胡向陽， 舒曉春*， 馬 義

(1.中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東珠海 519000;2.暨南大學(xué)生命科學(xué)院，廣東廣州 510632)

紫檀芪對應(yīng)激負(fù)荷具有高脂血癥模型小鼠血脂及免疫功能的影響

胡向陽1， 舒曉春1*， 馬 義2

(1.中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東珠海 519000;2.暨南大學(xué)生命科學(xué)院，廣東廣州 510632)

目的 觀察紫檀芪對應(yīng)激負(fù)荷具有高脂血癥模型小鼠血脂及免疫功能的影響。方法 建立應(yīng)激負(fù)荷+高脂血癥小鼠模型，將28只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為4組:正常對照組、模型對照組、非諾貝特組、紫檀芪組，檢測各組小鼠血脂水平及脾臟T淋巴細(xì)胞亞群的變化。結(jié)果 與模型對照組比較，紫檀芪組小鼠血清TC、TG、LDL-C量降低;脾臟CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平升高。與非諾貝特組比較，紫檀芪組小鼠血清TG、LDL-C量降低，脾臟CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平升高。結(jié)論 紫檀芪對應(yīng)激負(fù)荷+高脂血癥模型小鼠血脂及免疫功能具有一定的干預(yù)作用。

紫檀芪;應(yīng)激;高脂血癥;T淋巴細(xì)胞亞群

應(yīng)激負(fù)荷時機(jī)體產(chǎn)生系列的防御反應(yīng)，涉及到神經(jīng)、內(nèi)分泌及免疫等生理功能，研究發(fā)現(xiàn)，持續(xù)的應(yīng)激負(fù)荷會使小鼠腸系膜脂肪酶活性降低，導(dǎo)致機(jī)體血脂代謝紊亂［1］。紫檀芪(Pterostilbene)是白藜蘆醇衍生物，在藍(lán)莓、黑莓等漿果中含量豐富，具有預(yù)防氧化應(yīng)激反應(yīng)、抗真菌、抗細(xì)胞增殖等作用［2-3］。非諾貝特是氯貝丁酸衍生物類血脂調(diào)節(jié)藥，通過抑制極低密度脂蛋白和三酰甘油的生成并同時使其分解代謝增多，降低血低密度脂蛋白、膽固醇和三酰甘油，還具有抗氧化和抗應(yīng)激作用。本實(shí)驗(yàn)選用非諾貝特作為對照藥物，對紫檀芪在應(yīng)激負(fù)荷具有高脂血模型小鼠血脂及免疫功能影響進(jìn)行初步的研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康昆明小鼠，雄性，體質(zhì)量(20±3)g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號:粵檢證字2009B570，室溫，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于本實(shí)驗(yàn)。

1.2 試劑與儀器 紫檀芪，日本富士株式會社，98%，HPLC，批號:147536- 200932;非諾貝特膠囊(商品名:力平之，法國利博福尼制藥公司，規(guī)格:200 mg，編號:B1420103061，);非諾貝特膠囊、紫檀芪臨用前以生理鹽水溶解，質(zhì)量濃度為1 mg/mL。膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒(南京建成生物試劑公司);抗小鼠CD3、CD4、CD8等單克隆抗體試劑盒(浙江東甌生物工程有限公司)。全自動生化分析儀(日本日立-7060型);FACSCalibur流式細(xì)胞儀(BD-TY1218)。

1.3 動物分組 健康雄性昆明小鼠28只，數(shù)字隨機(jī)分組法分為4組，即正常對照組、模型對照組、非諾貝特組、紫檀芪組。

1.4 動物模型制備 除正常對照組外，參照Bozoky［4］等方法建立小鼠高脂血模型，小鼠腹腔注射10%泰洛沙泊溶液3 mL/kg，禁食12 h后進(jìn)行試驗(yàn)。非諾貝特組、紫檀芪組均以10 mg/kg劑量灌胃，正常對照組、模型對照組則以等體積生理鹽水灌胃。參照文獻(xiàn)方法［5］，除正常對照組外，其余各組小鼠在給藥后2 h，放進(jìn)小鼠束縛裝置，束縛應(yīng)激負(fù)荷12 h，束縛應(yīng)激期間小鼠禁食禁水，連續(xù)4周。動物處死前禁食12 h，腹腔靜脈取血，分離血清，取出脾臟。

1.5 血脂檢測 將新鮮血液制成血清后，使用全自動生化分析儀，檢測 TC、TG、LDL-C、HDL-C 的水平。

1.6 脾臟T淋巴細(xì)胞亞群的檢測 將脾臟置于玻璃勻漿器中，添加PBS溶液研磨，4℃ 1 000 r/min離心10 min，棄上清液，加入紅細(xì)胞裂解液，混勻，靜置5 min后加PBS溶液終止裂解反應(yīng)，離心5 min，棄上清液，PBS溶液調(diào)整脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)為5×106個/mL，取流式細(xì)胞分析專用管，每管加入細(xì)胞懸液100 μL。每個樣本制備3管，分別加入CD3、CD4、CD8抗體，室溫避光孵育30 min后，各管加入500 μL PBS溶液，振蕩混勻后上流式細(xì)胞儀分析。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS14.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)測量資料的方差分析，定量指標(biāo)以(±s)表示，方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠血脂情況的變化 與正常對照組比較，各組小鼠血清TC、TG、LDL-C量均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05);模型對照組HDL-C量降低(P＜0.05)。與模型對照組比較，非諾貝特組、紫檀芪組小鼠血清 TC、TG、LDL-C量均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05)，兩組HDL-C量均升高(P＜0.05)。與非諾貝特組比較，紫檀芪組小鼠血清 TG、LDL-C量降低(P＜0.05)，TC、HDL-C量無顯著差異(P＞0.05)。見表1。

表1 各組小鼠血脂情況比較(n=7，±s)

注:與正常對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;與模型對照組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0. 01;與非諾貝特組比較，▲P ＜0.05。

組別 TG/(mmol/L) TC/(mmol/L) HDL-C/(mmol/L) LDL-C/(mmol/L)正常對照組0.62 ±0.13 1.54 ±0.17 1.28 ±0.30 0.49 ±0.12模型對照組 3.46±1.07＊＊ 5.18±0.43＊＊ 0.83±0.11* 2.75±0.33＊＊非諾貝特組 1.69±0.30＊△△ 2.48±0.17＊△△ 1.03±0.24△ 0.76±0.23＊△△紫檀芪組 1.12 ±0.28＊△△▲ 2.25±0.14＊△△ 1.27±0.16△ 1.05±0.22＊＊△△▲

2.2 各組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞亞群的變化 與正常對照組比較，模型對照組小鼠脾臟 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均顯著降低(P＜0.01);非諾貝特組 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05);紫檀芪組 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05);紫檀芪組CD3+變化沒有差異(P＞0.05)。與模型對照組比較，非諾貝特組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+無顯著差異(P＞0.05);紫檀芪組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有顯著升高(P＜0.01)。與非諾貝特組比較，紫檀芪組 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05)。見表2。

表2 各組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞亞群的變化比較(n=7，±s)

表2 各組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞亞群的變化比較(n=7，±s)

注:與正常對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;與模型對照組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0. 01;與非諾貝特組比較，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01。

組別 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+/%正常對照組31.46 ±2.15 17.21 ±3.28 9.27 ±1.39 1.64 ±0.11模型對照組 20.53±3.06＊＊ 9.37±1.14＊＊ 5.22±1.51＊＊ 0.73±0.12＊＊非諾貝特組 22.37±1.26* 8.15±1.33＊＊ 6.32±0.43* 0.80±0.05＊＊紫檀芪組 36.14±3.11△△▲ 27.18±2.12＊＊△△▲▲ 13.61±1.52＊△△▲▲ 2.37±0.11＊△△▲▲

3 討論

應(yīng)激是機(jī)體對內(nèi)外環(huán)境刺激的反應(yīng)，應(yīng)激對機(jī)體的影響研究越來越受到重視。血脂代謝包括外源性代謝途徑和內(nèi)源性代謝途徑，脂肪細(xì)胞本身就是一個內(nèi)分泌器官，能分泌脂肪細(xì)胞因子、激素或其他調(diào)節(jié)物［6］。李廣群等［7］研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激負(fù)荷通過下丘腦-垂體-腎上腺軸和植物神經(jīng)系統(tǒng)的交感神經(jīng)，對血脂代謝進(jìn)行神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)，進(jìn)而影響動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。應(yīng)激可引起機(jī)體一系列非特異性神經(jīng)-內(nèi)分泌反應(yīng)，長期的應(yīng)激負(fù)荷能破壞免疫器官的正常結(jié)構(gòu)，在脾臟和胸腺中可見典型凋亡細(xì)胞［8］。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞各亞群水平間的相對穩(wěn)定是機(jī)體發(fā)揮正常免疫功能的重要基礎(chǔ)，CD3+T細(xì)胞反映總T淋巴細(xì)胞水平，CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及CD4+T/CD8+T比值在一定程度上表示輔助性T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞及其比值，CD4+T/CD8+T比值減少是機(jī)體免疫缺陷的重要指征［9］。

本實(shí)驗(yàn)在應(yīng)激負(fù)荷+高脂血癥小鼠模型基礎(chǔ)上，選用非諾貝特膠囊作為對照藥物，研究紫檀芪對束縛應(yīng)激條件下高脂血模型小鼠血脂及免疫功能的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):與模型對照組比較，紫檀芪組小鼠血清TC、TG、LDL-C含量均有不同程度的降低;脾臟 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有顯著升高。與非諾貝特組比較，紫檀芪組小鼠血清高血脂水平降低，脾臟T淋巴細(xì)胞免疫指標(biāo)有不同程度的升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在應(yīng)激負(fù)荷及高血脂條件下，血脂代謝與脾臟T淋巴細(xì)胞免疫之間可能存在著一定的相互影響或作用，但其應(yīng)激負(fù)荷-血脂代謝之間的調(diào)控或作用機(jī)制尚不明確，紫檀芪對其調(diào)控或作用機(jī)制的作用途徑也需要進(jìn)一步研究。

［1］Kurihara H，Yao XS，Nagai H.Anti-stress effect of BRAND’s essence of chicken(BEC)on plasma glucose levels in mice loaded with restraint stress［J］.J Health Sci，2006，52(3):252-258.

［2］王曉琴，王振華，劉 梅，等.氧化還原調(diào)控在紫檀芪誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑中的作用［J］.中國藥理學(xué)通報，2010，26(9):1184-1186.

［3］Virgili F，Marino M.Regulation of celluar signals from nutritional molecules:a specific role for phytochemicals，beyond antioxidant activity［J］.Free Radic Biol Med，2008，45(9):1205-1216.

［4］Bozoky Z，Balogh L，Mathe D，etal.Evaluation of rat and rabbit sera lipoproteins in experimentally induced hyperlipidemia by analytical ultracentrifugation［J］.Eur Biophys J，2006，3(35):205-213.

［5］何蓉蓉，栗原博，寶 麗，等.王老吉涼茶對氧化應(yīng)激負(fù)荷小鼠脂代謝的影響［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2008，14(10):31-33.

［6］陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)［M］.7版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:808.

［7］李廣群.行為個性及情感因素對冠心病患者血脂代謝的影響［J］.中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2006，22(5):533.

［8］趙福東.應(yīng)激時內(nèi)分泌變化對免疫功能影響的研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué):內(nèi)分泌學(xué)分冊，2005，25(4):241-242.

［9］白云峰，袁 芳，連玉龍，等.慢性應(yīng)激大鼠T淋巴細(xì)胞免疫功能的改變［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，33(4):369-371.

R285.5

B

1001-1528(2011)08-1400-03

2011-02-28

廣東省中醫(yī)藥管理局科研基金(A2010104)

胡向陽(1975—)，博士，主治醫(yī)師，主要從事腦血管及神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究。Tel:(0756)2528851，E-mail:aikongzhi@163.com

*通信作者:舒曉春(1965—)，副主任醫(yī)師，主要從事內(nèi)分泌及代謝疾病研究。Tel:(0756)2528622，E-mail:zhshuxc@163.com