極性部位對正常大鼠血壓的影響(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

注:與空白對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;與給藥前相比，#P ＜0. 05;與三氯甲烷組相比，◇P ＜0.05，◇◇P＜0.01。

/mmHg空白對照組 收縮壓 95.72±7.80 96.11±6.91 94.93±6.18 95.14±6.61組別 項(xiàng)目 藥前/mmHg 藥后1周/mmHg 藥后2周/mmHg 藥后3周舒張壓 79.90 ±6.85 79.83 ±4.92 80.54 ±4.26 81.03 ±5.32粗提組 收縮壓 96.88 ±6.72 85.41±5.83*# 83.80±7.81*#◇ 83.08±7.84*#◇舒張壓 77.02 ±4.33 72.81 ±3.42* 71.52 ±3.39* 72.03 ±3.42*石油醚組 收縮壓 98.55±8.32 93.81±7.61◇ 90.22±8.83◇◇ 90.75±8.62◇◇舒張壓 79.77 ±6.41 75.91±6.63◇ 73.72±6.91◇ 72.34±6.61◇三氯甲烷組 收縮壓 97.56±5.78 85.31±5.42*# 81.45±6.42＊＊## 80.78±7.13＊＊##舒張壓 79.33 ±6.14 72.21 ±5.45*# 70.24 ±4.52＊＊# 70.41 ±5.22＊＊#正丁醇組 收縮壓 94.22±4.56 86.63±8.02 83.56±8.01＊◇# 82.71±7.22*#◇舒張壓 78.75 ±4.72 73.11±5.13 72.12±5.11＊◇ 72.32±6.89＊◇水提組 收縮壓 96.33±7.56 86.67±5.10 85.21±5.91◇ 84.72±8.34◇舒張壓 78.49 ±5.72 75.61±5.56◇ 73.32±5.61◇ 74.13±6.81◇

表2 海木三氯甲烷提取物對高血壓模型大鼠血壓的影響(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

表2 海木三氯甲烷提取物對高血壓模型大鼠血壓的影響(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

注:與正常對照組比較，＊＊P ＜0. 01;與模型組相比，☆P ＜0.05，☆☆P ＜0. 01;與給藥前相比，#P ＜0.05，##P ＜0. 01;與卡托普利組相比，◇P＜0.05，◇◇P ＜0.01。

組別 項(xiàng)目 建模前/(mmHg)/mmHg 2周 4周建模/mmHg 1周 2周給藥正常對照組 收縮壓 93.92 ±7.78 90.21 ±5.13 92.62 ±8.31 91.57 ±3.8893.31 ±4.22舒張壓 75.41 ±6.37 83.52 ±4.31 80.51 ±7.78 76.53 ±3.45 75.12 ±6.32模型對照組 收縮壓 94.87±6.72 125.46±2.01＊＊ 136.52±8.51＊＊ 131.88±2.41 130.32±3.63舒張壓 77.02 ±4.31 112.01 ±3.42＊＊ 118.51 ±4.33＊＊ 112.42 ±2.85 114.62 ±3.43高劑量組 收縮壓 95.56±2.31 126.14 ±4.09＊＊ 137.52±6.45＊＊ 94.83 ±3.61☆☆##◇◇ 92.22±5.51☆☆##◇舒張壓 79.00 ±2.42 107.77 ±6.22＊＊ 115.01 ±5.43＊＊ 79.32 ±4.88☆☆##◇◇ 78.61 ±3.46☆☆##◇低劑量組 收縮壓 94.59±5.23 126.82±4.7＊＊ 135.41±4.87＊＊ 106.52±4.81☆## 93.71±8.62☆☆##舒張壓 77.78 ±6.11 111.62 ±5.63＊＊ 120.31 ±4.62＊＊ 91.02 ±6.33☆## 82.22 ±6.41☆☆##卡托普利組 收縮壓 93.17±2.63 127.52±4.02＊＊ 135.67±6.81＊＊ 102.61±9.91☆## 93.42±6.58☆☆##舒張壓 76.83 ±3.7 112.14 ±4.43＊＊ 125.42 ±5.23＊＊ 88.53 ±3.64☆## 79.92 ±4.51☆☆##

3.3 海木三氯甲烷提取物對高血壓模型大鼠心率的影響由表3可見，造模前各組之間無顯著性差異，說明各組間心率在同一水平，分組合理。造模后各處理組與正常組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)，各處理組心率水平均低于正常組。給藥1周、2周時，與模型組比較，高、低劑量組的心率均顯著提高(P＜0.01)，并基本恢復(fù)到正常水平，說明海木三氯甲烷提取物能拮抗左旋硝基精氨酸引起的心率下降。給藥組與卡托普利組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表3 海木三氯甲烷提取物對大鼠心率的影響(±s，n=8)

表3 海木三氯甲烷提取物對大鼠心率的影響(±s，n=8)

注:與正常對照組比較，＊＊P ＜0. 01;與模型組比較，☆☆P ＜0. 01;與給藥前相比，##P ＜0.01。

組別 造模前/(次/min)造模/(次/min)給藥/(次/min)2周 4周1周 2周正常對照組 332.77 ±6.23 330.51 ±6.42 331.33 ±7.21 333.89±6.13 335.61 ±4.82模型組 331.12 ±8.41 284.08 ±5.11＊＊ 282.61±5.12＊＊ 283.63 ±3.80＊＊ 285.83±3.78高劑量組 332.10 ±4.92 284.81 ±4.89＊＊ 281.72 ±4.51＊＊ 331.88 ±5.20☆☆## 333.03 ±5.44☆☆##低劑量組 332.81 ±4.22 285.79 ±5.91＊＊ 282.41 ±6.52＊＊ 328.60 ±4.33☆☆## 331.89 ±6.51☆☆##卡托普利組 332.30 ±6.31 286.56 ±5.12＊＊ 283.21±7.32＊＊ 330.30 ±4.31☆☆## 332.78±5.56☆☆##

3.4 海木三氯甲烷提取物對高血壓模型大鼠體質(zhì)量的影響由表4可以看出，實(shí)驗(yàn)前各組體質(zhì)量無顯著差異(P＞0.05)，實(shí)驗(yàn)后模型組體質(zhì)量減少，與正常組和實(shí)驗(yàn)前比較，有非常顯著性差異(P＜0.01)，說明L-NNA造成了大鼠體質(zhì)量明顯下降。給藥組體質(zhì)量未受到明顯影響，與正常組和實(shí)驗(yàn)前相比，無顯著性差異(P＞0.05)，給藥組與卡托普利組相比高劑量組實(shí)驗(yàn)?zāi)w質(zhì)量與卡托普利組有顯著性差異(P＜0.05)，低劑量組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。說明海木能夠明顯緩解L-NNA造成的體質(zhì)量下降，高劑量組的藥效強(qiáng)于卡托普利組。

表4 海木三氯甲烷提取物對大鼠體質(zhì)量的影響(±s，n=8)

表4 海木三氯甲烷提取物對大鼠體質(zhì)量的影響(±s，n=8)

注:與正常對照組比較，＊＊P ＜0. 01;與實(shí)驗(yàn)前相比，##P ＜0. 01;與卡托普利組相比，◇P ＜0.05。

組別 實(shí)驗(yàn)前/g 實(shí)驗(yàn)?zāi)?6周)/g正常對照組300.23 ±17.72 299.89 ±8.42模型組 285.30 ±29.89 243.31 ±11.92＊＊##高劑量組 299.91 ±35.13 295.23 ±8.01◇低劑量組 288.52 ±28.13 276.4 ±7.9卡托普利組305.89 ±26.42 279.80 ±7.81

4 討論

研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞舒張因子(endothelium derived relaxing factor EDRF，nitric oxide NO)是調(diào)節(jié)血管張力，維持血壓穩(wěn)定的重要物質(zhì)［7］。內(nèi)皮細(xì)胞損傷，EDRF NO缺乏，可能是高血壓發(fā)病的一個重要原因［8］。Toda等給狗一次靜脈注射EDRF合成酶(NOS)竟?fàn)幮砸种苿㎜-NNA，可產(chǎn)生嚴(yán)重高血壓［9］。本研究給大鼠腹腔注射L-NNA 1周后，開始出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、順從、反抗能力減低等表現(xiàn)，2周后，各處理組與正常對照組比較有顯著差異性，并形成穩(wěn)定持續(xù)性的高血壓，與文獻(xiàn)［5］報(bào)道一致，表明造模成功。各處理組的舒張壓和收縮壓的平均絕對值升高均大于30 mmHg，符合臨床對高血壓的定義。在灌服海木三氯甲烷提取物1周后，高劑量組的收縮壓和舒張壓均顯著降低，并已基本恢復(fù)到建模前的水平，而且與卡托普利組比藥效有非常顯著性差異，給藥2周后有顯著性差異;低劑量組給藥1周后，收縮壓和舒張壓也均顯著降低，給藥2周后也基本恢復(fù)到建模前的水平，藥效與卡托普利組比無顯著差異。提示海木低劑量組的藥效強(qiáng)度與卡托普利組相近，高劑量組的藥效強(qiáng)于卡托普利組，且起效時間快。

造模后各處理組與正常組比較心率顯著降低，灌服給藥1周后，與模型組比較，海木各劑量組的心率均顯著提高，并基本恢復(fù)到正常水平，說明海木三氯甲烷提取物能拮抗左旋硝基精氨酸引起的心率下降，藥效強(qiáng)度與卡托普利組相當(dāng)。

在對實(shí)驗(yàn)動物的毒性考察中發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)后模型組體質(zhì)量顯著減少，說明L-NNA造成了大鼠體質(zhì)量明顯下降。給藥組體質(zhì)量未受到明顯影響，與正常組和實(shí)驗(yàn)前相比，無顯著性差異。高劑量組與卡托普利組相比實(shí)驗(yàn)?zāi)w質(zhì)量有顯著性差異。說明海木能夠明顯緩解L-NNA造成的體質(zhì)量下降，高劑量組的藥效強(qiáng)于卡托普利組。

卡托普利為化學(xué)合成的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑［10］，對多種類型高血壓均有明顯降壓作用，并能改善充血性心力衰竭患者的心臟功能。其降壓機(jī)制為抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性，使血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)轉(zhuǎn)變?yōu)锳ngⅡ減少，降低AngⅡ水平，舒張小動脈，降低外周血管阻力，同時減少醛固酮分泌，以利于排鈉，增加腎血流量。然而，化學(xué)合成的ACE抑制劑在臨床應(yīng)用過程中往往會產(chǎn)生副作用，如咳嗽、味覺功能紊亂及皮疹等［11］。因此，尋找安全的天然植物來源的ACE抑制劑來預(yù)防和治療高血壓，引起了廣大科學(xué)工作者的極大關(guān)注。本研究結(jié)果表明，海木三氯甲烷提取物的降壓護(hù)心作用與卡托普利類似，甚至藥效優(yōu)于卡托普利。在本課題組的另外研究中發(fā)現(xiàn)，海木三氯甲烷提取物能改善由腎上腺素引起的局部微循環(huán)障礙，使局部收縮的微血管口徑開放，血流狀態(tài)改善［4］。這提示海木的降壓途徑可能與卡托普利相似，也是通過舒張小血管，降低外周血管阻力而實(shí)現(xiàn)的。至于海木是否能改變高血壓大鼠血清中ACE、血管緊張素和腎素的活性，或改變內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、醛固酮(ALD)等血壓相關(guān)物質(zhì)的含量，有待進(jìn)一步研究。

［1］Zhang Huaping，Wu Shaohua，Shen Yuemao，et al.A pentanortriterpenoid with a novel carbon skeleton and a new pregnane fromTrichilia connaroides［J］.Can J Chem，2003，81:253-257.

［2］李家洲，盧海嘯，蒙飛燕，等.海木醇提物對小鼠抑郁模型的抗抑郁作用［J］.中藥材，2010，33(10):1605-1608.

［3］李家洲，盧海嘯，李金弟，等.海木提取物對小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，21(9):2277-2279.

［4］李家洲，盧海嘯，鄧遠(yuǎn)禹，等.海木氯仿提取物活血化瘀作用的研究［J］.中成藥，2011，33(1):29-32.

［5］劉建學(xué)，孟祥平，張曉慧.豬毛菜不同提取物對高血壓模型大鼠血壓和心率的影響［J］.食品科學(xué)，2007，28(11):558-560.

［6］高連如，趙云濤，石湘蕓，等.左旋硝基精氨酸誘導(dǎo)大鼠持續(xù)性高血壓［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，1995，15(3):49-53.

［7］Moncada S，Palmer R M，Higgs E A.Nitric oxide:physiology，pathophysiolgy，and pharmacology［J］.Pharmacol Rev，1991，43:110.

［8］Shepherd JT，Katusi?ZS.Endothelium-derived vasoactive factor:I.endothelium dependent relaxation ［J］.Hypertension，1991，18(5 Suppl):III 76-85.

［9］Toda N，Kitamura Y，Okamura T.Neural mechanism of hypertension by nitric oxide synthase inhibitor in dogs［J］.Hypertension，1993，21(1):3-8.

［10］Cheung H S，Chushman D W.Spectrophotometric assay and properties of the angiotensin-converting enzyme of rabbit lung［J］.Biochem Pharmacol，1971，20:1637-1648.

［11］Kamath V，Niketh S，Chamdrashekar A，et al.Chymotryptic hydrolysates of α-kafirin，the storage protein of sorghum(Sorghumbicolor)exhibited angiotensin converting enzyme inhibitory activity［J］.Food chem，2007，100:306-311.

R285.5

B

1001-1528(2011)08-1413-04

2011-03-20

廣西教育廳科研項(xiàng)目(200910MS126)

李家洲(1958—)，男，副教授，主要從事藥理學(xué)和生理學(xué)的教學(xué)和研究工作。Tel:13907750778，E-mail:ljz5810@163.com

*通信作者:盧海嘯(1974—)，男，講師，博士生，主要從事中藥化學(xué)及藥效的研究工作。Tel:13544339648，E-mail:luhaixiao76@163.com