毛春芹， 謝 輝， 池玉梅， 陸兔林， 王 靜， 胡 芳， 李爭艷

(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京 210046)

高效液相色譜法測定巖黃連藥材中3種生物堿

毛春芹， 謝 輝， 池玉梅， 陸兔林*， 王 靜， 胡 芳， 李爭艷

(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京 210046)

目的 建立巖黃連藥材中脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的測定方法，為完善藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。方法 色譜柱為Agilent XDB C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈 －0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液 (21∶79)，柱溫30℃，檢測波長347 nm，體積流量1.0 mL/min。結(jié)果 脫氫卡維丁的線性范圍為15.015～90.09 μg/mL(r=0.999 7)，平均回收率為99.01%(RSD=2.97%);鹽酸巴馬汀的線性范圍為14.97 ～89.82 μg/mL(r=0.999 9)，平均回收率為 100.48%(RSD=2.73%);鹽酸小檗堿的線性范圍為 3.55 ～28.40 μg/mL(r=0.999 7)，平均回收率為 99.67%(RSD=2.54%)。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，可用于巖黃連藥材的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法;脫氫卡維丁;鹽酸巴馬汀;鹽酸小檗堿;巖黃連藥材

巖黃連為罌粟科植物石生黃堇Corydalis saxicolaBunting的全草，是黔、桂高寒山區(qū)珍貴的中草藥材［1］。本品味苦、性涼，具有清熱解毒、利濕、止痛止血之功效［2］，主治肝炎、口舌糜爛、火眼、目豁、痢疾、腹瀉、腹痛、痔瘡出血等［3］。巖黃連中主要有效成分是以脫氫卡維丁為代表的生物堿類化合物［4］，而這類化合物具有潛在的抗HBV活性［5］和肝保護(hù)活性［6］。有文獻(xiàn)［7-8］報(bào)道使用高效液相色譜法測定巖黃連藥材中脫氫卡維丁，但未見采用高效液相色譜法同時(shí)測定3種生物堿的文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜法定量測定巖黃連藥材中脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿，該法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好及回收率高，可為該藥材三種生物堿分別定量測定提供可靠實(shí)驗(yàn)方法。該法亦適用于巖黃連藥材質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

Agillent 1100高效液相色譜儀，包括四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、真空脫氣機(jī)，紫外檢測器。巖黃連藥材(批號(hào):20070302、20070305、20070309)。脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所)。乙腈為色譜純(TEDIA)，水為重蒸水，其他試劑皆為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［9-12］Agilent XDB C18色譜柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈 －0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液 (21∶79);柱溫30℃;檢測波長347 nm;體積流量 1.0 mL/min;進(jìn)樣量 10 μL;采樣時(shí)間50min。在上述色譜條件下的對(duì)照品、供試品色譜分離結(jié)果見圖1。各組分按保留時(shí)間先后出峰順序?yàn)槊摎淇ňS丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿，3種生物堿得到良好分離。以鹽酸小檗堿計(jì)算理論塔板數(shù)為4 000。

圖1 供試品(A)和對(duì)照品(B)色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含脫氫卡維丁1.001 mg、鹽酸巴馬汀0.998 mg和鹽酸小檗堿0.710 mg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取巖黃連藥材粉碎，過20目篩，取粉末約0.2 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入甲醇40 mL，超聲提取60 min，放冷，用甲醇定容，搖勻，過微孔濾膜(0.45 μm)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液，用甲醇配制成混合對(duì)照品溶液。其中，脫氫卡維丁濃度為 15.015、30.03、45.045、60.06、75.075、90.09 μg/mL、鹽酸巴馬汀濃度為 14.97、29.94、44.91、59.88、74.85、89.82 μg/mL、鹽酸小檗堿濃度為3.55、7.1、10.65、14.2、21.3、28.40 μg/mL，分別吸取不同濃度對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)行分析測定。以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程分別如下脫氫卡維丁:Y=32 155.27X－25.79，r=0.999 7，線性范圍 15.02～90.09 μg/mL。鹽酸巴馬汀:Y=36 735.09X+0.29，r=0.999 9，線性范圍:14.97 ～89.82 μg/mL。鹽酸小檗堿:Y=37 722.87X－0.647 1，r=0.999 7線性范圍:3.55 ～28.4 μg/mL。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取脫氫卡維丁90.09 μg/mL、鹽酸巴馬汀 89.82 μg/mL、鹽酸小檗堿28.40 μg/mL的混合對(duì)照品溶液 10 μL，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，以3種組分峰面積分別計(jì)算，結(jié)果表明脫氫卡維丁峰面積的RSD為2.53%，鹽酸巴馬汀峰面積的RSD為0.42%，鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.24%。表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取巖黃連藥材(批號(hào):20070302)按上述供試品溶液的制備方法平行制備6份，并按上述色譜條件測定，測得脫氫卡維丁平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.98%，RSD為2.35%;鹽酸巴馬汀平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.50%，RSD為2.02%;鹽酸小檗堿平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.16%，RSD為2.03%;結(jié)果表明，在同一條件下，6次測得樣品脫氫卡維丁等成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)一致，本方法重復(fù)性好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重復(fù)性試驗(yàn)的1號(hào)樣品每隔2 h測定1次，共測定6次。結(jié)果脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的RSD分別為0.76%、1.22%、2.29%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的巖黃連藥材粉末(批號(hào):20070302)0.1 g，共9份，置50 mL量瓶中，分別加入等同于樣品中脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿量 80%、100%、120%的對(duì)照品，按上述供試品溶液的制備方法制備樣品，測定。結(jié)果見表1～3。樣品的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果良好。

2.9 樣品測定 取本品3批樣品，按2.3項(xiàng)下所述方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果見表4。

3批藥材的測定結(jié)果表明，脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿此3個(gè)生物堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)總和分別為 1.73%、1.69%、1.78%。

3 討論

在文獻(xiàn)報(bào)道中，關(guān)于巖黃連藥材的測定的指標(biāo)只有脫氫卡維丁，但在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)巖黃連藥材中除含有脫氫卡維丁外，還有幾種已知的化學(xué)成分［13］，并且中國藥品生物制品檢定所有提供，如鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿，另發(fā)現(xiàn)在同一液相條件下，可將脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿共同作為質(zhì)量控制的指標(biāo)。對(duì)巖黃連總堿膠囊中三指標(biāo)進(jìn)行全面控制，可準(zhǔn)確反映巖黃連總堿膠囊的質(zhì)量。研究結(jié)果表明，本方法操作簡便、準(zhǔn)確、可行，符合相關(guān)技術(shù)要求。

表1 脫氫卡維丁加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 鹽酸巴馬汀加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 鹽酸小檗堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表4 樣品測定結(jié)果

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Quantitative determination of alkaloids inCorydalis saxicolaBunting by HPLC

MAO Chun-qin， XIE Hui， CHI Yu-mei， LU Tu-lin*， WANG Jing， HU Fang， LI Zheng-yan

(Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210046，China)

AIMTo establish an HPLC method for simultaneously determining dehydrocavidine，palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride inCorydalis saxicolaBunting.METHODSAn Agilent XDB C18column(150 mm ×4.6 mm，5 μm)was used ，the acetonitrile－0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution(21∶79)as mobile phase，the column temperature was at 30℃，the detection wavelength was set at 347 nm，the flow rate was 1.0 mL/min.RESULTSThe liner range of dehydrocavidine was 15.015 － 90.09 μg/mL(r=0.999 7)and the average recovery was 99.01%(RSD=2.97%).The liner range of palmatine hydrochloride was 14.97 －89.82 μg/mL(r=0.999 9)and the average recovery rate was 100.48%(RSD=2.73%).The liner range of berberine hydrochloride was 3.55 － 28.40 μg/mL(r=0.999 7)and the average recovery rate was 99.67%(RSD=2.54%).CONCLUSIONThe method is accurate，sensitive and reliable，and can be used to the quality control ofCorydalis saxicolaBunting.

HPLC;dehydrocavidine;palmatinehydrochloride;berberinehydrochloride;Corydalis saxicolaBunting

R284.1

A

1001-1528(2011)08-1368-03

2010-11-12

毛春芹(1963—)，女，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:mcq63@163.com

*通信作者:陸兔林，男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師。E-mail:lutuling2005@126.com