劉紅淼，楊繼章，王云志，李艷玲，康麗娟（1.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，石家莊市 05001；.河北醫(yī)科大學(xué)，石家莊市 050017；.河北醫(yī)科大學(xué)制藥廠，石家莊市 050017）

香桂化濁膠囊處方為臨床多年應(yīng)用的經(jīng)驗方，由廣藿香、土大黃、肉桂等藥材組成。其療效確切、可靠，具有芳香醒脾，清化濕濁之功，主治因各種疾病后邪留未盡，脾胃內(nèi)傷所致長期大便溏泄或有黏液、腹脹腸鳴、納呆或有低熱、舌苔白膩或白滑或見微黃、脈濡緩。主要用于慢性腸炎、真菌感染致腸炎屬脾虛濕困證的治療。關(guān)于本方制劑工藝的研究已進(jìn)行了報道[1，2]。為了有效控制其質(zhì)量，筆者采用薄層色譜（TLC）法對方中土大黃、肉桂分別進(jìn)行了定性鑒別，采用氣相色譜（GC）法對方中君藥廣藿香中百秋里醇的含量進(jìn)行了測定，建立了準(zhǔn)確、可靠、專屬性強(qiáng)的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

GC-4000A型GC儀、FID檢測器、ANASTAR色譜工作站（北京東西分析儀器有限公司）；RQ2200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率:100 W，工作頻率:40 kHz）。

香桂化濁膠囊和陰性樣品均為河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院自制；百秋李醇（批號:110772-200404）、土大黃苷（批號:110794-200103）、桂皮醛（批號:111710-200513）對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供；薄層層析硅膠G（青島海洋化工有限公司）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 土大黃的TLC鑒別[3]取本品內(nèi)容物約3 g，加甲醇20mL，超聲處理10min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液；同法制備陰性對照溶液；另取土大黃苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。照TLC法[4]試驗，吸取上述溶液各3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（25∶3∶2.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。土大黃的TLC見圖1。

2.1.2 肉桂的TLC鑒別[4]取本品內(nèi)容物約6 g，加入無水乙醇20mL，超聲處理10min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2mL使溶解，作為供試品溶液；同法制備陰性對照溶液；另取桂皮醛對照品2μL，加無水乙醇定容至2mL，作為對照品溶液。照TLC法[4]試驗，吸取供試品、陰性對照溶液各10μL，對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（85∶15）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，熱風(fēng)吹干，日光下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。肉桂的TLC見圖2。

2.2 含量測定[5～7]

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗檢測器:氫火焰離子化檢測器；色譜柱:OV-17彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25mm）；氫氣:0.05 MPa；空氣:0.2 MPa；載氣（N2）:0.17 MPa；柱前壓:0.14 MPa；分流比:26∶1；進(jìn)樣口溫度:260℃；檢測器溫度:280℃；柱溫:采用程序升溫（初始溫度160℃，以4℃·min-1升至180℃，再以1℃·min-1升至184℃，保持4min，最后以2℃·min-1升至194℃）。在選定色譜條件下，百秋李醇與樣品中其他組分色譜峰可達(dá)到基線分離，與相鄰色譜峰的分離度＞1.5；按百秋李醇峰計算，理論板數(shù)不低于50000，拖尾因子為1.04；陰性對照無干擾。色譜見圖3。

圖1 土大黃的TLC1～3.供試品；4.土大黃苷對照品；5.陰性對照Fig 1 TLC of Nepal Dock Root1～3.test samples；4.rhaponticin control；5.negative control

2.2.2 對照品溶液的制備 取百秋李醇對照品適量，精密稱定，加石油醚（60～90℃）制成每1mL含1.3mg的溶液，即得。

圖2 肉桂的TLC1～3.供試品；4.桂皮醛對照品；5.陰性對照Fig 2 TLC of Cinnamomum cassia1～3.test samples；4.cinnamaldehyde control；5.negative control

圖3 氣相色譜圖A.陰性對照；B.百秋里醇對照品；C.供試品Fig 3 GC chromatogramsA.negative control；B.patchouli alcohol control；C.test sample

2.2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，精密稱定，研細(xì)，精密稱取約3 g，照揮發(fā)油測定法[4]，測定管中加入石油醚（60～90℃）5mL，加熱提取2 h，放冷，將測定管中提取液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，分取醚層，用石油醚（60～90℃）萃取水層3次（10、5、5mL），合并醚層，用石油醚（60～90℃）定容至25mL量瓶中，搖勻，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 取陰性樣品，按“2.2.3”項下方法制備陰性對照溶液。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取百秋李醇對照品19.14mg，用石油醚（60～90℃）溶解并定容至10mL，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，分別置于 2mL棕色量瓶中，加石油醚（60～90℃）定容，搖勻。精密吸取2μL，在GC儀上進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積積分值（Y）對樣品進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝165074X－793（r＝0.9999，n＝5）。結(jié)果表明，百秋李醇進(jìn)樣量在0.7656～3.8280μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液2μL，在GC儀上重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD＝1.26%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批（批號:20100601）樣品的供試品溶液適量，分別于0、1、2、5、8、24h進(jìn)樣測定。結(jié)果，RSD＝0.84%（n＝6），表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗 取同一批（批號:20100602）樣品適量，按“2.2.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果，平均含量為11.81mg·g-1，RSD＝1.18%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取已知百秋李醇含量的香桂化濁膠囊樣品內(nèi)容物1.5 g，精密稱定，分別精密加入不同量百秋李醇對照品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.2.10 樣品含量測定 取3批香桂化濁膠囊樣品（批號:20100601、20100602、20100603），按上述方法制備供試品溶液并測定樣品中百秋李醇的含量。結(jié)果，每粒樣品分別含百秋李醇4.84、4.68、4.24mg。根椐此結(jié)果，同時考慮藥材的來源以及制劑生產(chǎn)、貯藏等因素，以每粒膠囊0.39 g裝量計，暫定本品每粒含百秋李醇（C15H26O）不得少于4.0mg。

3 討論

根據(jù)土大黃苷的理化性質(zhì)，參考相關(guān)文獻(xiàn)，經(jīng)對超聲提取溶劑、展開劑的選擇，最后選定甲醇為提取溶劑，乙酸乙酯-甲醇-水（25∶3∶2.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。檢視結(jié)果表明，該法分離效果較好，供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。依此TLC條件對3批樣品進(jìn)行鑒別，方法重復(fù)性好，具有專屬性與可行性。

根據(jù)本品的性質(zhì)特點，提取百秋李醇不宜選用石油醚、氯仿為溶劑，筆者選用了無水乙醇、甲醇、75%乙醇作溶劑進(jìn)行超聲提取，結(jié)果用以上溶劑提取或乳化現(xiàn)象嚴(yán)重，或提取率低，或所含雜質(zhì)較多，所以本品不易用超聲提取法進(jìn)行前處理。筆者參照揮發(fā)油測定法[4]，以石油醚為萃取劑萃取，并對蒸餾時間進(jìn)行了考察。結(jié)果，提取2 h以上，百秋李醇含量已恒定，故在供試品溶液制備時選擇提取時間為2 h。

[1]劉紅淼，姜少灝，張振杰.香桂化濁膠囊中揮發(fā)油的包合工藝研究[J].中國藥房，2010，21（47）:4449.

[2]劉紅淼，房桂珍，李艷玲.香桂化濁膠囊成型工藝研究[J].中國藥房，2011，22（11）:990.

[3]王 穎，張長順，劉春峰.薄層色譜法檢查牛黃解毒片中土大黃甙[J].黑龍江醫(yī)藥，2000，13（4）:203.

[4]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:127、附錄34、附錄63.

[5]黃月純，魏 剛.氣相色譜法測定廣藿香中百秋里醇的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17（4）:503.

[6]劉 青，江 波，于宗淵.氣相色譜法測定廣藿香揮發(fā)油中廣藿香醇的含量[J].山東醫(yī)藥，2007，47（2）:3.

[7]喻良文，鐘燕珠，李 薇，等.貯藏時間對廣藿香揮發(fā)油含量的影響考察[J].中國藥房，2008，19（24）:1870.