烏蘭巴依爾， 楊永新， 王雪飛， 周文婷， 阿布來提·阿布力孜， 依巴代提·吐乎提， 艾尼瓦爾·吾買爾*

(1.新疆巴州衛(wèi)生學(xué)校，新疆 庫爾勒841000;2.新疆醫(yī)科大學(xué)，新疆烏魯木齊830054)

榅桲(Cydonia Oblanga Miller，COM)在我國有著悠久歷史，是薔薇科(Rsaceae)榲桲屬(Cydonia)的果樹［1］，是維吾爾醫(yī)應(yīng)用歷史悠久的常用藥材之一。維文名為比葉(Biye)，別名為蠻檀，英文名Quince。根據(jù)《新疆維吾爾藥志》及《維吾爾常用藥材學(xué)》記載，維吾爾族用榲桲補血、補腦、止咳、降血壓、降脂;它具有治胃病、肝病、心臟病、月經(jīng)不調(diào)等功效［2-4］?，F(xiàn)代研究表明，榲桲中化學(xué)成分極為豐富，成熟果實含有果糖、肉質(zhì)、原果膠、有機酸、氨基酸等;果肉含肉豆蔻酸、異油酸甘油脂、揮發(fā)油、黃酮等;果皮含庚基乙基醚和壬基乙基醚等［5］;種子主要含黏質(zhì)、苦杏仁苷、脂肪油等;葉子含有生物堿、葡萄糖苷、鞣質(zhì)、黏質(zhì)、酮糖、醛糖、脂質(zhì)、維生素C、氰苷等［6-8］。國外廣泛用于食品和藥品中［9］，目前在國內(nèi)榲桲用于醫(yī)學(xué)、食品等方面沒被開發(fā)，榅桲應(yīng)用的物質(zhì)基礎(chǔ)及活性缺乏深入研究［8］。本課題以開發(fā)和研究新疆民族藥作為出發(fā)點，充分利用榲桲在新疆的地產(chǎn)資源和栽培資源［4］，為其提供口服型抗栓藥具有一定意義。本實驗主要對榅桲葉進行水提取，從抗凝血、纖溶、抗動脈血栓等方面探討榅桲提取物的作用及機制，為其進一步研究有效部位和作用靶點提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 儀器、材料、動物

1.1 藥品與試劑 榅桲提取物(新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室提供)，阿司匹林(新疆華康藥業(yè)有限公司，批號020511)，銀杏葉片(天津天士力制藥有限公司，批號259)，烏拉坦(上海三浦化工有限公司，批號080409)，凝血酶時間(TT)測定試劑盒(上海太陽生物技術(shù)有限公司，批號121046)，凝血酶原時間(PT)測定試劑盒(上海太陽生物技術(shù)有限公司，批號102108)活化部分凝血活酶時間測定試劑盒(上海太陽生物技術(shù)有限公司，批號112098)。

1.2 儀器 RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，DK-S24數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠)，SK8210HP超聲儀(上海科導(dǎo)儀器廠)，BL1500電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，KH-120M型臺式高速離心機(上海安亭科技儀器廠)，定時鐘(上海第二鐘廠)，秒表(上海秒表廠)，分析天平(梅特勒-托利多儀器廠)。

1.3 動物 ICR小白鼠，雄性，60只，體質(zhì)量18～22 g，清潔級;均由新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(新)2003-001。

Wistar大鼠，雄性，42 只，體質(zhì)量 300 ～350 g，清潔級;均由新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(新)2003-0001。

2 試驗方法

2.1 榅桲提取物對小鼠優(yōu)球蛋白溶解時間(ELT)的影響［10-12］取小白鼠60只，體質(zhì)量22～28 g，雄性，隨機分為6組，分別灌胃給予生理鹽水對照組，榅桲提取物小、中、大劑量(20、40、80 mg/kg)組，陽性對照組阿司匹林(5 mg/kg)和銀杏葉片(20 mg/kg)連續(xù)給藥14 d，在末次給藥1 h，眼眶靜脈采血1 mL，試管中加入3.8%枸櫞酸鈉抗凝，嚴格控制抗凝劑與血的比例為1∶9。3000 r/min離心10 min，取血漿0.25 mL，加4.5 mL蒸餾水，再加入1%乙酸0.05 mL 使 pH為9，充分混合后，將混合液置于4℃的冰箱中10 min后，3000 r/min離心5 min，將優(yōu)球蛋白沉淀分出。傾去上清液，將試管倒置于濾紙上吸取多余的液體。加硼酸緩沖液(pH=9.0)0.25 mL于試管中，用細玻璃棒小心攪拌溶解約1 min，將試管放入37℃水浴中2 min后，加入0.025%氯化鈣0.25 mL，使其凝固。每隔10 min觀察1次，直至凝塊完全溶解為止，記錄其凝塊完全溶解所需的時間，即為優(yōu)球蛋白溶解時間。結(jié)果見表1。

表1 榅桲水提取物對小鼠優(yōu)球蛋白溶解時間的影響(± s，n=10)

表1 榅桲水提取物對小鼠優(yōu)球蛋白溶解時間的影響(± s，n=10)

注:與生理鹽水組比較，*P＜0.01;小劑量組與阿司匹林組比較，#P＜0.05;大劑量組與銀杏葉片組比較，▲P ＜0.05。

/min生理鹽水組 10 —257.8 ±52.161銀杏葉片組 10 20 156.6 ±25.131*阿司匹林組 10 5 112.3 ±57.669*小劑量組 10 20 183.0 ±49.315*#中劑量組 10 40 157.5 ±11.167*大劑量組 10 80 111.7 ±37.901＊▲組別 動物數(shù)/只劑量/(mg/kg)優(yōu)球蛋白溶解時間

觀察方法:藥物對大鼠血栓形成抑制率。結(jié)果見表2。

表2 榅桲提取物對大鼠動—靜脈旁路血栓形成的影響(± s，n=7)

表2 榅桲提取物對大鼠動—靜脈旁路血栓形成的影響(± s，n=7)

注:與生理鹽水組比較，*P＜0.05;大劑量組與阿司匹林組比較，#P ＜0.05;大劑量組與銀杏葉片組比較，▲P ＜0.05。

組別 動物數(shù)/只劑量/(mg/kg)血栓/mg抑制率/%生理鹽水組 7 — 15.17±2.250—銀杏葉片組 7 20 8.014 ±0.807* 47.4阿司匹林組 7 5 9.317 ±3.743* 38.8小劑量組 7 20 9.971 ±2.445* 34.2中劑量組 7 40 6.971 ±1.903* 53.9大劑量組 7 80 3.610 ±0.453*#▲ 76.3#▲

2.3 榅桲提取物對大鼠凝血功能的影響 取Wistar大鼠，雄性，42只，體質(zhì)量300～350 g，動物分組，給藥，麻醉及手術(shù)方法同2.2項。在無菌條件下，造模20 min后，腹主動脈采血，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，血液與抗凝劑之比為9∶1，3500 r/min離心15 min，取血漿。按試劑盒說明測定 TT、PT和APTT。結(jié)果見表3。

2.4 實驗數(shù)據(jù)的分析與處理 觀察指標(biāo)以質(zhì)量分數(shù)%表示;實驗結(jié)果用±s表示，各組之間比較采用t檢驗，試驗結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包處理。

3 結(jié)果

3.1 榅桲提取物對小鼠優(yōu)球蛋白溶解時間(ELT)的影響結(jié)果如表1所示，與生理鹽水對照組相比，榅桲提取物小、中、大劑量(20、40、80 mg/kg)組顯著縮短小鼠優(yōu)球蛋白的溶解時間(P＜0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義。小劑量組與阿司匹林組比較(P＜0.05)，有統(tǒng)計學(xué)意義;大劑量組與銀杏葉片組比較(P＜0.05)，有統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

3.2 榅桲提取物對大鼠動—靜脈旁路血栓形成的影響結(jié)果如表2所示，與生理鹽水對照組相比，榅桲提取物小、中、大劑量(20、40、80 mg/kg)組均明顯減輕血栓濕重(P＜0.05)，有統(tǒng)計學(xué)意義。大劑量組與阿司匹林組相比(P＜0.05)，有統(tǒng)計學(xué)意義;與銀杏葉片組相比(P ＜0.05)，有統(tǒng)計學(xué)意義。榅桲提取物小、中、大劑量組對大鼠動-靜脈旁路血栓抑制率分別為 34.2%，53.9%和76.3%(P ＜0.05)。

3.3 榅桲提取物對大鼠凝血功能的影響 結(jié)果如表3所示，與生理鹽水對照組相比，榅桲提取物小劑量組(20 mg/kg)明顯延長PT(P＜0.05);榅桲提取物中、大劑量(40、80 mg/kg)組顯著延長 TT、PT、APTT(P ＜0.01)。榅桲提取物大劑量組與阿司匹林組和銀杏葉片組比較(P＞0.05)，無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

4 討論

在前一期的實驗研究中發(fā)現(xiàn)榅桲提取物明顯延長出血時間和凝血時間，具有明顯的纖溶和抗肺栓塞作用。本實驗進一步對榅桲提取物的抗血栓作用及機制進行了藥理學(xué)基礎(chǔ)研究。

在小鼠ELT實驗中，隨著劑量的增加，榅桲提取物對小鼠ELT的縮短作用逐漸增強。ELT反映纖溶活性，與激活纖溶活性物質(zhì)有關(guān)［10-11］。榅桲提取物激活了纖溶活性物質(zhì)，促纖溶活性而促進了優(yōu)球蛋白的溶解性。

表3 榅桲提取物對大鼠凝血功能的影響(± s，n=7)

表3 榅桲提取物對大鼠凝血功能的影響(± s，n=7)

注:與生理鹽水組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

TT/s PT/s APTT/s生理鹽水組組別 動物數(shù)/只 劑量/(mg/kg)13.9 ±5.792 11.3 ±2.596 23.6 ±1.812銀杏葉片組 7 20 31.4±6.884＊＊ 24.1±13.260* 43.1±15.102＊＊阿司匹林組 7 5 30.5±11.934＊＊ 32.4±11.562＊＊ 34.2±8.204＊＊小劑量組 7 20 17.2 ±9.928 19.4 ±9.676* 27.5 ±11.271中劑量組 7 40 22.9±2.512＊＊ 24.7 ±10.89＊＊ 39.46.±13.754＊＊大劑量組 7 80 25.2±8.438＊＊ 28.0±9.797＊＊ 42.43±10.1237－＊＊

在大鼠動-靜脈旁路血栓形成實驗中，隨著劑量的增加，榅桲提取物對動-靜脈旁路血栓逐漸降低血栓濕重，動脈血栓形成率也降低，具有量效關(guān)系。動-靜脈旁路血栓模型中形成的血栓，類似于動脈中血栓［13，15］，反映整體動脈血流中血小板的黏附、聚集功能，當(dāng)血小板聚集功能受到抑制時，血栓的重量就減輕［16-19］。榅桲提取物明顯降低大鼠動-靜脈旁路血栓濕重的作用與抑制血小板聚集而抗血栓形成有關(guān)。

本實驗中榅桲提取物明顯延長了TT、PT、APTT。TT延長反映纖維蛋白原降解及其降解產(chǎn)物增加，PT延長反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺乏，APTT延長反映凝血因子Ⅸ缺乏［10-11］，榅桲提取物的作用與凝血因子缺乏和纖維蛋白原降解產(chǎn)物增加有關(guān)，從而抑制凝血功能。

綜上所述，榅桲提取物具有明顯的抑制動脈血栓形成，抗凝血和纖溶作用。在口服型抗血栓藥物方面有一定的研究價值和開發(fā)利用價值。

［1］茹克婭木·沙德克.維吾爾常用藥材學(xué)(上冊)［M］.烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1993:233.

［2］馬木提·庫爾班.新疆榲桲中總生物堿的測定［J］.食品科學(xué)，2005，26(2):186-189.

［3］古麗娜爾.榲桲黃色素的提取及性質(zhì)研究［J］.新疆師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2005，24(2):59-63.

［4］新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生廳，維吾爾藥材標(biāo)準(zhǔn)(上冊)［M］.烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1991:183.

［5］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊)［M］.上海:上海人民出版社，1977:5068-5072.

［6］全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(下冊)［M］.北京:人民出版社，1978:2431-2432.

［7］維吾爾醫(yī)學(xué)常用材料［M］.烏魯木齊:新疆人民出版社，1990.

［8］馬木提·庫爾班，長馬力別克·吾買爾.榲桲中總黃酮的測定［J］.新疆師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2004，23(4):67-68(90).

［9］夏扎旦·夏克爾，買合布白，艾克白爾，等.新疆榲桲中的鞣質(zhì)類化合物及其生物活性［J］.生物技術(shù)通訊，2006，17(5):840-842.

［10］徐叔云，卞如源，陳 修主編.藥理學(xué)實驗方法［M］.3版，北京:人民出版社，2005:1270-1273.

［11］李儀奎.中藥藥理實驗方法［M］.上海:上?？萍技夹g(shù)出版社，1991:141，145，403.

［12］周 琦，王敏偉，王以美，等.竹葉提取物的抗栓作用［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2006，23(7):162-164.

［13］馬恩龍，李春艷，曹穎林，等.溶栓1號抗血小板聚集及抗血栓形成作用［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2001，18(5):370.

［14］顧 云，孟娟茹.介紹一種簡易的抗血栓藥物體內(nèi)篩選法［J］.中國藥理學(xué)通報，1991，7(4):317.

［15］王 琳，楊靜偉，宋鳳平，等.穿心蓮的藥理作用研究進展［J］.中醫(yī)藥信息，2003，20(6):27.

［16］Diminno G，Silver MJ Mouse antithrombotic assa y:a simple method for the evaluation of antithrombotic activity by ethyl alcohol［J］.J Pharmacol Exp Ther，1983，225:57-60.

［17］陳可冀.防治血栓形成［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1990:446.

［18］王曉嵐，周次清.心痛寧對大鼠血小板聚集及膜流動性的影響［J］.中國血液流變學(xué)雜志，2001，11(2):102-104.

［19］張文博，史 青.抗血栓藥物的新進展［J］.濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，23(3):302-305.